组合物及其应用、胎盘的玻璃化冻存剂及制备方法技术

本发明专利技术涉及医学领域，特别涉及组合物及其应用、胎盘的玻璃化冻存剂及制备方法。为了提高玻璃化冻存的胎盘组织复苏后的活率，本发明专利技术对玻璃化的冻存方法进行了优化，主要是对其配方进行改良。本发明专利技术的玻璃化冻存液冻存的胎盘组织，复苏后细胞分离培养效率更高，细胞增殖更为迅速，细胞收获量更大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学领域，特别涉及组合物及其应用、胎盘的玻璃化冻存剂及制备方 法。
技术介绍
在生命科学研宄和医疗实践过程中，所研宄的对象是有生命的细胞、组织或器官。 因为科研或治疗的需要，经常需要保存这些细胞、组织或器官的生物活性，这就要求采用合 适的方法对它们进行保存。深低温保存时最常见的方法。细胞、组织或器官虽然能在低温下 长期保存，但是低温冻存中冷冻损伤是必然的，低温保存的目的就是将低温损伤减到最小， 使保存后细胞、组织或器官的结构、遗传性能和功能不发生改变。随着对细胞以及组织低温 损伤机制认识的逐步加深，发现对其低温冻存时极容易在降温和复温过程中受到溶液冻 存、融化以及溶液渗透压变化的因素的影响而遭到损伤。因此为了实现细胞、组织或器官的 深低温保存，一般均需要在溶液中加入一定种类和浓度的低温保护剂。并针对不同的对象 设计特定降温程序和复温程序。目前在低温生物学研宄领域中已经有很多低温保存的方法，通常分为两类：一类 是传统的保存方法（冻存保护液+细胞/组织）；另一类是玻璃化的保存方法（玻璃化溶 液+细胞/组织）。在众多的保存方法中，玻璃化技术有许多其固有的优点，而被广泛用于 各种活性细胞、组织和器官的保存。 现有的玻璃化冻存方法，冻存细胞可取得较好的效果，但对于组织，则效果有限， 比如玻璃化冻存的胎盘组织复苏后分离出胎盘来源贴壁细胞的效果并不理想。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种。本 专利技术的玻璃化冻存液冻存的胎盘组织，复苏后细胞分离培养效率更高，细胞增殖更为迅速， 细胞收获量更大。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了一种组合物，包括甘油、乙二醇、聚乙二醇、DMS0和蔗糖溶液。 在本专利技术的一些具体实施方案中，以体积份计，所述组合物包括： 甘油 5~50份 乙二醇 5~50份 聚乙二醇 5~50份 DMSO 5~50 份 蔗糖溶液 5~80份。 在本专利技术的一些具体实施方案中，以体积份计，所述组合物包括： 甘油 24~36份 乙二醇 8~12份 聚乙二醇 12~18份 DM SO 12~18 份 蔗糖溶液 12~60份。 在本专利技术的一些具体实施方案中，以体积份计，所述组合物包括： 甘油 30份 乙二醇 10份 聚乙二醇 15份 DMS0 15 份 蔗糖溶液 30份。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述蔗糖溶液的浓度为0. 1~lmol/L。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述蔗糖溶液的浓度为0.4~0.5mol/L。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述蔗糖溶液的浓度为0. 4mol/L。 本专利技术还提供了所述的组合物在制备胎盘玻璃化冻存剂中的应用。 本专利技术还提供了一种胎盘玻璃化冻存剂，包括所述组合物。 在本专利技术的一些具体实施方案中，胎盘玻璃化冻存剂为胎盘玻璃化冻存液。 本专利技术还提供了一种所述胎盘玻璃化冻存剂的制备方法，取所述甘油、所述乙二 醇、所述聚乙二醇、所述DMS0溶于所述蔗糖溶液。 本专利技术还提供了一种胎盘的玻璃化冻存方法，采用所述胎盘玻璃化冻存剂保存所 述胎盘。 在本专利技术的一些具体实施方案中，胎盘的玻璃化冻存方法具体为取胎盘与培养基 混合、离心，弃上清，与所述胎盘玻璃化冻存剂混合，液氮保存。 在本专利技术的一些具体实施方案中，胎盘的玻璃化冻存方法中所述取胎盘与培养基 混合具体为采用不同浓度的DMEM培养基分5步进行预平衡。 在本专利技术的一些具体实施方案中，胎盘的玻璃化冻存方法后复苏采用10%FBS的 MSC专用培养基。 为了提高玻璃化冻存的胎盘组织复苏后的活率，本专利技术对玻璃化的冻存方法进行 了优化，主要是对其配方进行改良。本专利技术的玻璃化冻存液冻存的胎盘组织，复苏后细胞分 离培养效率更高，细胞增殖更为迅速，细胞收获量更大。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。 图1示细胞增殖曲线；其中冻存液1为本专利技术实施例1的冻存液；冻存液2为30% 甘油+15%乙二醇+15%DMS0+0. 4M蔗糖； 图2示冻存组织所分离的细胞，其中A为冻存液2冻存组织所分离的细胞，B为冻 存液1冻存组织所分离的细胞。【具体实施方式】 本专利技术公开了一种，本领域技 术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和 改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及 应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围 内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。 本专利技术提供的中所用原料及试 剂均可由市场购得。 下面结合实施例，进一步阐述本专利技术： 实施例1胎盘组织玻璃化冻存液的制备 甘油 30% 乙二醇 10% 聚乙二醇 15% DMSO 15% 0.4mol/L蔗糖溶液 30% 将甘油、乙二醇、聚乙二醇、DMS0溶于蔗糖溶液中，混合即得。 实施例2胎盘组织玻璃化冻存液的制备 甘油 5%~50% 乙二醇 5%~50% 聚乙二醇 5%~50% DMSO 5% ~50% 0.卜1moI/L蔗糖溶液 5%~80% 将甘油、乙二醇、聚乙二醇、DMSO溶于蔗糖溶液中，混合即得。 实施例3胎盘组织玻璃化冻存液的制备 甘油 5%~50% 乙二醇 5%~50% 聚乙二醇 5%~50% DMSO 5%~50% 0.1~1mol/L蔗糖溶液 5%~80% 将甘油、乙二醇、聚乙二醇、DMS0溶于蔗糖溶液中，混合即得。 实施例4胎盘组织的冻存与复苏 1取3mmX3mm大小的胎盘组织块，按照1:1体积比的比例加入保护剂，保护剂 为含乙酰胺的DMEM培养基溶液，用不同体积分数乙酰胺（5%、10%、20%、40%、60% )的 DMEM培养基于4°C处理30分钟；然后4°C，2, 500转离心5分钟， 2弃上清液，加入体积分数100%的实施例1制备的玻璃化冻存液lmL，然后直接投 入液氮罐中保存。 3胎盘组织在深低温冻存3个月后，从液氮中取出胎盘组织块放入40°C的恒温水 浴箱快速解冻，在lmin内使胎盘组织块迅速解冻，去除冷冻保护剂然后用含10%FBS的 MSC专用当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，包括甘油、乙二醇、聚乙二醇、DMSO和蔗糖溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，吴子杰，王小燕，李平，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44