本发明专利技术公开了一种用花生四烯酸提高三角褐指藻中岩藻黄素的方法，取灭菌海水与MAD母液混合获得营养液，在营养液中加入三角褐指藻母液培养，培养2天后，加入花生四烯酸，继续培养6天后收集藻液，离心分离，弃上清，收集藻体，将藻体冷冻干燥处理2天，研磨备用。该方法对提高三角褐指藻中的岩藻黄素含量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种用花生四烯酸提高三角褐指藻中岩 藻黄素的方法。
技术介绍
岩藻黄素（fucoxanthin)是一类广泛存在于褐藻和娃藻中的类胡萝卜素。这种 色素不仅存在于巨藻中，在微藻中也有发现。食物中获得的岩藻黄素在胃肠道中经过消化 酶的作用被水解成岩藻黄醇，通过淋巴系统和血液循环系统，最终岩藻黄醇在组织中积累。 岩藻黄素的结构非常的特殊。在它的分子结构中含有不同寻常的共轭双键和5,6_单环氧 基。正是由于其拥有这种结构才使得其具有抗癌、抗肥胖、抗炎症、抗糖尿病以及抑制血管 增生的作用。根据所报道的机理来看，主要是通过促进细胞周期停滞和诱导细胞凋亡两种 方式。其中，岩藻黄素通过促进细胞周期停滞的方式来抗癌主要在前列腺癌和肝癌的研宄 中发现，但是它们的革G标分子是不同的，分别为GADD45A和CyclinD。而诱导细胞凋亡的 方式抑制癌细胞主要是在白血病和结肠癌的研宄中发现的，靶标分子分别为Caspase-3, 7， 9和Bcl-2。近几年的研宄中发现肥胖是引起II型糖尿病，高血脂和高血压的重要原因。 Hayto等（2005)通过研宄表明，岩藻黄素能够激活激活线粒体解偶联蛋白（UCP1蛋白）的 转录。该蛋白存在两个作用，一是它能够促进脂肪的分解，二是通过在肝脏中生成DHA来降 低胆固醇的含量。WAT在能量储存器官和内分泌器官中具有重要的作用。WAT能够产生如 单核细胞趋化蛋白l(MCP-l)、肿瘤坏死因子（TNF-a)、白细胞介素6(IL-6)和脂联素。在 白色脂肪组织中，脂肪细胞因子的调节异常会引起血脂异常和高血压症状。Hosokawa等通 过研宄岩藻黄素对肥胖小鼠有关脂肪细胞因子相关mRNA转录情况。他们发现经岩藻黄素 的作用下MCP-l、TNF-a和IL-6相关mRNA的转录下降非常明显，并且其体重比对照组也明 显下降。 诱导子能够诱导转录植物中的特定基因，从而提高植物的次生代谢产物。诱导子 可以分为内源性诱导子和外源性诱导子，花生四烯酸属于外源性诱导子中不饱和脂肪酸 类。它是一种重要的诱导子，在细胞内作为第二信使而直接产于胞内信号的转导，或通过对 其它信号通路的调节间接影响细胞生物的活动。王丽丽等研宄了不同质量浓度的花生四烯 酸处理雨生红球藻，其细胞生长和虾青素含量影响。LeB等发现花生四烯酸能够诱导马铃 薯产生植保素。三角褐指藻（Phaeodactylumtricomutum)是一种娃藻。Kim等发现在三角 褐指藻中的岩藻黄素的含量要比巨藻中的还要高。因此三角褐指藻被认为是产岩藻黄素的 商业藻种。 本文通过利用不同浓度的花生四烯酸处理三角褐指藻，来研宄三角褐指藻的生长 状况，分离和提取三角褐指藻中的岩藻黄素并且利用HPLC对不同浓度的花生四烯酸处理 下的三角褐指藻中岩藻黄素含量的测定。进而得出最适花生四烯酸的浓度，提高岩藻黄素 的含量。为提高岩藻黄素含量提供有力的实验依据和实验手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该 方法对提高三角褐指藻中的岩藻黄素含量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短， 适于批量处理和工厂化生产。 本专利技术具体通过以下技术方案实现： -种用花生四烯酸提高三角褐指藻中岩藻黄素的方法，包括以下步骤： 1)将灭菌海水与MAD母液混合得营养液； 2)在营养液中加入三角褐指藻母液培养； 3)培养2天后，加入花生四烯酸； 4)继续培养6天后手机藻液，离心分离，弃上清，收集藻体； 5)将藻体冷冻干燥处理2天，研磨备用。本专利技术所述的MAD母液的配方为：KN03:10g，KH2P04:lg，FeS04.7H20 :0? 25g，MnS04: 0. 025g，EDTANa2:lg，V B1:0. 0006g，dH 20 :100ml。 本专利技术所述的培养条件为：62. 5ymolphotons/m2 ?s，25°C。 所述的灭菌海水与MAD母液的体积比为1:1000。 所述的营养液与三角褐指藻母液的体积比为1 : 10。 步骤（3)中培养液加入花生四烯酸后花生四烯酸的浓度为0.lmg/L?0.5mg/L，优 选的花生四稀酸的浓度为0.lmg/L。 步骤（5)中所述的冷冻干燥处理条件为：温度_70°C，压强999Pa。 本专利技术的优点在于：专利技术首次公开了从三角褐指藻中提取岩藻黄素，为提高岩藻 黄素含量还利用不同浓度的花生四烯酸处理三角褐指藻，寻找最适合的花生四烯酸处理浓 度，通过该浓度对三角褐指藻的诱导处理，其岩藻黄素的含量增加显著。该专利技术操作简单方 便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。由于岩藻黄素对抗癌，高血糖，心血 管疾病，糖尿病都有显著地功效，提高岩藻黄素的含量将满足人们治病的需要，并且能够提 高经济效益。【附图说明】 图1是实施例利用不同浓度花生四烯酸处理三角褐指藻后生长曲线； 图2是实施例不同浓度花生四烯酸处理三角褐指藻后岩藻黄素含量变化。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施 例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。 一、实验方法 1、三角褐指藻的培养 三角褐指藻由宁波大学海洋生物工程重点实验室微藻室提供。取过滤且高温灭菌 的海水，加入1:1000灭菌MAV母液。MAD母液的配方为：KN03:10g，KH2P04:lg，FeS04*7H20: 0? 25g，MnS04:0 . 0 2 5g，EDTANa2:lg，VB1 :0? 0006, dH20 :100ml。以1:10比例接入藻液，并 在62. 5 ymol photons/(m2，s)，25°C，12h/12h(黑暗/光照）条件下培养。每天分三个时 间段（8:00,12:00, 20:00)均匀摇藻体。 2、三角褐指藻光密度回归方程和生长曲线测定 取1ml藻液，倍比稀释，利用紫外可见分光光度计（6800型双光束，英国bibby科 技有限公司）测定每组稀释液的〇D_值，并且用血球计数法对各组样品计数。将所得数据 建立三角褐指藻光密度回归方程。每天同一时段分别取lml经不同浓度花生四烯酸处理 的三角褐指藻并当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用花生四烯酸提高三角褐指藻中岩藻黄素的方法，其特征在于包括以下步骤：1)取灭菌海水与MAD母液混合获得营养液；2)在营养液中加入三角褐指藻母液培养；3)培养2天后，加入花生四烯酸；4)继续培养6天后手机藻液，离心分离，弃上清，收集藻体；5)将藻体冷冻干燥处理2天，研磨备用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱帅旗，龚一富，刘浩，刘诗洁，陆程鹏，刘钊，王何瑜，
申请(专利权)人：龚一富，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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