用于治疗肝细胞癌的治疗性生物制品制造技术

一种用于治疗肝细胞癌的治疗性生物制品。本发明专利技术特别地提供包含与抗体偶联的凝结剂的偶联物，其中所述抗体特异性地结合哺乳动物PLVAP蛋白的细胞外结构域表位。这些试剂特异性地靶向HCC肿瘤并治疗HCC。本发明专利技术还提供使用这些偶联物的方法，如通过施用本发明专利技术提供的偶联物或本发明专利技术提供的组合物如药物组合物治疗HCC的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】用于治疗肝细胞癌的治疗性生物制品 相关申请 本申请要求2013年11月15日提交的美国临时申请No. 61/904,951的利益。上 述申请的全部教导通过引用并入本文。 通过引用并入ASCII文本文件中的材料 本申请通过引用并入在与本申请同时提交的以下ASCII文本文件中包含的序列 表： a)文件名：序列表.txt ;建立于2014年10月28日，大小38KB。 专利技术背景 原发性肝癌在全世界是男性中第五常见的癌症和在女性中是第七常见的癌症。在 全球范围内，它是男性中癌症死亡的第二位的主要原因和在女性中癌症死亡的第六位的主 要原因。肝细胞癌（HCC)占原发性肝癌的85%。HCC在东南亚和撒哈拉以南非洲中是地方 病。西方国家中的发病率在近年中提高并预期继续提高。HCC在美国对于男性和女性是癌 症死亡的第五位和第九位的主要原因。HCC的五年总生存率仅为15%。 鉴于这一疾病的高发病率及其对患者、其支持系统和大多数社团造成的巨大负 担，迫切地需要患有中期和晚期疾病的HCC患者的治疗中的进一步改善一更特别地，存在 着对于可以发生特异性地靶向HCC肿瘤且例如减小肿瘤的体积以治疗HCC和/或消除肿瘤 的药剂以及制备和使用该药剂的方法的需要。
技术实现思路
本专利技术特别地提供特异性地靶向HCC肿瘤的血管内皮细胞和治疗HCC的药剂以及 使用这些药剂的相关方法。在第一方面中，本专利技术提供包含与抗体偶联的凝结剂的偶联物， 其中所述抗体特异性地结合哺乳动物PLVAP蛋白的细胞外结构域表位。 在一些实施方式中，凝结剂是凝血蛋白。在更特别的实施方式中，凝血蛋白是组织 因子（tissue factor)。在还更特别的实施方式中，组织因子包含与SEQ ID NO: 1具有至少 40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性的氨基酸序列；例 如，与SEQ ID N0:1具有至少80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性；例如，与SEQID NO: 1具有至少95、96、97、98、99%或更高同一性。 在相关的方面中，本专利技术提供包含通过肽键与抗体偶联的具有与SEQ ID NO: 1至 少 40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性的氨基酸序列的 组织因子的偶联物，其中所述抗体特异性地结合人PLVAP蛋白的细胞外结构域中的表位。 在前述任何方面和实施方式中，哺乳动物PLVAP蛋白可以包含与SEQ ID N0:2具 有至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性的氨基酸序列；更 优选与SEQ ID N0:2具有至少80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性，还更优选与SEQ ID N0:2具有至95、96、97、98、99%或更高同一性。 对于前述任何方面和实施方式，所述抗体可以特异性地结合选自 PPAGIPVAPSSG(SEQ ID N0:25)或 LAIRNSALDTCIKTKSQPMMPVSRPM(SEQ ID N0:26)的表位。 在更特别的实施方式中，所述抗体特异性地结合表位PPAGIPVAPSSG(SEQ ID N0:25)。 对于前述任何方面和实施方式的偶联物，在一些实施方式中，凝血蛋白和抗体化 学交联。在其它实施方式中，凝血蛋白和抗体通过肽键连接。 在前述任何一个方面和实施方式的偶联物中，抗体可以是包含轻链可变区和重链 可变区的免疫球蛋白。在更特别的实施方式中，凝血蛋白和抗体通过在包含重链可变区的 蛋白质的羧基末端与凝血蛋白的氨基末端之间的肽键连接。在其它实施方式中，凝血蛋白 和抗体通过在包含轻链可变区的蛋白质的羧基末端与凝血蛋白的氨基末端之间的肽键连 接。 在一些实施方式中，在前述任何一个方面或实施方式的偶联物中，凝血蛋白和抗 体经由接头肽通过肽键连接。在更特别的实施方式中，接头肽包含（Gly 4-Ser)n，其中η是 1、2、3、4、5或6 ;更优选其中η是3。 在特定实施方式中，前述任何一个方面或实施方式的偶联物中，抗体是包含以下 的免疫球蛋白： i)包含含有SEQ ID ΝΟ:3的氨基酸序列的可变区中的⑶R的重链可变区和包含含 有SEQ ID Ν0:4的氨基酸序列的可变区中的⑶R的轻链可变区，任选地其中所述轻链可变 区和重链可变区在各CDR中具有最多1、2、3或4个保守氨基酸置换；或 ii)包含含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的可变区中的⑶R的重链可变区和包含 含有SEQ ID N0:6的氨基酸序列的可变区中的⑶R的轻链可变区，任选地其中所述轻链可 变区和重链可变区在各CDR中具有最多1、2、3或4个保守氨基酸置换。 在更特别的实施方式中，轻链可变区和/或重链可变区是人源化的。在还更特别 的实施方式中，轻链可变区和重链可变区由以下给出： i)选自SEQ ID N0:7、8、9、10或11的重链可变区，更特别地其中所述重链可变区 是SEQ ID NO: 11;和选自SEQ ID NO: 12、13或14的轻链可变区，更特别地其中所述轻链可 变区是SEQ ID NO: 13 ;或 ii)选自SEQ ID N0:15、16、17、18或19的重链可变区，更特别地其中所述重链可 变区是SEQ ID NO: 19;和选自SEQ ID N0:20、21或22的轻链可变区，更特别地其中所述轻 链可变区是SEQ ID N0:22。 前述任何方面和实施方式的特定实施方式中，偶联物包含与SEQ ID NO: 23具有至 少80、85、90、95、96、97、98、99%或更高同一性的氨基酸序列。 在相关的方面中，本专利技术提供编码前述任何一个方面和实施方式的偶联物的核 酸。在特别的实施方式中，本专利技术提供的核酸包含在载体中。在相关的实施方式中，载体可 以是在宿主细胞中，且在特定的实施方式中，宿主细胞是细菌细胞（例如大肠杆菌）。在其 它实施方式中，宿主细胞是真核细胞（例如，真菌如酵母，包括芽殖酵母；昆虫细胞如SfO、 Sf21或high five细胞；或哺乳动物细胞如CHO、VERO或COS细胞）。 在另一个相关的方面中，本专利技术提供包含前述任何方面和实施方式的偶联物的药 物组合物，其中该组合物进一步包含合适的载体、赋形剂和/或造影剂。在更特别的实施方 式中，该组合物为适合施用于受试者的剂型。 在另一个方面，本专利技术提供通过在支持前述任何一个方面和实施方式的宿主细胞 表达偶联物的条件下培养所述宿主细胞并分离表达的偶联物来制备前述任何一个方面和 实施方式的偶联物的方法。 在再另一个实施方式中，本专利技术提供在需要的哺乳动物受试者中治疗具有PLVAP 阳性脉管系统的肿瘤、治疗肝细胞癌（HCC)、减小具有PLVAP阳性脉管系统的肿瘤的体积或 者诱导具有PLVAP阳性脉管系统的肿瘤的血栓形成和肿瘤坏死的方法。在这些方法中，向 受试者（例如，人）提供（例如，通过任何合适的方式施用）治疗有效量的前述任何一个方 面和实施方式的偶联物或前述任何一个方面和实施方式的药物组合物。 在一些实施方式中，HCC肿瘤体积在所述偶联物诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含与抗体偶联的凝结剂的偶联物，其中所述抗体特异性地结合哺乳动物PLVAP蛋白的细胞外结构域表位。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：高国彰，王芸馨，
申请(专利权)人：中国合成橡胶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71