本文提供作为针对呼吸道合胞病毒(RSV病毒)感染的改进的疫苗的重组改良型安卡拉痘苗病毒(MVA)株，以及相关产物、方法及用途。具体地说，本文提供基因工程化的重组MVA载体，其包含至少一条编码RSV膜糖蛋白的抗原决定簇的核苷酸序列和至少一条编码RSV核衣壳蛋白的抗原决定簇的核苷酸序列。本文还提供其例如适合于影响受试者的免疫反应或适合于诊断RSV感染以及确定受试者是否处于复发性RSV感染的风险中的产物、方法以及用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】重组改良型安卡拉痘苗病毒（MVA)呼吸道合胞病毒（RSV) 疫苗 领域 本专利技术涉及作为针对呼吸道合胞病毒（RSV病毒）感染的改进的疫苗的重组改良 型安卡拉痘苗病毒（modifiedvacciniavirusAnkara) (MVA病毒），以及相关产物、方法及 用途。具体地说，本专利技术涉及基因工程化的重组MVA载体，其包含至少一条编码RSV膜糖蛋 白的抗原决定簇的核苷酸序列和至少一条编码RSV核衣壳蛋白的抗原决定簇的核苷酸序 列。本专利技术还涉及其例如适合于影响受试者的免疫反应或适合于诊断RSV感染以及确定受 试者是否处于复发性RSV感染的风险中的产物、方法以及用途。 背景 RSV是一种重要的呼吸道病原体。在世界范围内，急性下呼吸道（LRT)感染在婴儿 和五岁以下儿童中引发显著发病率和死亡率。呼吸道合胞病毒（RSV)是临床上最重要的LRT感染原因；原发性RSV 感染通常到 2 岁时出现\111四七&(2009)，(：1111. Lab.Med. 29 (4) : 725-739]。因为原发性RSV感染不诱发对RSV的完全免疫，所以在一生中 出现频繁的再感染，其中最严重的感染发生于极年轻者、极年老者中以及任何年龄的免疫 缺陷患者中。 那些感染RSV者中多达40%最终患有需要住院治疗的严重LRT疾病，其中疾病 的严重性和强度取决于感染的量度和强度以及宿主反应。RSV在任何 年龄的患有免疫、呼吸道或心脏系统缺陷的患者中还可以引起严重的LRT疾病，并且还 可以使儿童预先倾向于较晚患有哮喘。仅在美国，RSV-年引起估计126, 000例住院治 疗和300例婴儿死亡。此外，RSV是每年冬天在年长患者和那些患有 潜在心肺或免疫抑制疾患者之中超过80, 000例住院治疗和超过13, 000例死亡的原因 。然而，尽管RSV作为呼吸道病原体具重要性，但当前市场上没有安全并 且有效的RSV疫苗。RSV是副粘病毒科（Paramyxoviridae)、肺病毒亚科（Pneumovirinae)的一种包膜 RNA病毒。各RSV病毒体含有具有约15, 191个核苷酸的非片段、负义、 单链RNA分子，其含有十段编码十一种独立的蛋白质的基因（M2含有两个开放阅读框），所 述i^一种独立的蛋白质包括八种结构蛋白（G、F、SH、M1、N、P、M2. 1以及L)和三种非结构蛋 白（NS1、NS2以及M2. 2)。基因组按以下顺序从NS1到L依序转录：3'_ NS1-NS2-N-P-M1-SH-G-F-M2. 1-M2. 2-L-5'。 病毒包膜含有三种跨膜糖蛋白（粘附糖蛋白（G)、融合糖蛋白（F)以及小疏水性蛋 白（SH))以及基质（Ml)蛋白。在RSV复制期间，病毒首先在由高度糖 基化G蛋白介导的过程中粘附于靶细胞。然后病毒在由F蛋白介导的过程中与宿主细胞融 合，从而穿透细胞膜并且进入宿主细胞；F蛋白也是形成RSV感染的细胞的合胞体特征所需 的。粘附和融合过程因SH蛋白而加强。Ml蛋白通过与包膜蛋白F和G以及与核衣壳蛋白 N、P以及M2. 1相互作用调节成熟RSV的组装（参见下文）。在包膜内，病毒RNA由转录酶 复合物壳体化，所述转录酶复合物由核衣壳蛋白（N)、磷蛋白（P)、转录延伸因子（M2. 1)以 及RNA聚合酶（L)蛋白组成。N与基因组RNA缔合，而P是病毒RNA聚 合酶L的辅因子。M2. 1是为病毒转录所必需的延伸因子，且M2. 2调节病毒基因组的转录。 最后，NS1和NS2抑制I型干扰素活性。 临床RSV分离株根据抗原组分类（A或B)并且基于各抗原组的病毒基因组内的遗 传变异性进一步再分成多个基因型（例如对于A组，A2或A&;而对于B组，BUCH-18537或 8/60)。分类是基于病毒与针对粘附糖蛋白（G蛋白）的单克隆抗体的反 应性并且通过各种遗传分析来进行。。 在病毒分离株之中，一些RSV编码蛋白在氨基酸序列层面是高度保守的（例如F)，而其它 蛋白质在两种主要抗原组之间以及其内部彻底改变（例如G) 。A和B抗 原组的F蛋白享有相当的同源性。与此相反，G蛋白在两种抗原组之间相当不同。 G蛋白是最可变的RSV蛋白，其中其超变C端区域是大部分的病毒株特异性表位 的成因。G蛋白的分子流行病学和演化模式已提供关于RSV的临床和流行病学特征的重要 信息。典型地，若干不同基因型立刻循环，并且在一个地区中占主导地位的基因型每年可变 化。然而，病毒株多样性对RSV的临床和流行病学特征的重要性仍了解得不充分。因此，重 组RSV蛋白伴有用于指示用于克隆基因或蛋白质的原始RSV株的病毒株标识。举例来说， 从RSV株A长克隆的G蛋白命名为G(A长）、RSVA长G或RSVA长G蛋白。 RSV刺激受感染宿主中的多种免疫反应，包括趋化因子和细胞因子的分泌、中 和体液和粘膜抗体的产生以及⑶4+(例如TH1和TH2)和⑶8+(例如CTL)T细胞的产生。 此类宿主免疫反应是RSV感染的临床表现的原因，因为病毒引起有限的体内细胞病变 。RSV诱发的疾病的表型表现和严重性显然由RSV感染刺激的一系列免 疫反应间的平衡和相互作用介导。 许多先前研宄表明细胞和体液免疫反应在对RSV的免疫性的诱导和RSV 感染的消除中以及在疾病进展中发挥不同作用。举例来说，使用人源化抗F抗体的研宄显示，虽然抗RSV抗体足以预防或限制 感染的严重性，但其不是清除病毒感染所需要的。与此相反，T细胞反应是清除已确定的RSV感染所必需 的。RSV诱导的T细胞反应还在感染期间的肺病变中发挥关键作用。举 例来说，干扰素-y(IFNY) _分泌TH1细胞（具有或不具有相关CD8+CTL反应）在具有最小 肺病变的情况下清除RSV，而白介素4 (IL-4)-分泌TH2细胞也清除RSV，但经常伴有显著的 肺变化，包括嗜酸性粒细胞浸润，其为在先前疫苗试验期间观测到增强性疾病的标志（参 见下文）。 尽管可获得的关于RSV感染的免疫学、病毒学以及生理学的信息是丰富的，然而， 如以下段落中更详细论述，仍远未确切地清楚哪种免疫反应可能最有效诱导持续免疫性， 同时在接种后暴露于RSV时还不产生增强性疾病。 现有疫苗开发 疫苗典型地使用若干策略中的一种来诱导针对目标感染剂或病原体（例如病毒、 细菌或寄生虫）的保护性免疫，包括：（1)灭活病原体制剂；（2)活减毒病原体制剂，包括 基因减毒病原体菌株；（3)纯化蛋白质亚基疫苗制剂；(4)编码病原体抗原的基于病毒载体 的疫苗和/或佐剂；以及（5)编码病原体抗原的基于DNA的疫苗。 初始RSV疫苗开发工作集中在灭活病毒制剂，直到二十世纪六十年代期间在美国 进行了测试福尔马林灭活RSV(FI-RSV)疫苗的功效的临床试验并且结果极糟。大量接种患者患有以嗜酸性粒细胞和嗜 中性粒细胞浸润为特征的增强性肺病并且在后续自然感染RSV之后发生大量的炎性反应 。那些患者中有许多 需要住院治疗并且少量垂危患者死亡。因此，研宄者开始搜寻在后续激发之后有助于增强 性疾病的发生的病毒和/或宿主因素，尝试开发更安全的RSV疫苗。所述搜寻已产生许多 关于的RSV生物学和其可诱导的广谱免疫反应的新信息，但安全并且有效的RSV疫苗仍然 难以获得。FI后RSV疫苗开发工作已大本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组改良型安卡拉痘苗病毒(MVA)，其包含编码至少一种呼吸道合胞病毒(RSV)膜糖蛋白的抗原决定簇的核苷酸序列，用于通过鼻内施用治疗或预防RSV感染，其中排除肌内施用。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：塞德里克·舍米内，罗宾·施泰格瓦尔德，保罗·查普林，
申请(专利权)人：巴法里安诺迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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