本发明专利技术公开了一种蓝靛果提取物，按质量百分含量计，该蓝靛果提取物的组成为：矢车菊素-3-葡萄糖苷72.4％～87.5％，矢车菊素-3-芸香糖苷1.4％～9.6％，芍药素-3-葡萄糖苷2.7％～7.1％，矢车菊-3,5-二葡萄糖苷2.1％～3.7％，芍药素-3-芸香糖苷1.3％～3.4％，天竺葵素-3-葡萄糖苷2.3％～3.9％。提取步骤为：蓝靛果鲜果依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解后，离心分离得到上清液，所述上清液经超滤膜过滤后截留分子量大于5kDa的成分，滤出液经真空冷冻干燥，得到所述的蓝靛果提取物。本发明专利技术还公开了该蓝靛果提取物在制备肝脏细胞氧化损伤的抑制剂中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种蓝靛果提取物及其在制备肝脏细胞氧化 损伤抑制剂中的应用。
技术介绍
丙烯酰胺（Acrylamide，AA)俗称丙毒，是一种具有神经毒性和潜在致癌性的化学 物质，它可作为化工原料，而富含淀粉的食品在热加工过程中也会产生丙烯酰胺。研宄表 明，丙烯酰胺具有神经毒性、遗传毒性以及致癌性，国际癌症研宄机构（IARC) 1994年对其 致癌性进行了评价，将丙烯酰胺列为2类致癌物（2A)即人类可能致癌物。周继等（周继， 黄红焰，李玉白，刘劭钢，丙烯酰胺毒性与氧化损伤的实验研宄.实用预防医学，2008， 15(2) :537-539)以0. 5,1. 0,1. 5 μ g/kg 3个剂量对SD大鼠每天腹腔注射丙烯酰胺染毒1 次，每周6d，连续3个月，发现高剂量组动物肝脏脏器系数明显增大（p〈0. 05)，血清中丙氨 酸转氨酶（ALT)和天冬氨酸转氨酶（AST)活性明显增加（p〈0. 05);另外，与空白对照组和 溶剂对照组比较，肝、肾中ROS含量未见明显差别（p均>0.05);中、高剂量组丙二醛（MDA) 含量明显升高（P〈〇. 05)，各剂量组超氧化物歧化酶（SOD)活性明显降低（p〈0. 05)。实验发 现丙烯酰胺染毒大鼠，其心、肝、肾均受到一定成都的损伤，同时发现丙烯酰胺具有一定的 氧化损伤作用。 自由基是机体内氧化反应产生的物质，具有很强的氧化性，现代研宄表明，自由基 是引起人体衰老和某些慢性疾病发生的原因之一，当人体内的自由基产生过多或清除过慢 时，就会转而攻击各种细胞器官，损害机体的组织，进而引起慢性疾病及衰老效应并诱发各 种疾病。 因此，研制一种对肝脏损伤有保护作用的物质，尤其是由丙烯酰胺导致的肝脏损 伤有保护作用的物质是很有必要的。 蓝靛果忍冬（Blue honeysuckle)别称蓝靛果、山茄子、黑瞎子果、鸟啄李和羊奶子 等，为忍冬科（Caprifoliaceae)、忍冬属（Lonicera)落叶灌木。蓝靛果果实呈蓝黑色或紫 色，柔软多汁，酸甜略带苦味，营养丰富，富含维生素，多种微量元素及多酚、花色苷等功能 性成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、调节免疫、保护视力、降血脂、抗炎以及促进肝损伤修 复等多种生物活性。 金政等（金政，王启伟，金美善，李相伍.蓝靛果对四氯化碳所致小鼠肝损伤修 复作用的形态学研宄.中国中医药科技，2002,9(1):46-46.)的研宄表明四氯化碳可以 诱导肝脏细胞的损伤，主要是导致小鼠肝组织损伤显示以中央静脉为中心的出血和坏死， 坏死区周围有大量脂肪变性细胞。而蓝靛果提取物会使小鼠肝组织损伤大为减轻，各肝小 叶变性坏死范围缩小，仅表现为少数的灶性坏死和轻度的脂肪变性。四氯化碳会损伤组肝 细胞使糖原减少，而蓝靛果会使糖原损伤基本恢复。四氯化碳还会损伤组琥珀酸脱氢酶活 性显著降低，而蓝靛果提取物则能降低损伤。
技术实现思路
本专利技术公开了一种蓝靛果提取物，模拟人体胃消化的方式，采用胃蛋白酶、胰蛋白 酶等制备得到。该蓝靛果提取物能够有效抵抗丙烯酰胺诱导的氧化损伤。 -种蓝靛果提取物，提取步骤如下： 蓝靛果鲜果依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解后，酶解液经分离得到上清液，所述上 清液经过滤后截留分子量大于5kDa的成分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的蓝靛果 提取物； 以质量百分比计，所述蓝靛果提取物包括： 本专利技术蓝靛果提取物含有人体最终吸收的有效成分，由于采用体外模拟的方式， 最大限度的保留了有效成分，其功能性具有实用性；而通过传统方法提取的蓝靛果产物，进 入人体后，会有部分有效物质被人体消化系统分解消化，因而功能性具有不可预测性，不能 代表进入人体后的真实情况。 作为优选，蓝靛果鲜果经胃蛋白酶酶解的具体步骤为： 蓝靛果鲜果与水等质量混合打浆，加入HCl调节pH = 1. 5~2后得到匀浆，再加 入胃蛋白酶，37°C、200~300rpm下水浴振荡2~3h，得到混合浆液； 进一步优选，所述HCl的浓度为5mol/L ; 所述胃蛋白酶的加入量为5000~7000单位胃蛋白酶/20g匀浆。 作为优选，胰蛋白酶酶解的具体步骤为： 取经胃蛋白酶酶解得到的混合浆液，加入NaOH调节pH = 6,再加入胰液，然后用 NaHCO3调节 pH 至 7. 2 ~7. 5，37 °C，200 ~300rpm 水浴振荡 2 ~3h 后，再经 5000 ~8000rpm 下离心10~15min得到上清液。 进一步优选，所述NaOH的浓度为lmol/L，NaHCOj^浓度为lmol/L ; 所述胰液中胰蛋白酶的含量为5~6mg/mL，胆盐的含量为20~30mg/mL ;所述胰 液的加入量为5mL/18mL混合浆液。 本专利技术还公开了所述蓝靛果提取物在制备肝脏细胞氧化损伤的抑制剂中的新用 途，拓展了蓝靛果的应用领域。 进一步公开了所述的蓝靛果提取物在制备由丙烯酰胺诱导的肝脏细胞氧化损伤 的抑制剂中的应用。 作为优选，所述的抑制剂中蓝靛果提取物的有效剂量为0. 25mg/mL。 丙烯酰胺使肝脏细胞产生氧自由基从而对其造成氧化损伤，本研宄发现，蓝靛果 提取物可以有效减少活性氧的生成，从而抑制丙烯酰胺诱导的肝脏细胞氧化损伤。与金政 等（金政，王启伟，金美善，李相伍.蓝靛果对四氯化碳所致小鼠肝损伤修复作用的形态 学研宄.中国中医药科技，2002,9(1):46-46.)的四氯化碳损伤研宄中，蓝靛果提取物 是直接用水提取，而本实验是采用模拟体外消化的方法提取蓝靛果活性物质，所得蓝靛果 提取物的成分不同。 与现有技术相比，本专利技术具有以下优点： 本专利技术模拟人体胃消化的方式，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶制备蓝靛果提取物。 本专利技术首次发现了蓝靛果提取物能够有效抗丙烯酰胺诱导的氧化损伤，减少活性 氧的生成，是一个具有良好开发前景的化合物； 本专利技术为蓝靛果提取物提供了新的医疗用途，拓展了一个新的应用领域。【附图说明】 图1实施例1为蓝靛果提取物ABTS · +自由基清除能力； 图2实施例2为蓝靛果提取物的FRAP抗氧化实验； 图3实施例2为蓝靛果提取物对丙烯酰胺诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作 用； 图4实施例3为蓝靛果提取物对丙烯酰胺诱导的HepG2细胞活性氧自由基 ROS (DCF荧光）的抑制作用。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，以下列举的仅是本专利技术的具体实施 例，但本专利技术的保护范围并不仅限于此： 实施例1 蓝靛果鲜果与水等质量混合打浆，用5M HCl将蓝靛果匀浆酸化至pH = 2,加入胃 蛋白酶（5000单位胃蛋白酶/20g匀浆），在37°C，200rpm水浴振荡3h，模拟胃消化后，继续 用IM NaOH调pH至6,每18ml混合浆液加入5mL胰液（胰液中胰酶含量为6mg/mL，胆盐含 量为 20mg/mL)，再用 IM NaHCOJjf pH 至 L 2,在 37°C，200rpm 水浴振荡 2h，8000rpm 条件下 离心10min，上清液即为蓝靛果粗提取物。利用Millipore Pellicon超滤系统，将上清液泵 至截留分子量为5kDa的再生纤维素超滤膜表面，收集滤出液，真空冷冻干燥，得到蓝靛果 提取物。 经液相色谱测试可知，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蓝靛果提取物，其特征在于，提取步骤如下：蓝靛果鲜果依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解后，酶解液经分离得到上清液，所述上清液经过滤后截留分子量大于5kDa的成分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的蓝靛果提取物；以质量百分比计，所述蓝靛果提取物包括：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，鲍涛，张凌霞，郑晓冬，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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