一种铁皮石斛种苗工厂化生产方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛种苗工厂化生产方法，包括外植体的选取、预处理和消毒；侧芽萌发；原球茎诱导；继代培养；原球茎分化培养；壮苗生根培养、瓶苗移栽等步骤，每个步骤中再利用特殊配制的培养基进行培育。本发明专利技术的有益效果是：外植体取材容易且消毒效率高、增殖系数高且稳定、培养基成分独特且简洁实用、繁殖周期短且生产成本低，生产出的种苗遗传性状稳定、粗壮整齐、生长势强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种铁皮石斛种苗エ厂化生产方法，属于生物工程

技术介绍
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国传统名贵中药材,具有滋阴清热、益胃生津、润肺明目、抗癌防老等功效。由于生态破坏与过度开采，野生铁皮石斛已濒临灭绝，其市场价格越来越贵，被誉为“植物熊猫”、“植物黄金”；1987年国务院把铁皮石斛列为重点保护对象。进入新世纪以来，随着铁皮石斛栽培技术的突破，产业得到了快速的发展，全国铁皮石斛现有种植面积突破3万亩，产值30亿元，成为我国产销量最大、发展最快的中药材之一。铁皮石斛种子内不含胚乳，自然条件下很难萌发，发芽率极低，且传统的无性繁殖方式繁殖系数低，故自身的种子繁殖和营养繁殖均难以满足大量生产的需要。因此，许多机构和学者对铁皮石斛的种子无菌播种和组织培养进行了研究，但目前真正能够用于商品化生产的技术却很少，产业化生产广泛存在种苗生产周期长、生产成本高、繁殖系数低、质量參差不齐等问题，导致大規模エ厂化生产种苗的效率低下、经济效益不佳。同吋，目前行业种苗生产基本都采用种子无菌播种方式，该方法存在种苗变异性大、性状表现不一致、种苗品质退化快、经几代继代増殖后老化现象严重等问题，导致种苗质量差且优质种质难以保存。利用茎段作为外植体进行铁皮石斛种苗组织培养，具有取材容易、繁殖周期短、保持母体优良性状以及形成的新植株健壮易于移栽等优点，对于优质种苗的商品化生产和种质资源的保护具有重要意义。但众多研究结果表明，铁皮石斛茎段组织培养中仍然存在一些问题，如铁皮石斛原球 茎诱导培养中所加入的添加物及其浓度对原球茎的影响，虽然铁皮石斛的繁殖系数有较大的提高，但组织培养中原球茎増殖的稳定性不强，试验结果重复性不十分理想等。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中铁皮石斛组培时原球茎增殖稳定性不强的缺陷，提供一种铁皮石斛种苗エ厂化生产方法来解决上述问题。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下一种铁皮石斛种苗エ厂化生产方法，包括如下步骤A、外植体的选取、预处理及消毒；B、侧芽萌发；C、切取B步骤中所萌发的幼苗的带芽茎段，去叶后作为外植体，在诱导培养基中进行原球茎诱导培养；D、将经C步骤诱导培养过的原球茎转移到继代增殖培养基中进行继代培养；E、将经D步骤继代培养产生的原球茎团转接到分化培养基中进行原球茎分化培养;F、将E步骤中经原球茎分化培养产生的无根小苗转接到壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养；G、将F步骤中经壮苗生根培养产生的试管苗进行炼苗，然后采用穴盘育苗技术进行移栽；其中，所述诱导培养基的成分组成为l/2MS、f2mg/L的6-BA、15 25g/L的蔗糖、10 15%体积分数的椰汁和5 7g琼脂；所述继代増殖培养基的成分组成为l/2MS、2(T25g/L的蔗糖、10 15%体积分数的椰汁和5 7g琼脂，椰汁可以有效防止组织褐化，从而促进原球茎的増殖。在原球茎増殖培养中，还应注意原球茎切块的大小，以及其表现出的一定的群体效应。所述原球茎分化培养基的成分组成为l/2MS、2(T25g/L的蔗糖、10 15%体积分数的椰汁和5 7g琼脂，铁皮石斛原·球茎的分化相对容易，椰汁同样有促进原球茎分化的作用，因此原球茎在继代增殖培养基上就可以分化，且效果良好，这样可减少组培环节，降低成本，提高效率。所述壮苗生根培养基的成分组成为l/2MS、15 25g/L的蔗糖、l(Tl5%体积分数的椰汁、5 7g琼脂和0. 2^0. 5g/L的活性炭，在培养基内加入一定浓度的活性炭有助于根系的形成；加入椰汁能明显的促进试管苗的生长和根系的形成，出产的种苗粗壮、整齐。本专利技术中，所述的A步骤具体为在5 10月，从生长旺盛、无病害的野生雁荡种或“牧歌I号”(杂交品系)优选个体植株上剪取一年生茎、去叶，以茎节为中心切成段，茎节的上下各留0. 8 1. 5cm，流水冲洗l(T20min，在超净工作台上用65 75%的こ醇消毒3(T40s后，再用0. 1%的HgCl2浸泡灭菌5!Omin,用无菌水冲洗3、遍,用无菌滤纸吸干水分；用解剖刀剖去腋芽苞叶，再用0. 1%的HgCl2浸泡灭菌5 lOmin，无菌水冲洗3飞遍，制备出茎段。“牧歌I号”杂交品系的铁皮石斛性状为软脚，茎杆青紫红色，茎粗flOmm，肉质，纤维含量少；节间2 3cm，具明显环状铁青的黑节性状；叶二列，互生，长圆状披针形，叶鞘常具紫斑；总状花序从茎顶部发出，花:T4朵，萼片及花瓣黄緑色。该品系抗病性和抗寒性强，具有良好的分蘖性能；采收期内其有效成分可溶性多糖含量在35 40%之间，远超2010版国家药典标准。由于纤维含量低，ロ感良好，嚼之有黏滑感，较适宜鲜食；采用现代温室设施栽培，亩产可达600公斤以上。本专利技术中，所述的B步骤具体为在A步骤中制备出的茎段两端各切去0.5cm，接种到培养基上培养，设置培养条件为温度25°C、光照时间为12h、光照强度为20001x。本专利技术中，所述的D步骤需在C步骤进行30天开始。本专利技术中，所述的F步骤需在E步骤中培养出的无根苗长高到2 3cm时开始。本专利技术中，所述的F步骤中，培养条件设置为温度24 26°C、光强度150(T25001x、光照12小时/天、空气湿度50 60%。本专利技术中，所述的G步骤具体为在F步骤中培养出的试管苗长高至^lOcm后，直接转移至智能温室中炼苗1(T15天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，最后进行穴盘育苗。本专利技术中，所述的原球茎诱导培养基中的椰汁在使用前需进行过滤静置，椰汁需经过滤静置，加入椰汁能明显提高原球茎的诱导率，不用加NAA等生长素即可得到较高的诱导率，尽可能减少激素使用。本专利技术中，所述的穴盘育苗技术中，穴盘选用聚苯こ烯50孔穴盘(52cmX26cm)，基质配方为泥炭和珍珠岩按1:1的体积比复配，移栽环境设置为温度2(T30°C、空气相对湿度80、0%、光照200(T40001X，因为适合铁皮石斛穴盘苗生长的基质应具备保肥能力强、透水性好、透气性佳、容重较小，成本低等特点，基质中的液态含量在40%以上，气体含量保持在 20%-30%。整个组培过程中，组培室按10万级洁净度设计，采用初效、中效、高效空气过滤器三级过滤，经风管由顶部送风，下部两侧回风的空气洁净系统。不仅能够保证组培室内相对洁净的环境，減少污染，而且能控制培养室内空气流动方式和速度，提高了环境因子的控制水平。同时可实现组培室内温度、光照、相对湿度、CO2浓度等环境因子的综合控制。环境的洁净及精确调控能力结合组培エ艺流程的优化，可使生产种苗的质量更加稳定、整齐，而且污染率可降到1%。以下，大大降低了生产成本。在穴盘育苗过程中，选用智能温室作为铁皮石斛穴盘育苗的培养场所，这种智能温室具有加温系统、降温系统、遮阴系统、苗床系统、灌溉系统以及自动控制系统，其控制系统具备多功能处理性能，能够根据综合信息决定对温、光、CO2、相対湿度及其他因子的控制，以提供铁皮石斛穴盘苗生长的最佳条件。本专利技术的优点是采用该技术，移栽成活率可高达99%以上，且种苗健壮、生长快速。本专利技术所提供的方法具有外植体取材容易且消毒效率高、増殖系数高且稳定、培养基成分独特且简洁实用、繁殖周期短且生产成本低，生产出的种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铁皮石斛种苗工厂化生产方法，包括如下步骤：A、外植体的选取、预处理及消毒；B、侧芽萌发；C、切取B步骤中所萌发的幼苗的带芽茎段，去叶后作为外植体，在诱导培养基中进行原球茎诱导培养；D、将经C步骤诱导培养过的原球茎转移到继代增殖培养基中进行继代培养；E、将经D步骤继代培养产生的原球茎团转接到分化培养基中进行原球茎分化培养；F、将E步骤中经原球茎分化培养产生的无根小苗转接到壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养；G、将F步骤中经壮苗生根培养产生的试管苗进行炼苗，然后采用穴盘育苗技术进行移栽；其中，所述诱导培养基的成分组成为：1/2MS、1~2mg/L的6?BA、15~25g/L的蔗糖、10~15%体积分数的椰汁和5~7g琼脂；所述继代增殖培养基的成分组成为：1/2MS、20~25g/L的蔗糖、10~15%体积分数的椰汁和5~7g琼脂；所述原球茎分化培养基的成分组成为：1/2MS、20~25g/L的蔗糖、10~15%体积分数的椰汁和5~7g琼脂；所述壮苗生根培养基的成分组成为：1/2MS、15~25g/L的蔗糖、10~15%体积分数的椰汁、5~7g琼脂和0.2~0.5g/L的活性炭。

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛种苗工厂化生产方法，包括如下步骤A、外植体的选取、预处理及消毒；B、侧芽萌发；C、切取B步骤中所萌发的幼苗的带芽茎段，去叶后作为外植体，在诱导培养基中进行原球茎诱导培养；D、将经C步骤诱导培养过的原球茎转移到继代增殖培养基中进行继代培养；E、将经D步骤继代培养产生的原球茎团转接到分化培养基中进行原球茎分化培养；F、将E步骤中经原球茎分化培养产生的无根小苗转接到壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养；G、将F步骤中经壮苗生根培养产生的试管苗进行炼苗，然后采用穴盘育苗技术进行移栽；其中，所述诱导培养基的成分组成为1/2MS、r2mg/L的6_BA、15^25g/L的蔗糖、10 15%体积分数的椰汁和5 7g琼脂；所述继代增殖培养基的成分组成为l/2MS、2(T25g/L的蔗糖、1(Γ 5%体积分数的椰汁和5 7g琼脂；所述原球茎分化培养基的成分组成为l/2MS、2(T25g/L的蔗糖、1(Γ 5%体积分数的椰汁和5 7g琼脂；所述壮苗生根培养基的成分组成为l/2MS、15 25g/L的蔗糖、1(Γ 5%体积分数的椰汁、5 7g琼脂和O. 2 O. 5g/L的活性炭。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛种苗工厂化生产方法，其中所述的A步骤具体为在5 10月，从铁皮石斛植株上剪取一年生茎、去叶，以茎节为中心切成段，茎节的上下各留O. 8 1. 5cm，流水冲洗l(T20min，在超净工作台上用65 75%的乙醇消毒30 40s后，再用O.1%的HgCl2浸泡灭菌5 lOmin，用无菌水...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔德栋，
申请(专利权)人：德清牧歌生态农业有限公司，德清牧歌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：