本发明专利技术涉及医学生物检测技术领域，本发明专利技术应用microRNA芯片技术筛选出被Brachyury调控后发生显著上调的若干microRNAs，并对这一系列microRNAs进行了Real-Time PCR验证。本发明专利技术提供了Brachyury阳性肿瘤的分子标记物，该分子标记物miR-489-3p在肺癌患者中呈现显著高表达，而在其它肺部实质性病变患者和正常人群中则未见表达水平异常。本发明专利技术还提供了Hsa-miR-489-3p在制备早期筛查或诊断Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术的miR-489-3p可以在肿瘤发生的早期进行筛查或诊断，对于肿瘤的早期治疗和医疗成本的节约都具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学生物检测
，是microRNAs在制备早期筛查或诊断 Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用。
技术介绍
肺癌是目前全球死亡率最高的恶性肿瘤。美国每年大约有17万人死于肺癌，占整 体癌症死亡人数的30%。随着经济的快速发展和空气污染的日益加重，我国的肺癌发病率 也呈现逐年上升的趋势，已经成为我国城市人口癌症死亡的首要原因。据统计，肺癌患者的 五年生存率仅为5-15%，其主要原因在于难于早期发现，大部分患者就诊时已经发生了不 同程度的转移。如死于肺癌的患者的尸检中，有90 %左右都会出现脊柱转移病灶，肺癌的转 移成为患者生存期短预后差的重要原因，且转移病灶的巨大疼痛也使得患者的生存质量严 重下降，加速了患者的死亡进程。虽然国际上对于肺癌转移的治疗已由原先的消极对症转 为以外科手术为主辅以化疗、放疗、靶向治疗等多学科协作的综合性模式，患者的生存期和 生存质量在一定程度上得到了提高，但由于对转移机制认知不足和治疗方式的局限，肺癌 的广泛转移仍然是造成患者死亡率居高不下的重要原因。因此，早期发现与肿瘤发生和转 移进程相关的分子诊断标记物可以为肿瘤治疗赢取一定的时间，成为控制肿瘤发展的重要 途径。为了达到这一目的，首先必须明确：相较于正常体细胞，在肺癌中发生特异性表达改 变并与转移等多种肿瘤发展进程密切相关的肿瘤"靶点"。 "肿瘤靶标"这一概念早已被广泛认可并进行了大量的研宄，这一概念的核心是找 到仅在肿瘤中特异性表达而在正常组织中不表达或局限性表达的分子，通过"生物导弹"直 击肿瘤，并对正常组织造成最小化的破坏。这一概念的出现和随之进行的大量研宄正逐渐 使肿瘤独有的特征具现化，并有可能最终"无所遁形"，也使得人类在与肿瘤的斗争中掌握 了一定的主动权。对肿瘤的早期发现和有效治疗都有重大意义。 TATA-box转录因子Brachyury是T-box转录因子家族的成员之一，其同源体 在诸多多细胞生物体内表达，如秀丽线虫、非洲爪蛙、老鼠、人类等胚胎中表达（参见 文献 Papaioannou VE, Silver LM, et al. The T-box gene family. Bioessays 1998 ； 20:9-19. Kispert A，Herrmann BGj et al. Homologs of the mouse Brachyury gene are involved in the specification of posterior terminal structures in Drosophila，Tribolium，and Locusta. Genes Dev 1994 ；8:2137-50. Herrmann BG，Labeit S，et al. Cloning of theTgene required in mesoderm formation in the mouse. Nature 1990 ;343:617-22)。T-box蛋白主要在中胚层的形成和分化中具有重要作用，在胚胎发育 晚期则在大部分组织中关闭表达仅集中于脊索区表达，并在脊柱形成后随着脊索的退化消 失而在大多数正常成人组织中不表达，仅在睾丸中有表达、脾和小肠中有低水平表达的限 制性表达方式（参见文献 Duane H. Hamilton, Ph. D·，Postdoctoral Fellow, et al. Cancer vaccines targeting the epithelial-mesenchymal transition:tissue distribution of Brachyury and other drivers of the mesenchymal-like phenotype of carcinomas. Semin Oncol.2012 Jun ;39(3):358-66.)。然而，在已知的人类多种肿瘤组织和细胞系 中，Brachyuir却呈现出高水平的表达，这些肿瘤组织和肿瘤细胞系是：小肠、胃、肾、膀 胱、子宫、卵巢、睾丸、脑和淋巴组织，肺组织、结肠组织和前列腺组织来源的细胞系（参见 文献 Palena Cj Polev DE，et al. The human T-box mesodermal transcription factor Brachyury is a candidate target for T-cell-mediated cancer immunotherapy. Clin Cancer Res. 2007 Apr 15 ； 13 (8) : 2471-8. Park JCjChae YKj et al. Epigenetic silencing of human T (brachyury homologue)gene in non-small-cell lung cancer.Biochem Biophys Res Commun. 2008 Jan 11 ;365(2) :221-6.) D 以上研究结果都提;了 Brachyury 可以应用于多种来源的肿瘤诊断和治疗中。然而，如何应用肿瘤组织中高表达的Brachyury 对人群进行早期无创性的肿瘤筛查或进行临床诊断却没有具体有效的方法和研究。作为转 录因子，Brachyury具有强大的启动或抑制下游基因转录的作用，因此，通过检测其下游被 调控的某些易检测分子如外分泌蛋白质或miRNA的表达量便可以作为Brachyury表达水平 的指标。 microRNA是仅有20-24bp的非编码短链核苷酸片段，在外周血中具有稳定的表达 谱，且无性别差异，而肿瘤患者的microRNAs表达谱则发生显著变化（参见文献Chen X，Ba Yj et al. Characterization of microRNAs in serum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases. Cell Res. 2008 Oct ;18(10):997-1006.)由 于microRNAs出细胞时被脂质微泡（Micro vesicle)保护，因此能够保持稳定，易于检测， 在冰冻组织、福尔马林固定组织、石蜡组织，体液如外周血、痰液、唾液、胸膜积液中都能够 进行检测，且由于microRNA片段较短，大大降低了检测成本，因此，其作为无创性肿瘤早 期诊 r断标记物的研究日益增多（参见文献Du M，Liu S et al. Clinical potential role of circulating microRNAs in early diagnosis of colorectal cancer patients. Carcinogenesis. 2014 Sep 19.Jeong HC. Clinical Aspect of MicroRNA in Lung Cancer. Tuberc Respir Dis (Seoul). 2014 Aug ；77 (2):60-4.) 根据国际报道，hsa-miciORNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
miR‑489‑3p作为Brachyury阳性肿瘤的分子标记物的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：肖建如，陈素，周振华，矫健，姜东杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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