一种甘草的组织培养快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种甘草的组织培养快繁方法，即以甘草带腋芽茎段为外植体建立了甘草离体快繁体系，为解决甘草规模化生产奠定基础。本发明专利技术以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了甘草的组织培养快速繁殖，以期为甘草的产业化发展提供技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及。
技术介绍
甘草(为我国传统中药材,也是我国西部荒漠、半荒漠地区重要的固少植物，含有多种生物化学成分，目前已从甘草中分离得到300多种黄酮类化合物，60多种三枯类化合物以及香豆素类、多种生物碱等，具有抗炎、抑菌、抗肿瘤、抗病毒等作用。传统的甘草获取方法是采挖野生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。此夕卜，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽极低，野生甘草资源已不能适应规模化和标准化生产的需要，成为妨碍甘草产业发展的最大瓶颈。国内外在植物资源、化学成分分析、生药鉴定、药理作用和临床应用、愈伤组织培养及再分化等方面做了大量的工作，这些研究为以甘草为基源制剂的临床应用奠定了一定的基础。但是，甘草生产中仍然存在许多理论和实践急需解决的问题。为了谋求甘草产业的发展，引领甘草产业走向高技术、高规格、高水准的科技之路，甘草组织培养已经成为目前研究和开发的热点。至今为止，尚未见有关甘草离体快繁的所道，这严重甘草产业化的发展。因此，非常有必要建立甘草离体再生体系，以期为甘草的产业化发展提供技术支持。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，本专利技术以甘草带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了甘草的组织培养快速繁殖，从而实现本专利技术的目的。本专利技术的，包括以下的工艺步骤: (I)外植体的处理:选取健壮甘草植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成3.0?5.0长的带有I?2个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗I?3h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗I?3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5?30s后用无菌水洗3?5次，再用0.1%升汞溶液消毒5?1min,用无菌水冲洗4?6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。(2)丛生芽导:将步骤(I)处理后的带腋芽茎段切成1.5?2.5cm小段并接种到诱导培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养I?5天，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1500?30001x，直至诱导形成丛生芽。(3)增殖培养:将步骤(2)培养获得的嫩芽长至约2cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?4天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为3000?50001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。(4)生根培养:当步骤(2)或(3)的丛生芽长至2.5?3.5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?4天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养直至长出根。(5)试管苗移栽:当小苗长出的新根系长达3cm左右时，并且长出侧根，苗高5cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+ I?3mg/L NAA+ 0.5?2mg/L 6-BA+0.1 ?lmg/L KT+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 琼脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值为5.4 ?5.8。上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+1.0?3.0mg/L 6-BA+0.1?1.0mg/LNAA+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 琼脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值为 5.4 ?5.8。上述步骤(5 )所述的生根培养基为:MS+13.5mg/L KH2P04+2.0%?2.5%蔗糖+0.4%?0.6%琼脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值为5.4?5.8。本专利技术的优点是:以甘草带腋芽茎段为外植体建立了甘草离体快繁体系，为解决甘草规模化生产奠定基础。本专利技术以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了甘草的组织培养快速繁殖，以期为甘草的产业化发展提供技术支持。【具体实施方式】以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1: (I)外植体的处理:选取健壮甘草植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成3.0?5.0长的带有I?2个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗2h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗Ih后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。(2)丛生芽导:将步骤(I)处理后的带腋芽茎段切成1.5?2.5cm小段并接种到诱导培养基上，先在28°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照11小时，光照强度为25001x条件下培养20天每个腋芽茎段有3?5个丛生芽。诱导培养基为:MS+ 2mg/L NAA+lmg/L 6-BA+ 0.5mg/L KT+3.5% 蔗糖 +0.5% 琼脂 +0.1% 活性炭，pH 值为 5.8。(3)增殖培养:将步骤(2)培养获得的嫩芽长至约2cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为30001x，置于培养温度为28°C的条件下培养20天增殖倍数达到7倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。(4)生根培养:当步骤(2)或(3)的丛生芽长至2.5?3.5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在28°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照13小时，当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘草的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：（1）外植体的处理：选取健壮甘草植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成3.0～5.0长的带有1～2个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗1～3h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒5～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成1.5～2.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养1～5天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽;（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约2cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～4天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽;（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至2.5～3.5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～4天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至长出根;（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达3cm左右时，并且长出侧根，苗高5cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈桂容，
申请(专利权)人：陈桂容，
类型：发明
国别省市：广西;45