本发明专利技术公开了一种含融合蛋白CTT3H的结核病亚单位疫苗及疫苗佐剂。所述疫苗含有融合蛋白CTT3H，其编码基因为CFP10、TB10.4、TB8.4、Rv3615c以及HBHA基因按照CFP10-TB10.4-TB8.4-Rv3615c-HBHA的顺序串联。本发明专利技术还提供了三种疫苗佐剂，配合所述含融合蛋白CTT3H的结核病亚单位疫苗，提供更佳的免疫应答效果。本发明专利技术通过选择抗原基因和融合顺序制造出融合蛋白，配合相应的疫苗佐剂，用于预防和治疗结核病效果良好，安全性高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种含融合蛋白CTT3H的结核病亚单 位疫苗及佐剂。
技术介绍
作为目前全球范围唯一预防结核病的疫苗，卡介苗（BCG)能够有效的预防婴幼儿 重症结核病如粟粒样结核病及结核性脑膜炎，但对于预防成人肺结核病的发生、发展的效 果非常有限。因此，急需发展一种合适的BCG初免后的增强疫苗，以提高其对成人结核病的 预防效果。 除此而外，BCG不适用于免疫力低下的人群，如HIV感染等免疫缺陷人群接种BCG 后，反而引起死亡率的升高；BCG初免婴儿后，成年阶段再次免疫BCG，增强免疫的效果有 限，在临床上推荐仅免疫接种一次BCG。因此，采用异源性疫苗一一亚单位疫苗来增强BCG 免疫的效果，对于成人肺结核病的预防具有重要意义和实践价值。因为成分明确、安全稳 定，便于生产，结核病亚单位疫苗在结核病疫苗研制上受到广泛重视。但是，目前已知的结 核病亚单位疫苗仍然存在免疫应答效果不理想的问题，主要受限于可供选择的抗原种类有 限和缺乏适宜的能够刺激T细胞免疫应答的佐剂。
技术实现思路
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种含融合蛋白CTT3H的结 核病亚单位疫苗，其目的在于通过选择抗原基因和融合顺序制造出融合蛋白，配合本专利技术 提供的疫苗佐剂，用于预防和治疗结核病，由此解决BCG对于预防成人肺结核病的发生、发 展的效果有限；不适用于免疫力低下的人群，如HIV感染等免疫缺陷人群接种BCG后，反而 引起死亡率的升高；BCG初免后再次注射，增强免疫的效果有限等技术问题。 为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种结核病亚单位疫苗，含有融 合蛋白CTT3H，其浓度为0. lmg/ml至lmg/ml，所述融合蛋白CTT3H其编码基因为CFP10、 TBKX 4、TB8. 4、Rv3615c 以及 HBHA 基因按照 CFP10-TB10. 4-TB8. 4-Rv3615c-HBHA 的顺序串 联。。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其所述融合蛋白CTT3H的序列为： (1)由SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或 (2)与序列SEQ ID No. 1限定的氨基酸序列同源性在80%至100%编码相同功能 蛋白质的氨基酸序列；或 (3) SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸具有同 等活性的由（1)衍生的蛋白。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其或含有0. 2mg/ml至0. 3mg/ml单磷酰脂质A、 0· 2mg/ml至0· 3mg/ml的海藻糖、体积分数1%至4%的角藍稀油、体积分数1%至4%的司 盘85、体积分数0· 1 %至0· 4%的吐温-80、以及5mg/ml至20mg/ml热灭活的牡牛分枝杆菌， 为油包水样溶液。所述海藻糖优选6,6' -二分枝菌酸。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其或含有lmg/ml至4mg/ml二甲基双十八烧基 按、以及5mg/ml至20mg/ml热灭活的牡牛分枝杆菌，为脂质体形式。 优选地，所述结核病亚单位疫苗，其或含有lmg/ml至4mg/ml二甲基双十八烧基 按、0· 2mg/ml至0· 3mg/ml单磷酰脂质A、以及0· 2mg/ml至0· 3mg/ml的海藻糖，为脂质体形 式。所述海藻糖优选6, 6'-二分枝菌酸。 按照本专利技术的另一方面，提供了一种疫苗佐剂，含有0. 4mg/ml至0. 6mg/ml单磷酰 脂质八、0.411^/1]11至0.611^/1]11的海藻糖、体积分数2%至8%的角藍稀油、体积分数2%至 8%的司盘85、体积分数0.2%至0.8%的吐温-80、以及1〇11^/1]11至4〇11^/1]11热灭活的牡牛 分枝杆菌，为油包水样溶液。 优选地，所述疫苗佐剂，其所述海藻糖为6, 6' -二分枝菌酸。 按照本专利技术的另一方面，提供了一种疫苗佐剂，含有2mg/ml至8mg/ml二甲基双 十八烧基按、以及l〇mg/ml至40mg/ml热灭活的牡牛分枝杆菌，为脂质体形式。 按照本专利技术的另一方面，提供了一种疫苗佐剂，含有2mg/ml至8mg/ml二甲基双 十八烧基按、0. 4mg/ml至0. 6mg/ml单磷酰脂质A、以及0. 4mg/ml至0. 6mg/ml的海藻糖，为 脂质体形式。 优选地，所述疫苗佐剂，其所述海藻糖为6, 6' -二分枝菌酸。总体而言，通过本发 明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于筛选特定的抗原，并按照一定的顺序进行 表达，制备的融合蛋白能有效产生抗原特异的THl型免疫应答，配合本专利技术提供红的佐剂 能够取得更好的免疫应答效果。同时相对于现有的卡介苗，具有良好的安全性。能够取得 下列增强机体抗结核免疫反应的有益效果。【附图说明】 图1为实施例2的融合蛋白CTT3H的构建、表达纯化和鉴定结果图； 图2为实施例15的不同组小鼠血清CTT3H特异的IgG抗体、亚类及IgG2a/IgGl 比值结果图； 图3为实施例15的特异的小鼠脾细胞上清中细胞因子IFN- γ和TNF- α的水平 结果图，其中一代表 ρ〈0· 05, * 代表 ρ〈0· 05, vs. PBS control ; 图4为实施例15的流式检测融合蛋白CTT3H和PH)特异的C57BL/6小鼠脾细胞 总细胞因子反应结果图，其中一代表Ρ〈〇· 05，*代表ρ〈0· 05, vs. PBS control ; 图5为实施例15的流式检测融合蛋白CTT3H和PH)特异的C57BL/6小鼠脾细胞 多功能T细胞结果图，其中一代表ρ〈0· 05, *代表ρ〈0· 05, vs. PBS control ; 图6为实施例15的流式检测体内细胞毒性T淋巴细胞的杀伤活性结果图； 图7为实施例16的气溶胶攻击感染免疫C57BL/6小鼠四周后的脾、肺脏荷菌量以 及肺脏的组织病理学结果图；其中图7A、图7B分别为气溶胶攻击感染免疫C57BL/6小鼠四 周后的肺脏、脾脏荷菌量；图7C为各组的肺脏病理评分；图7D为各组肺脏的组织病理学显 微照片，其中HE-代表l〇〇um，AFS-代表50um，箭头代表AFS阳性细菌。【具体实施方式】 为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对 本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并 不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要 彼此之间未构成冲突就可以相互组合。 本专利技术提供的结核病亚单位疫苗，含有融合蛋白CTT3H，其浓度为0. lmg/ml至 lmg/ml，还含有以下三组成分中的一组的：（1)0. 2mg/ml至0. 3mg/ml单磷酰脂质A(英文 缩写为MPL,后同）、0. 2mg/ml至0. 3mg/ml的海藻糖（英文缩写为TDB,后同）、体积分数 1 %至4%的角鲨烯油、体积分数1 %至4%的司盘85、体积分数0. 1 %至0. 4%的吐温-80、 以及5mg/ml至20mg/ml热灭活的牡牛分枝杆菌（英文缩写为MV，后同），为油包水样溶 液；（2) lmg/ml至4mg/ml二甲基双十八烧基按（英文缩写为DDA，后同）、以及5mg/ml至 20mg/ml热灭本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种结核病亚单位疫苗，其特征在于，含有融合蛋白CTT3H，其浓度为0.1mg/ml至1mg/ml，所述融合蛋白CTT3H其编码基因为CFP10、TB10.4、TB8.4、Rv3615c以及HBHA基因按照CFP10‑TB10.4‑TB8.4‑Rv3615c‑HBHA的顺序串联。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：范雄林，滕新栋，田茂鹏，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。