本发明专利技术涉及一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法，步骤如下：1）取DPPH·乙醇溶液滴于三角瓶底部，挥发至干，移取挥发油溶液滴加纱布上，纱布悬挂于三角瓶中，塞好瓶塞并用保鲜膜密封，反应一定时间，打开棉塞，加入2mL无水乙醇，摇匀，再加入18mL无水乙醇，摇匀，吸取一部分，于波长517nm处测得吸光值A1；2）以不加挥发油的等量无水乙醇为对照，以1）中方法同样操作，测得吸光值A2；3）以无水乙醇2mL代替DPPH·乙醇溶液，以1）中方法同样操作，测得吸光值A3；按公式计算挥发油对DPPH·自由基的清除率。本发明专利技术方法操作简单，重复性好，为气相自由基清除剂的开发提供了技术基础。
【技术实现步骤摘要】
一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法
本专利技术涉及一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法。
技术介绍
自由基与衰老、炎症、自身免疫性疾病及某些老年病、内分泌系统疾病等关系密切,特别是它与肿瘤的关系已受到国内外同学科领域的普遍关注。英国人Harman于1956年提出了自由基学说：自由基攻击生命大分子造成组织细胞损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因。美国路易斯安那州立大学的研究人员发现，当燃烧产生的自由基和空气中的颗粒结合以后，会生成稳定的自由基。这种自由基与香烟焦油中发现的自由基非常相似，被吸入人体后会被肺部和其他组织吸收引起细胞损伤。这种细胞损伤会导致哮喘、肺气肿和肺癌。H.BarryDellinger指出，人暴露在中等污染的空气中吸入的自由基，相当于一天吸300根香烟所吸入的自由基。流行病学研究已经证实，大气粉尘的暴露会导致心肺疾病的发生率升高，在毒理学研究中，自由基活性已作为颗粒生物活性的一个重要因素来研究。与粉尘有关的自由基引起的脂质过氧化损伤、遗传毒性和细胞毒性，成为近年来粉尘致病机制研究的重点。环境毒理学研究表明，城市大气中的自由基是心血管、衰老、肿瘤等疾病的潜在致病源，而自由基的氧化损伤又是大气颗粒物致病的重要机制。由此可见，大气环境中的颗粒物表面稳定自由基是健康的威胁，如何降低大气中的自由基含量，是人类健康维护的关键。植物挥发油的化学成分极其复杂，且不同植物或不同部位的挥发油成分也有差异。植物挥发油的化学成分一般分为萜类化合物、芳香族化合物、脂肪族化合物和含氮含硫化合物四种。挥发油清除自由基的研究报道很多，潘天玲等研究发现姜味草挥发油对DPPH自由基的清除活力EC50的浓度为0.21％。孙伟等根据试样对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除作用，评价16种植物挥发油的抗自由基活性。结果表明当归、肉豆蔻、月桂、茶树和丁香等3种挥发油具有较强的抗自由基活性，百里香、冬青、香叶天竺葵、薰衣草和香柏木等挥发油有中等的抗氧化作用，椒样薄荷、迷迭香、白兰叶和尤加利等抗氧化作用不强。美国安利有限公司在1998年就有专利保护用橙提取液清除自由基的方法，尹学琼等提取了柠檬香茅挥发油并以电子自旋共振法测定了其抗氧化活性发现，质量分数为1％的香茅挥发油乙醇溶液对羟基自由基的清除率约为32％。赵鑫等报道了甜橙挥发油的挥发性成分主要为柠檬烯，其次为β-蒎烯、β-水芹烯、芳樟醇、α-蒎烯等，经DPPH自由基清除实验表明68.07％的挥发油对自由基清除率为50％。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法，该方法操作简单，重复性好，为气相自由基清除剂的开发提供了技术基础。为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法，该方法包括以下的步骤：1)取DPPH·乙醇溶液2-3mL滴于100mL三角瓶底部，室温挥发无水乙醇至干，移取挥发油溶液滴加纱布上，纱布迅速悬挂于三角瓶中，塞好三角瓶塞，用保鲜膜密封瓶塞，反应一定时间，打开棉塞，加入2mL无水乙醇于三角瓶中，充分摇匀，再加入18mL无水乙醇，摇匀，吸取一部分，于波长517nm处测得吸光值A1；2)以不加挥发油的等量无水乙醇为对照，以1)中方法同样操作，测得吸光值A2；3)以无水乙醇2mL代替DPPH·乙醇溶液，以1)中方法同样操作，测得吸光值A3；按下式计算挥发油对DPPH·自由基的清除率:作为优选，所述的DPPH·乙醇溶液浓度为25μg/mL。本专利技术由于采用了上述的技术方案，该方法操作简单，重复性好，为气相自由基清除剂的开发提供了技术基础。具体实施方式以下以具体实施例来说明本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不限于此：实施例1：植物挥发油的提取及其对气相体系DPPH自由基的清除能力。1、植物挥发油的提取采用水蒸气蒸馏法，原料与水重量配比为1：4-5，在提取温度为150-170℃，提取时间5-7h，加热过程中蒸气经锅顶鹅颈导入冷凝器中得到水与挥发油的液体混合物，经过油水分离后即可得到挥发油产品。其结果如下表表1挥发油得率挥发油品种用料(g)得量(ml)得率(％)茶树花挥发油5001.00.2杨梅叶挥发油5000.20.04薰衣草5001.20.24佛手挥发油5000.40.08艾叶5000.90.18丁香5001.30.26柠檬挥发油5002.30.46甜橙皮5005.61.12柚子皮挥发油5004.10.82橘子皮挥发油5005.21.04挥发油产自芳香植物(AromaticHerbst)，不同植物的香脂腺分布于花瓣、叶子、果实皮、根茎或树干上，将香囊提炼萃取后，即成为挥发油，因此挥发油得率普遍较低，新鲜甜橙皮挥发油含量最高，水蒸气蒸馏法提取得率可达1.12％，杨梅叶挥发油含量最低，得率仅为0.04％。2、植物挥发油气相体系自由基清除实验①取DPPH·乙醇溶液(浓度为25μg/mL)2-3mL滴于100mL三角瓶底部，室温挥发无水乙醇至干，移取不同浓度的挥发油溶液50μL滴加纱布上，纱布迅速悬挂于三角瓶中，塞好三角瓶塞，用保鲜膜密封瓶塞，反应一定时间，打开瓶塞，加入2mL无水乙醇于三角瓶中，充分摇匀，再加入18mL无水乙醇，摇匀，吸取一部分，于波长517nm处测得吸光值A1；②以不加挥发油的等量无水乙醇为对照，以(1)中方法同样操作，测得吸光值A2；③以无水乙醇2mL代替DPPH·乙醇溶液，以(1)中方法同样操作，测得吸光值A3；按下式计算挥发油对DPPH·自由基的清除率:按以上方法得到艾叶、丁香、薰衣草、甜橙皮、橘皮、柚子皮、柠檬皮、佛手叶、杨梅叶、茶树花等10余种植物原料提取得到的挥发油其清除DPPH自由基的能力如下所示：根据实验结果，橘皮挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y＝203.68x+41.531，相关系数R2＝0.984，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.0416μg/mL。根据实验结果，柚子挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y＝351.72x+46.835，相关系数R2＝0.8647，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.009μg/mL。根据实验结果，薰衣草橘皮挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y＝278.19x+40.006，相关系数R2＝0.9201，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.036μg/mL。根据实验结果，甜橙皮挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y＝224.22x+38.904，相关系数R2＝0.9875，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.049μg/mL。根据实验结果，佛手苷挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）取DPPH·乙醇溶液2‑3mL滴于100mL三角瓶底部，室温挥发无水乙醇至干，移取挥发油溶液滴加纱布上，纱布迅速悬挂于三角瓶中，塞好三角瓶塞，用保鲜膜密封瓶塞，反应一定时间，打开棉塞，加入2mL 无水乙醇于三角瓶中，充分摇匀，再加入18mL无水乙醇，摇匀，吸取一部分，于波长517nm 处测得吸光值A1；2）以不加挥发油的等量无水乙醇为对照，以1）中方法同样操作，测得吸光值A2；3）以无水乙醇2mL代替DPPH·乙醇溶液，以1）中方法同样操作，测得吸光值A3；按下式计算挥发油对DPPH·自由基的清除率:清除率=×100%。
【技术特征摘要】
1.一种测定植物源挥发油提取物气相自由基清除活性的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）取DPPH·乙醇溶液2-3mL滴于100mL三角瓶底部，DPPH·乙醇溶液浓度为25μg/mL，室温挥发无水乙醇至干，移取挥发油溶液滴加纱布上，纱布迅速悬挂于三角瓶中，塞好三角瓶塞，用保鲜膜密封瓶塞，反应一定时间，打开棉塞，加入2mL无水乙醇于三角瓶中，充分摇匀，再加入18mL无水乙醇，摇匀，吸取一部分，于波长517nm处测得吸光值A1；所述的挥发油溶液采用水蒸气蒸馏法，原料与水重量配比为1：4-5，在提取温度为150-170℃，提取时间5-7h，加热过程中蒸气经锅顶鹅颈导入冷凝器中得到水与挥发油的液体混合物，经过油水分离后即可得到挥发油溶液；所述的挥发油溶液为艾叶、丁香、薰衣草、甜橙皮、橘皮、柚子皮、柠檬皮、佛手叶、杨梅叶、茶树花原料提取得到的挥发油；2）以不加挥发油的等量无水乙醇为对照，以1）中方法同样操作，测得吸光值A2；3）以无水乙醇2mL代替DPPH·乙醇溶液，以1）中方法同样操作，测得吸光值A3；按下式计算挥发油对DPPH·自由基的清除率:清除率=×100%；4）计算挥发油溶液清除DPPH自由基的能力如下所示：橘皮挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y=203.68x+41.531，相关系数R2=0.984，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.0416μg/mL；柚子挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y=351.72x+46.835，相关系数R2=0.8647，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.009μg/mL；薰衣草橘皮挥发油对气相体系中DPPH自由基的清除的线性回归方程为y=278.19x+40.006，相关系数R2=0.9201，在0.01μg/mL-0.0125μg/mL的挥发油浓度范围下具有较好的线性相关性，通过线性方程可求出半数清除效应浓度EC50为0.036μg/mL；甜橙皮挥发油对气相体系...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨君，储国海，尹洁，黄芳芳，朱丽云，张拥军，胡安福，蒋健，
申请(专利权)人：浙江中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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