本发明专利技术公开了一种铁皮石斛种苗组织培养的方法，包括如下步骤：灭菌：将接种室和接种器械进行灭菌；萌发：选取铁皮石斛蒴果，对蒴果进行消毒，接着将蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于装有萌发营养液的培养瓶中里进行种子萌发培养，培养35-40天后形成绿色的原球茎；移植：将原球茎移入装有组培营养液的培养瓶中进行原球茎增殖分化培养，培养20-25天后得到幼苗；将幼苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行幼苗增殖分化培养，培养30-35天后得到小苗；将小苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养60-65天后得到中苗；将中苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养65-70天后得到铁皮石斛种苗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物生物
，尤其涉及。
技术介绍
铁皮石斛是著名的石斛品种，具有独特的药用价值，位列中华九大仙草之首。秦汉时期的《神农本草经》记载铁皮石斛“主伤中、除痹、下气、补五脏虚劳羸瘦、强阴、久服厚肠胃”。现代化学和药理研宄表明，铁皮石斛的主要有效成分是多糖，多糖含量高达20-30%。因其所含的石斛多糖、生物碱、氨基酸、微量元素等成分具有增强机体的免疫能力，抗氧化，抗衰老，降低血糖，养阴生津，强肾益精，抑制肿瘤细胞，缓解体力疲劳等独特功效。但是由于野生铁皮石斛主要生长在崇山峻岭的悬崖峭壁之上，因其种子极小，每个蒴果含有大约2000粒种子，细如粉尘且无胚乳，在自然条件下萌发率极低，自然资源十分稀少。加上常年无节制采掘，野生资源日渐枯竭，自然产量难以满足目前市场需求。迄今，铁皮石斛的组织培养快速繁殖大多都选用茎尖、新芽、休眠芽为外植体，通过拟原球茎途径培养。用无菌种子产生原球茎组培方法鲜有报道。尽管这些方法优化了传统生产的培养基成分，操作简便，生产成本低，药用成分接近野生铁皮石斛，但存在繁殖率较低，分化慢，难于进行批量生产和工厂化生产等问题。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了，在培养不同阶段采用了不同配方的营养液，其均衡的营养成分不仅能促进石斛栽培苗的快速生长，且提高了石斛栽培苗的质量，而且不受季节限制，大大缩短了种苗组织培养的时间和成本，还能提高铁皮石斛中多糖含量。本专利技术提出的，包括如下步骤:S1、灭菌:将接种室和接种器械进行灭菌；S2、萌发:选取合格的铁皮石斛的蒴果，对蒴果进行消毒处理，将消毒处理后的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于装有萌发营养液的培养瓶中里进行种子萌发培养，培养35-40天后形成绿色的原球茎；S3、移植:将原球茎移入装有组培营养液的培养瓶中进行原球茎增殖分化培养，培养20-25天后得到幼苗；将幼苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行幼苗增殖分化培养，培养30-35天后得到苗高为Icm以上的小苗；将小苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养60-65天后得到苗高为3-4cm的中苗；将中苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养65-70天后得到苗高为5cm以上的铁皮石斛种苗。S2中合格的铁皮石斛的蒴果为新鲜未裂开的铁皮石斛蒴果。优选地，SI中，所述灭菌为紫外灭菌和/或臭氧灭菌。优选地，S2中，所述消毒处理为采用95%医用酒精浸润蒴果表面。优选地，S2中，萌发营养液的组分包括:硫酸锰0.007-0.012g/L，硫酸锌 6.2-6.4X 10_3g/L，硫酸铜 5.3-5.4X 10_5g/L，硫酸亚铁 0.015-0.022g/L，硫酸镁0.15-0.24g/L，硝酸铵 0.77-0.83g/L，硝酸钾 0.9-lg/L，氯化钙 0.2-0.24g/L，氯化钴 6.2-6.6X l(T5g/L，钼酸钠 4.2-4.3X l(T4g/L，磷酸二氢钙 0.085-0.095g/L，碘化钾 6.3-6.5 X 10 VL,硼酸 7.3-7.5X l(T3g/L，乙二胺四乙酸二钠 0.03-0.05g/L，肌醇 0.12-0.15g/L，烟酸 3.1-3.4X l(T4g/L，盐酸吡哆醇 6.4-6.5X l(T4g/L，盐酸硫胺素1.1-1.4X10_4g/L，甘氨酸 1.2-1.4X10_3g/L，琼脂 4-4.2g/L，白糖 38_43g/L。优选地，S2中，萌发营养液的组分包括:硫酸锰0.01g/L，硫酸锌6.30X 10_3g/L，硫酸铜5.36X 10_5g/L，硫酸亚铁0.02g/L，硫酸镁0.19g/L，硝酸铵0.81g/L，硝酸钾0.95g/L，氯化钙 0.22g/L，氯化钴 6.43X l(T5g/L，钼酸钠 4.29X l(T4g/L，磷酸二氢钙 0.09g/L，碘化钾6.39 X 10 VL,硼酸7.46X 10_3g/L，乙二胺四乙酸二钠0.04g/L，肌醇0.13g/L，烟酸3.21 X 10_4g/L，盐酸吡哆醇 6.43 X 10_4g/L，盐酸硫胺素 1.29 X 10_4g/L，甘氨酸 1.29 X 10_3g/L，琼脂 4.09g/L，白糖 40g/Lo优选地，S2中，种子萌发培养的培养条件如下:培养温度为23_24°C，培养光照强度为1500-1800Lux，培养光照时间为12_13h/d，平均消毒频率为1-1.5次/天。优选地，S3中，组培营养液的组分包括:硫酸锰0.007-0.012g/L，硫酸锌 6.2-6.4 X 10 Vl,硫酸铜 5.3-5.4X 10_5g/L，硫酸亚铁 0.015-0.022g/L，硫酸镁0.15-0.24g/L，硝酸铵 0.77-0.83g/L，硝酸钾 0.9-lg/L,氯化钙 0.2-0.24g/L，氯化钴 6.2-6.6X l(T5g/L，钼酸钠 4.2-4.3X l(T4g/L，磷酸二氢钙 0.085-0.095g/L，碘化钾 6.3-6.5 X 10 VL,硼酸 7.3-7.5X l(T3g/L，乙二胺四乙酸二钠 0.03-0.05g/L，肌醇 0.12-0.15g/L，烟酸 3.1-3.4X l(T4g/L，盐酸吡哆醇 6.4-6.5X l(T4g/L，盐酸硫胺素1.1-1.4X 10Vl,甘氨酸 1.2-1.4X 10_3g/L，琼脂 4-4.2g/L，香蕉泥 67_72g/L，白糖38-43g/Lo优选地，S3中，组培营养液的组分包括:硫酸锰0.01g/L，硫酸锌6.30X 10_3g/L，硫酸铜5.36X 10_5g/L，硫酸亚铁0.02g/L，硫酸镁0.19g/L，硝酸铵0.81g/L，硝酸钾0.95g/L，氯化钙 0.22g/L，氯化钴 6.43X l(T5g/L，钼酸钠 4.29X l(T4g/L，磷酸二氢钙 0.09g/L，碘化钾6.39 X 10 VL,硼酸7.46X 10_3g/L，乙二胺四乙酸二钠0.04g/L，肌醇0.13g/L，烟酸3.21 X 10_4g/L，盐酸吡哆醇 6.43 X 10_4g/L，盐酸硫胺素 1.29 X 10_4g/L，甘氨酸 1.29 X 10_3g/L，琼脂 4.09g/L，香焦泥 70g/L，白糖 40g/L。优选地，S3中，培养瓶中的移植密度为18-20株/瓶。优选地，S3中，增殖分化培养和壮苗培养的培养条件如下:培养温度为23_24°C，培养光照强度为1500-1800Lux，培养光照时间为12_13h/d，平均消毒频率为1-1.5次/天。上述的萌发营养液和组培营养液的溶剂均为蒸馏水。本专利技术采用组织培养方法成苗，在培养不同阶段采用了不同配方的营养液，其均衡的营养成分不仅能促进石斛栽培苗的快速生长，且提高了石斛栽培苗的质量；在原球茎诱导阶段，萌发营养液能有效的提高了种子的诱导率，在原球茎分化阶段，采用了组培营养液，使得增值系数提高到10，解决一直以来使用蒴果繁育时遇到的原球茎分化率低，增殖率低，试管苗长势弱的问题；而且本专利技术不受季节限制，从铁皮石斛种子到培养成种苗，只需7.5个月，大大缩短了种苗组织培养的时间和成本，与传统种苗扩繁相比，种苗的扩繁速度得到大幅提高，种苗生长健壮、叶色浓绿，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铁皮石斛种苗组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、灭菌：将接种室和接种器械进行灭菌；S2、萌发：选取合格的铁皮石斛的蒴果，对蒴果进行消毒处理，将消毒处理后的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于装有萌发营养液的培养瓶中里进行种子萌发培养，培养35‑40天后形成绿色的原球茎；S3、移植：将原球茎移入装有组培营养液的培养瓶中进行原球茎增殖分化培养，培养20‑25天后得到幼苗；将幼苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行幼苗增殖分化培养，培养30‑35天后得到苗高为1cm以上的小苗；将小苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养60‑65天后得到苗高为3‑4cm的中苗；将中苗移入装有组培营养液的培养瓶中进行壮苗培养，培养65‑70天后得到苗高为5cm以上的铁皮石斛种苗。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李军，
申请(专利权)人：安徽康久生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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