本发明专利技术涉及一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法。其特征：采用薄层色谱手段，用同一供试品溶液，在五块薄层板上，鉴别了红花、西红花、打箭菊；甘草、獐牙菜；诃子；木香；丁香和藏菖蒲9味中药，样品与对照药材的前处理只需30分钟，溶剂30ml，斑点清晰，方法快捷；建立的丁香酚、木香烃内酯与去氢木香烃内酯的一测多评定量方法，采用以双通道，丁香酚在280nm、木香烃内酯与去氢木香烃内酯在210nm检测，既解决了丁香酚基线不回零、干扰问题，又解决了木香烃内酯与去氢木香烃内酯含量低无吸收峰，无法测定的难题。使各波峰大小适宜，互不干扰，一测三评，效率高，成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。快速定性 方法是指采用薄层鉴别方法，对红花、西红花、打箭菊、甘草、獐牙菜、诃子、木香、丁香和藏 菖蒲9味中药的快速薄层鉴别；快速定量方法是指用高效液相色谱方法，双通道不同检测 波长，对丁香酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的一测三评定量测定。
技术介绍
在中药复方制剂中，特别是二十五味以上组方的复方制剂，由于药味多，各药味的 剂量低，众多的微量有效成分相互干扰，薄层鉴别率低，定量测定指标少，以2010年版中国 药典一部为例，收载的二十五味以上的复方制剂，粗略的计算了一下约有14个品种，其薄 层鉴别收载率平均为12%左右，定量测定指标，按测定的成分计算，平均不到1种成分。也 就是说在一个二十五味以上组方的制剂中，只有3-4味药材能够识别其有无投料，一种成 分能控制其含量，而众多的药材与有效成分是无法控制其投料情况与含量的，质量标准识 别水平太低，无法给质量监督提供有力支撑。 即便在质量检测指标相对较多的品种中，薄层鉴别也多是一个品种，如有N项鉴 另IJ，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排 除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、 费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。这样，一个含6~7项薄层鉴别和二项含量测定 的质量标准检测完成，一般要花费一周的时间，如遇复试，时间翻倍，检测速度严重制约着 中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本，也是 中药质量控制必须突破的难关。以中国药典2010年版一部收载的金蒲胶囊质量标准为例 剖析如下。该品种由24味中药组成，其标准项下收载了 7项薄层鉴别和两项含量测定。具 体方法如下： 【鉴别】(1)取本品内容物4g，加甲醇20ml，浸渍10分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干， 残渣加水IOml使溶解，再加盐酸lml，置水浴中加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提 取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取 大黄对照药材0. lg，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积比为15 : 5 : 1的30~60°C的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变成红色。 (2)取本品内容物4g，加浓氨试液Iml与三氯甲烷20ml，浸渍1小时，时时振摇，滤 过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇 制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液20 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 : 6 : 1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展 开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，挥尽薄层板上吸附的碘，置紫外光灯365nm 下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 (3)取本品内容物3g，加三氯甲烷25ml，加热回流5小时，滤过，滤液中加活性炭 0. 3g，振摇，放置30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶 液。另取华蟾酥毒基对照品，加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取 供试品溶液10 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4 : 3 : 3 的环己烷-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热 至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (4)取本品内容物6g，加80 %丙酮溶液20ml，超声处理30分钟，静置，取上清液， 作为供试品溶液。另取红花对照药材〇.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各 1〇μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7 : 0.4 : 2 : 3的乙酸乙酯-甲醇-甲 酸-水为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点。 (5)取本品内容物6g，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加 水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加1 %氢氧化 钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干， 残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含Img 的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10 μ 1、对照品溶液5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以体积比为13 : 7 : 2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，l〇5°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色斑点；置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色的荧光斑点。 (6)取本品内容物5g，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加 甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为 对照品溶液。吸取供试品溶液10 μ 1、对照品溶液4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 体积比为15 : 7 : 5的异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 ⑵取本品内容物10g，加三氯甲烷30ml，加热回流4小时，放冷，滤过，滤液蒸干， 残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取穿山甲对照药材2g，同法制成对照药 材溶液。吸取上述两种溶液各1〇μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20 : 1 的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干。喷以体积比为9 : 1的醋酐-硫酸的混合溶液， 80°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点。 苦参含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 18 : 18 : 70 : 0.1的乙腈-甲醇-pH6. 8的磷酸盐缓冲液-三乙胺为流动相，检测波长为 220nm，理论板数，按苦参碱峰计算不低于8000。 对照品溶液制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60 μ g的 溶液，即得。 供试品溶液制备取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0. 5g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷25ml，以功率250w，频率33kHz，超声处 理20分钟，滤过，取滤液，再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次，每次5ml，滤过，合并滤 液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续 滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。 本品每粒含苦参以苦参碱C16H24N2O计，不本文档来自技高网...
【技术保护点】
本专利技术涉及一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法，其特征在于：(1)一测多评快速定性鉴别方法①取二十五味珊瑚丸3g，研细，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残留物加甲醇1ml，使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.2g、西红花对照药材0.04g、打箭菊对照药材0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶2∶2∶0.4的乙酸乙酯‑甲酸‑水‑甲醇为展开剂，展开，取出，热风吹干，置日光下检视；供试品色谱中，在与西红花对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与红花与打箭菊对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的荧光主斑点；②取甘草与獐牙菜对照药材各0.1g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取对照药材溶液与鉴别①项下供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF25４薄层板上，以体积比为10∶4∶0.5的60‑90℃的石油醚‑乙酸乙酯‑甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草与獐牙菜对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光主斑点；③取诃子对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取对照药材溶液3‑5μl、鉴别①项下的供试品溶液各8～10μl，分别点于同一硅胶GF２５４薄层板上，以体积比为5.5∶4.5∶0.5的环己烷‑乙酸乙酯‑甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与诃子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；④取木香对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，作为对照药材溶液；吸取对照药材溶液与鉴别①项下供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF２54薄层板上，以体积比为8∶2∶0.1的环己烷‑醋酸乙酯‑甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液与乙醇溶液的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；⑤取藏菖蒲对照药材0.2g、丁香对照药材0.1g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取鉴别①项下供试品溶液和上述对照药材溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶2的环己烷‑乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与藏菖蒲和丁香对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，立即置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与丁香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点。(2).丁香酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯一测三评快速测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为37∶18∶45的乙腈‑甲醇‑0.1％磷酸为流动相；检测波长：丁香酚为280nm、木香烃内酯和去氢木香烃内酯为210nm；柱温为30℃；理论板数按去氢木香烃内酯峰计算不低于2000；B.对照品溶液制备取丁香酚、木香烃内酯与去氢木香烃内酯对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含丁香酚90μg、木香烃内酯16μg、去氢木香烃内酯各24μg混合溶液，即得；C.供试品溶液制备取二十五味珊瑚丸适量，研细，取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，以功率250W、频率25kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液8μl，注入液相色谱仪，测定，即得。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩桂茹，纪玉哲，高飞，安丽娜，王智森，
申请(专利权)人：王智森，
类型：发明
国别省市：河北;13
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