一种用于IgA肾病检测的系统、方法及方法的建立技术方案

本发明专利技术公开了一种用于IgA肾病检测的系统、方法及方法的建立，其中，所述建立方法包括：S10、采集IgA型肾病患者、非IgA型肾病的肾病患者以及健康者的尿液；S20、检测尿液中miRNA的表达量；S30、利用2-ΔΔct相对定量法比较所述miRNA的表达量；S40、对所述miRNA的表达量进行ROC曲线分析。本发明专利技术的检测样本是尿液，而不是肾组织，最明显的优势就是具有无创伤检测的特点，由于检测时无明显禁忌症，可以适用于所有患者的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医疗诊断
，尤其是涉及一种用于IgA肾病检测的系统、方法 及方法的建立。
技术介绍
目前，IgA肾病诊断的主要的检测方法是肾活检，特征是肾小球系膜区IgA团块样 或颗粒样沉积，肾活检时患者呈俯卧位，穿刺针在超声的引导下于患者背部进针，快速取出 肾组织，在一系列固定和染色后在光学显微镜或电子显微镜下观察肾脏变化情况，以诊断 肾病类型和判断预后，但肾活检存在着至少下列所述的技术缺点： 1、肾活检为创伤性检查，在早期患者尿常规正常的情况下，不推荐进行肾活检。在 患者病情加重需要重新评估肾脏病理时，多次穿刺不仅加重肾损伤，还有合并出血、感染等 并发症的风险，难以反复进行。 2、肾活检有许多禁忌症。如绝对禁忌症、出血倾向明显、重度1?血压、精神病或不 配合者、孤立肾、小肾等；相对禁忌症，肾脏感染呈活动期(如活动性肾盂肾炎、肾结核、肾脓 肿)、肾肿瘤或肾动脉瘤、多囊肾、过度肥胖、慢性肾功能衰竭、重度腹水、心功能衰竭、妊娠 等。因此，不是每个肾脏病患者都适合做肾活检检查。 3、肾活检还有许多的并发症。最常见的如血尿，肾周围脓肿，腰痛及腰部不适，发 热，动静脉瘘等。 4、肾活检从准备穿刺到得到病理结果耗时较长，准备步骤较多，反应较慢。由于 是有创检查，患者需要术前停用抗凝药，对于有心血管疾病必须长期使用抗凝药的患者不 利，且患者术后必须躺在床上24小时绝对卧床，不得下床走动。而从穿刺出肾组织到固定、 石蜡包埋、免疫组化染色，直到最后显微镜下观察得出病理结果，一般需要5-7天时间，对 于进展较快的急进性肾小球肾炎等肾病往往会造成诊断不及时，错诊或漏诊的情况时有发 生。 因此，目前IgA肾病的诊断技术有待进一步改进。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是建立一种用于IgA肾病检测方法，旨在解决现有技术中的检 测时对机体创伤大、检测时间长、适用范围小、检测步骤复杂的技术问题。 本专利技术的另外一个目的是提供一种用于IgA肾病检测方法，旨在提供一种无机体 创伤、检测时间短、适用范围大、检测步骤简单的IgA肾病检测方法。 本专利技术的又一个目的是提供一种用于IgA肾病检测的系统，旨在提供一种适用于 无机体创伤、检测时间短、适用范围大、检测步骤简单的IgA肾病检测方法的系统。 本专利技术提出了一种用于IgA肾病检测方法的建立，包括： S10、采集IgA型肾病患者、非IgA型肾病的肾病患者以及健康者的尿液； S20、检测尿液中miRNA的表达量； S30、利用相对定量法比较所述miRNA的表达量； S40、对所述miRNA的表达量进行ROC曲线分析。 可选的，所述 miRNA 为 miRNA-25、miRNA-144 以及 miRNA-486 中的至少一种。 可选的，检测miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486的表达量是通过选自荧光定量 PCR、Taqman探针以及LightCycle探针中的至少一种方法进行的。 可选的，所述荧光定量PCR为SYBR Green荧光定量PCR。 可选的，MiRNA-25 的引物为：CAUUGCACUU⑶CUCGGUCUGA ; 和 / 或，MiRNA-144 的引物为：UACAGUAUAGAUGAUGUACU ; 和 / 或，MiRNA-486 的引物为：UCCUGUACUGAGCUGCCCCGAG。 可选的，还包括管家基因的引物为：AAAGCAGGCUUUAAAGGAACCU。 可选的，miRNA-25的临界值为0. 058 ; 和 / 或，miRNA-144 的临界值为 0· 007 ; 和 / 或，miRNA-486 的临界值为 0· 025。 本专利技术的另外一个目的是提出一种用于IgA肾病检测方法，所述方法是根据以上 所述的方法建立的方法，包括以下步骤： 采集尿液； 检测尿液中miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486中至少一个的表达量； 判断miRNA-25、miRNA-144或miRNA-486的表达量是否高于其各自的所述临界值。 可选的，所述荧光定量PCR为SYBR Green荧光定量PCR。 本专利技术的又一个目的是提出一种用于IgA肾病检测的系统，所述用于IgA肾病检 测的系统利用以上所述的用于IgA肾病检测的方法进行检测，所述系统包括： 尿液米集装置，以米集尿液； miRNA检测装置，以检测尿液中miRNA的表达量。 根据本专利技术的用于IgA肾病检测方法的建立，可以取得以下所述的至少一种积极 技术效果： 1、可以有效地建立一种用于IgA肾病检测方法。 2、由于检测的样本是尿液，而不是肾组织，所以本专利技术的最明显的优势就是具有 无创伤的特点，可以根据疾病的病情变化需要反复或连续留取和测试。另外，所需留取尿液 不会给患者带来任何损伤和风险，非常安全可靠。 3、由于检测时无明显禁忌症，可以适用于所有患者的检测。 4、由于所用的光定量PCR、Taqman探针以及LightCycle探针的方法已经是常见的 技术手段，并且具有检测准确、安全可靠、简单易行等的优点，一般的医护人员，例如乡镇和 社区的基层医护人员，经1周左右的培训就可完全掌握该方法，大大缩短了培训周期，有效 解决了现有肾组织活检对于医院和医护人员要求严格限制的问题，从而使本专利技术具有更广 阔的应用空间和巨大的推广价值。 5、与现有肾组织活检的3000元的费用相比，本专利技术所用试剂盒一套仅需5700元 左右，可反复使用50次，从而大大降低了患者的诊断费用。 6、现有肾组织活检从患者入院准备到最后给出诊断报告周期大约为1周，而本发 明能在24小时内给出结果，且不影响患者的工作、学习和生活，不仅大大缩短了患者等待 时间，也为患者争取到了及时对症治疗的宝贵时间，可以有效防止错诊或漏诊情况的发生。 7、由于患者的尿液简单易得，且容易保存，还适合偏远地区大量筛查患者时的使 用。【附图说明】 本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中： 图1是根据本专利技术实施例中的用于IgA肾病检测方法的建立的方法流程示意图； 图2是根据本专利技术实施例中的IgA肾病患者与健康者对照组间MiRNA-25表达 量的比较图，在图中，横坐标为分组，1为健康者对照组，2为IgA肾病患者组,纵坐标为 MiRNA-25的相对表达量； 图3是根据本专利技术实施例中的IgA肾病患者与健康者对照组间MiRNA-144表达 量的比较图，在图中，横坐标为分组，1为健康者对照组，2为IgA肾病患者组,纵坐标为 MiRNA-144的相对表达量； 图4是根据本专利技术实施例中的IgA肾病患者与健康者对照组间MiRNA-486表达 量的比较图，在图中，横坐标为分组，1为健康者对照组，2为IgA肾病患者组,纵坐标为 MiRNA-486的相对表达量； 图5是根据本专利技术实施例中的IgA肾病患者与非IgA型肾病的肾病患者对照组间 MiRNA-25表达量的比较图，在图中，横坐标为分组，1为IgA肾病患者组，2为非IgA型肾病 的肾病患者对照组，纵坐标为MiRNA-25的相对表达量； 图6是根据本专利技术实施例中的IgA肾病患者与非IgA型肾病的肾病患者对照组间 MiRNA-144表达量的比较图，在图中，横坐标为分组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于IgA肾病检测方法的建立，其特征在于，包括：S10、采集IgA型肾病患者、非IgA型肾病的肾病患者以及健康者的尿液；S20、检测尿液中miRNA的表达量；S30、利用2‑ΔΔct相对定量法比较所述miRNA的表达量；S40、对所述miRNA的表达量进行ROC曲线分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡广研，陈香美，段智余，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京;11