一种乌鸡白凤片中有效成分的检测方法技术

本发明专利技术涉及乌鸡白凤片有效成分的检测方法，其包括如下步骤(1)芍药苷和甘草苷定量检测；(2)香附、芍药苷和甘草苷的定性检测，该方法专属性良好，灵敏度高，并能够可靠检验成品质量，适合产业化日常检验。

【技术实现步骤摘要】
一种乌鸡白凤片中有效成分的检测方法
本专利技术涉及医疗领域，尤其是涉及中药有效成分的检测方法。
技术介绍
乌鸡白凤片由乌鸡、人参、白芍、丹参、当归等二十味中药组成，具有补气养血、调经止带的功效，主治气血两亏引起的身体瘦弱，腰酸腿软，阴虚盗汗，经血不调，子宫虚寒，行经腹痛，崩漏带下，产后失血等症。研究表明，乌鸡白凤片可降低大鼠甘油三酯及氧化低密度脂蛋白、阻止动脉硬化有防治骨质酥松，保护肝脏等作用，对阿尔茨海默病具有潜在的药用价值。因此，乌鸡白凤片的临床应用越来越广，目前国内生产的厂家也越来越多。为了控制乌鸡白凤片质量，2005年药典也有含量测定方法和标准，也有文献报告乌鸡白凤中丹参酮、丹参素或芍药苷含量测定的方法。由于乌鸡白凤片是由20味药材制备而成，有效成分复杂多样性，现有技术含量都是测定其中一种成分，至今为止，还没有同时测定多种成分的检测方法出现，尤其是一种同时对芍药苷和甘草苷定量定性的检测方法。因此，为全面提高其产品质量，一种方法可以检测多种成分并操作简单，易于产业化日常检验的质量测定方法是迫在眉睫的。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种乌鸡白凤片有效成分的检测方法，该方法专属性强，灵敏度高，准确可靠，操作简单并适应产业化的日常检验。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种乌鸡白凤片有效成分检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)芍药苷、甘草苷定量测定方法；(2)芍药苷、甘草苷、香附定性检测方法：上述步骤(1)中所述的芍药苷、甘草苷用高效液相色谱法同时测定含量，包括步骤为：a、对照品制备；b、供试品制备；c、高效液相色谱法；上述步骤(2)中所述芍药苷、甘草苷采用薄层色谱法同时检测，香附采用薄层色谱法单独检测。上述步骤(1)中所述的芍药苷、甘草苷含量测定方法，包括如下步骤：(a)对照品制备：分别取芍药苷、甘草苷对照品用50-95％乙醇或甲醇或流动相溶解，即得；(b)供试品制备：取乌鸡白凤片样品，用50-95％乙醇或甲醇或流动相提取，即得。(c)高效液相色谱法：色谱条件如下色谱柱C185u250*4.6mm、流动相：乙腈-甲醇-酸溶液、波长：235nm、流速：1.0-1.5ml／min。上述步骤a中优选芍药苷对照品浓度是甘草苷对照品溶度3-5倍，优选芍药苷对照品浓度为19-20ug／ml，甘草苷对照品溶度为4-6ug／ml。上述步骤b中，优选样品中70％乙醇超声提取30-60min，放冷，称重，再用70％乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。上述步骤a、c所述流动相为乙腈-甲醇-酸10-15：3-8：75-87。优选为乙腈-甲醇-酸13∶5∶82。所述流动相中酸为醋酸、磷酸或甲酸，浓度为0.05-0.12％，优选为醋酸，浓度为0.1％。此处酸浓度是经过大量试验筛选出的结果，酸浓度过高PH值低，对色谱柱损伤较大，酸浓度过低则分离不完全。本专利技术上述步骤(2)中香附的薄层检测方法如下，a、供试品溶液制备：取乌鸡白凤片样品，照挥发油测定法，在挥发油测定器中用乙酸乙酯：水=1∶150提取蒸馏2-5小时，取乙酸乙酯层作为供试品溶液；b、对照品溶液的制备：取α-香附酮对照品，加乙酸乙酯溶解，即得对照品溶液；c、照薄层色谱法：取对照品和供试品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯=8-10∶1-2为展开剂，展开，取出，晾干后，置于紫外灯下检视，后喷以二硝基苯肼试液显色，斑点橙红色。上述步骤a中供试品制备：所述挥发油测定器中加入300ml水，然后再加入乙酸乙酯2ml，富集挥发油，取乙酸乙酯层即可。上述步骤c中展开剂甲苯-乙酸乙酯9.5∶1.5。本专利技术步骤(2)中芍药苷和甘草苷的定性检测方法，步骤如下a、供试品溶液制备：取本品加甲醇提取，滤过，残渣加水溶解，正丁醇萃取，取正丁醇液蒸干，残渣甲醇溶解即得；b、取甘草苷对照品，加甲醇溶解，作为甘草苷对照品溶液；甘草对照药材溶液的制备：取甘草对照药材，按照步骤a供试品溶液制备方法制备，作为甘草对照药材溶液；c照薄层色谱法：吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水低温以下放置的下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在日光及紫外光灯(365nm)下观察，芍药苷显示紫色斑点，紫外光灯(365nm)下检视，在与甘草苷和甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。上述步骤a中供试品制备∶优选样品先用乙醚、石油醚、氯仿等除酯再甲醇提取。最佳为取本品，研细，加乙醚超声处理10-30分钟，静置，倾去上清液，药渣挥干乙醚，加甲醇超声处理10-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加正丁醇振摇提取2-5次，每次10-30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。上述步骤c中优选展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下层。本专利技术所述的乌鸡白凤片是由下述重量份的原药材制备得到的：乌鸡5-15份、鹿角胶100-110份、醋鳖甲50-60份、煅牡蛎30-50份、桑螵蛸50-60份、人参100-110份、黄芪20-30份、当归120-130份、白芍100-110份、醋香附100-110份、天冬50-60份、甘草20-30份、地黄200-220份、熟地黄200-220份、川芎50-60份、银柴胡20-30份、丹参100-110份、山药100-110份、芡实炒50-60份、鹿角霜30-50份.本专利技术所述的乌鸡白凤片，优选是由下述重量份的原药材制备得到的：乌鸡5-10份、鹿角胶108份、醋鳖甲54份、煅牡蛎40份、桑螵蛸40份、人参108份、黄芪27份、当归122份、白芍108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黄215份、熟地黄216份、川芎54份、银柴胡22份、丹参108份、山药108份、芡实炒54份、鹿角霜40份。本专利技术的乌鸡白凤片按照现有技术制备，优选是按照下述制备方法获得的：以上二十味，山药、鹿角胶分别粉碎成细粉，香附提取挥发油，乌鸡切成小块，加水煎煮1小时，趁热加入适量的固体石蜡，搅拌使其融化，静置，弃去上层蜡及油脂固体，煎液搅拌成匀浆，加入适量的木瓜蛋白酶，搅拌，水解5小时，煮沸5分钟，离心，取上清液，减压浓缩成稠膏，减压干燥成干膏，鳖甲加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，再减压干燥成干膏，人参，白芍，甘草，天冬加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.07(50℃)，通过D101大孔树脂，用5倍量水洗脱，弃去水液，再用90％乙醇洗脱至洗脱液无皂苷反应为止，洗脱液减压回收乙醇并浓缩致稠膏状，再减压干燥成干膏。丹参、黄芪、银柴胡、川芎、当归、桑螵蛸用75％乙醇回流提取二次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，减压干燥成干膏，其余牡蛎等五味子加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.28-1.33(60℃)的清膏，加乙醇至含醇量达到60％，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩成稠膏，再减压干燥成干膏，将上述干膏与山药和鹿角胶的细粉及适量微晶纤维素混合，粉碎成细粉，过筛，制成颗粒，混匀，干燥，喷加香附挥发油，混匀，闷润，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乌鸡白凤片有效成分芍药苷、甘草苷含量测定方法，包括如下步骤：a、对照品制备：分别取芍药苷、甘草苷对照品用50‑95％乙醇或甲醇或流动相溶解，即得；b、供试品制备：取乌鸡白凤片样品，用50‑95％乙醇或甲醇或流动相提取，即得。c、高效液相色谱法：色谱条件如下色谱柱C185u250*4.6mm、流动相：乙腈‑甲醇‑酸溶液、波长：235nm、流速：1.0‑1.5ml／min。

【技术特征摘要】
1.一种乌鸡白凤片有效成分芍药苷、甘草苷含量测定方法，包括如下步骤：a、对照品制备：分别取芍药苷、甘草苷对照品用50-95％乙醇溶解，即得；b、供试品制备：取乌鸡白凤片样品，用50-95％乙醇提取，即得；c、高效液相色谱法：色谱条件如下色谱柱：C185μm，250mm×4.6mm，流动相：乙腈-甲醇-酸溶液10-15∶3-8∶75-87，波长：235nm，流速：1.0-1.5ml/min。2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于：所述的步骤a中选用70％乙醇溶解，芍药苷对照品浓度是甘草苷对照品浓度3-5倍。3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于：所述步骤b，取乌鸡白凤片样品用70％乙醇超声提取30-60min，放冷，称重，再用70％乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。4.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于：所述步骤c中流动相为乙腈-甲醇-酸溶液13∶5∶82。5.如权利要求1-4任意一项所述的含量测定方法，其特征在于：所述步骤c流动相中酸为醋酸、磷酸或甲酸。6.如权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于，所述酸浓度为0.05-0.12％。7.如权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于，所述酸浓度为0.1％。8.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：芍药苷对照品的制备：取芍药苷对照品约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得C＝194.11μg/ml，精密量取上述溶液1ml，置10ml容量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得C＝19.41μg/ml；甘草苷对照品的制备：取甘草苷对照品约12mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，金兆祥，王琳，张宇，
申请(专利权)人：天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂，
类型：发明
国别省市：天津;12