用于免疫调节的沙奎那韦‑NO制造技术

沙奎那韦硝酸酯，或其无毒盐、溶剂化物或结晶/多晶型形式，可用于治疗自身免疫疾病，特别是由促炎细胞因子介导的疾病。可以治疗的疾病的实例包括特发性艾迪生病、自身免疫肝炎、胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、吉‑巴综合征、桥本甲状腺炎、银屑病、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、1型糖尿病和缺血再灌注的眼色素层炎、移植物抗宿主疾病、移植排斥、内和外毒血症和痛风性关节炎。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫调节的沙奎那韦-NO本专利技术涉及沙奎那韦硝酸酯，其用于治疗免疫系统障碍引起的疾病。专利技术背景沙奎那韦(((2S)-N-[(2S,3R)-4-[(3S)-3-(叔丁基氨基甲酰基)-十氢异喹啉-2-基]-3-羟基-1-苯基丁-2-基]-2-(喹啉-2-基甲酰胺基)丁二酰胺)，简写为Saq，是人免疫缺陷病毒(HIV)蛋白酶抑制剂，并且其被常规用于高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)的组成部分。除了其有效的抗逆转录病毒作用外，该药物还能有力地影响肿瘤细胞(Toschi等人，2011)。尽管如此，Saq的应用由于其毒性而受到限制(Flexner，1998)，并且减少副作用同时保持Saq抗癌性质的想法是该药物一氧化氮(NO)-修饰形式沙奎那韦-NO(Saq-NO)的启动生成。该活性剂通过将NO共价连接到母体药物上来制备(Maksimovic-Ivanic等人，2009和WO2010/012466)，并且详细研究显示其与Saq相比对多种肿瘤具有优越的抗癌性质，所述的肿瘤包括黑素瘤、星形细胞瘤、前列腺癌细胞和多种人多药耐药的肿瘤细胞系，然而对进行治疗的小鼠不具有毒性(Maksimovic-Ivanic等人，2009；Mijatovic等人，2011；Rothweiler等人，2010；Donia等人，2010；Mojic等人，2012)。此外，Saq-NO保留了其母体药物的抗-HIV效力(Canducci等人，2011)。这些研究暗示Saq-NO具有抗肿瘤和抗-HIV治疗的潜力。专利技术描述现已发现，沙奎那韦硝酸酯具有式I，下文称为NO-沙奎那韦、Saq-NO或OX-1001，其具有令人感兴趣的免疫调节性质，有效调节多克隆活化的和抗原刺激的T细胞中多种细胞因子的生成。Saq-NO能够调节Th1、Th2、促炎和抗炎细胞因子的生成。其作用在多克隆刺激的免疫细胞混合群(SPC和LNC)或纯化的T细胞(CD4+细胞)以及抗原刺激的T细胞(致脑炎的MBP-特异性细胞)中是同等有效的。应提及的是，已使用健康个体的外周血单核细胞(Delmonte，2007)和预先用Saq处理的小鼠脾细胞(Pacifici等人，1997)在体外和离体条件下研究了Saq的免疫调节性质，并且得到了相反的结果。在用PMA加上离子霉素刺激的人PBMC(Delmonte，2007)中，通过研究3种细胞因子，例如IL-2、IFN-γ和TNF-α，发现Saq在浓度范围为10至20μM时下调IL-2的合成以及IFN-γ的生成，而不影响TNF-α的生成。同时，Saq在浓度范围为5至20mM时抑制PHA或抗-CD3-诱导的增殖。相反，在进行的小鼠离体研究中，用Saq预先处理的小鼠获得的脾细胞与对照小鼠的脾相比，分泌出更多的IFN-γ和IL-2(Pacifici，1997)。相反地，体内暴露于Saq并不会改变IL-1β、IL-10和TNF-α的生成(Pacifici，1997)。因此，我们的体外研究结果表明，NO-杂化诱导了Saq的较大免疫药理学改变，随之而来的是更多和更大程度的免疫调节，包括对来自未分级脾细胞和/或纯化的鼠CD4T细胞的IFN-γ、IL-17、TNF-α、IL-4和IL-10的体外抑制(图2和3)。Saq-NO比Saq的作用更强，并且具有更大的幅度，并且对某些细胞因子在2.5至5mM的浓度即可观察到。除了对纯化的CD4+T细胞分泌的IL-17具有抑制作用外，Saq在这些浓度时没有作用(图3)。此外，分子研究证明了Saq-NO而不是Saq抑制了S6激酶的磷酸化(图4)。总之，这些数据证明了Saq-NO是新的化学实体，其被赋予不同于Saq且通常更强的免疫调节作用。更特别的是，已经发现Saq-NO下调自身免疫疾病的发病机理所涉及的促炎细胞因子的生成，特别是鼠SPC、大鼠LNC和纯化的鼠CD4+细胞中INF-γ、IL-17、TNF-α、IL-4、IL-10和TNF的生成。重要的是，Saq-NO能够抑制MBP-特异性T细胞中IFN-g和IL-17的生成，并且该发现支持了Saq-NO在中枢神经系统(CNS)自身免疫中的治疗应用。生成IFN-g和IL-17的细胞，Th1和Th17细胞，分别是多发性硬化(MS)发病机制及其实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型的关键致病群(El-behi等人，2010；Fletcher等人，2010；Jager等人，2010)。重要的是，Saq-NO不仅抑制了体外重新刺激的DLNC，还抑制了体内重新刺激的SCC生成的IFN-g和IL-17，这意味着它有效地抑制成熟中和成熟的效应器Th1和Th17细胞。尽管与其对IFN-g和IL-17释放的作用相比，其对DLNC和SCC存活率的作用有限，但是该作用也支持了Saq-NO在CNS自身免疫性中的治疗性质，因为其有助于限制CNS炎症。Th1和Th17细胞对于其它器官特异性和全身自身免疫和炎性障碍也很重要，包括类风湿性关节炎、呼吸炎症、系统性红斑狼疮和同种异体移植排斥反应(Afzali等人，2007)。Saq-NO减少了CD4+T细胞中的S6磷酸化，而Saq的作用要弱得多，这与它们分别对T细胞细胞因子生成的作用相对应。所观察到的S6磷酸化减少表明Saq-NO影响了S6K活化，并且该作用对于其影响细胞因子的生成十分重要。事实上，S6K活性和S6磷酸化与免疫细胞内细胞因子的生成相关(Lee等人，2010；Melino等人，2008；Cao等人，2008)。Saq-NO具有很强的免疫调节效力，这表现为在两种熟知的多发性硬化模型中具有强的预防和治疗作用，正如下面试验部分所报道的，以实施例的方式给出。因此，Saq-NO可用于治疗其中涉及细胞因子生成失调的器官特异性和全身性自身免疫疾病。所述疾病的实例包括特发性艾迪生病、自身免疫肝炎、胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、吉-巴综合征、多发性硬化、视神经炎、桥本甲状腺炎、银屑病、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、1型糖尿病和眼色素层炎。Saq-NO还可用于治疗缺血再灌注、移植物抗宿主病，以及预防移植物排斥、内和外毒血症和痛风性关节炎。本专利技术还提供了包含Saq-NO与适合的载体/赋形剂混合的药物组合物。本专利技术的组合物可以通过任何已知的途径施用，特别是通过口服、非肠道、局部(包括眼)、经皮、直肠途径。剂量可以根据治疗的疾病、患者体重、性别和年龄在较宽的范围内变化。总之，其通常的范围是每天10至1000mg，单次施用或者分成每天两次或三次施用。可以使用的单位剂量为5-500mg，特别是100-250mg。对于治疗眼色素层炎，滴眼剂是优选的施用形式。活性成分在局部/眼用制剂中的浓度范围是0.01至10％，优选0.1至2％。适合的赋形剂例如透明质酸化合物、罗望子种子多糖等被方便地使用。或者，可以使用无菌溶液玻璃体内施用。适合的剂量范围为每次注射0.1至10mg。用于其它施用形式例如用于口服或非肠道制剂的剂量，很容易由任何本领域技术人员根据毒理学、药动学和药效学性质，以及根据患者的状况(疾病的严重程度和进展程度)、体重、年龄和性别来确定。剂量通常与临床实践中已知用于母体化合物的相似。还可以将Saq-NO的无毒盐、溶剂化物或晶体/多晶型形式代替S本文档来自技高网...

【技术保护点】
沙奎那韦硝酸酯，其无毒盐、溶剂化物或晶体/多晶型形式，用于治疗自身免疫疾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.11.20 US 61/728,3301.包含沙奎那韦硝酸酯作为活性成分与适合的载体混合的局部眼用制剂。2.沙奎那韦硝酸酯，其无毒盐或晶体/多晶型形式在制备用于治疗自身免疫疾病的药物中的用途。3.根据权利要求2的用途，其中自身免疫疾病对促炎细胞因子生成的下调有响应。4.根据权利要求3的用途，其中所述的促炎细胞因子是INF-γ、IL-17、TNF-α、IL-10。5.根据权利要求2-4任一项的用途，其中自身免疫疾病选自特发性艾迪生病、自身免疫肝炎、胆汁性肝硬化、...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·尼科莱蒂，
申请(专利权)人：昂可诺克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK