一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法技术

本发明专利技术公开了一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂，在固相中氧化形成二硫键，然后将环化的全保护的第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到全保护的阿托西班；然后脱去侧链保护基得到阿托西班粗肽，纯化转盐得到醋酸阿托西班；其中，所述的第一肽片段序列为阿托西班序列中的第1～8位氨基酸。本发明专利技术利用固液相结合的方法制备醋酸阿托西班，提高了产率和纯度，由于采用2-氯-三苯甲基氯树脂和固相环化使得成本降低，利于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于制药
，具体涉及一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法。
技术介绍
醋酸阿托西班为环九肽，是一种催产素类似物，是子宫内及蜕膜、胎膜上催产素受体的竞争性拮抗剂，可剂量依赖的抑制宫缩，推迟不足月分娩，达到保胎的目的，在临床上用于治疗早产。结构如下：在现有的醋酸阿托西班合成方法中，液相合成产生较多废液，反应时间长，每偶联一个氨基酸都需要进行纯化，后处理繁琐，收率低，不利于产业化生产。固相合成方法中中国专利CN101314613、CN101696236、CN103980350采用Rink Amide AM Resin逐一偶联得到线性肽树脂，然后固相氧化树脂、裂解纯化得到醋酸阿托西班。中国专利CN102127146采用Rink Amide Resin，通过逐一偶联得到线性肽树脂，裂解后液相氧化得到醋酸阿托西班。但是线性阿托西班溶解较差，液相氧化需要调试pH值，反应时间较长，氧化比较困难，效率比较低，同时，后续纯化工作非常困难。使用Rink Amide树脂羧基端氨基酸取代值不能太高，合成不经济；并且相对于2-氯-三苯甲基氯树脂价格不菲。所以本领域技术人员仍然期待以低成本高收率获得具有良好品质的产品。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有制备方法成本高，而且产品纯化困难，不易得到高纯度的阿托西班的问题，利用固液相结合片段缩合的方法制备醋酸阿托西班，提高了产率和纯度，由于采用2-氯-三苯甲基氯树脂和固相环化使得成本降低，利于大规模生产。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂，在固相中氧化形成二硫键，然后将环化的全保护的第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到全保护的阿托西班；然后脱去侧链保护基得到阿托西班粗肽，纯化转盐得到醋酸阿托西班；其中，所述的第一肽片段序列为阿托西班序列中的第1～8位氨基酸。上述片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，优选包括以下步骤：(1)固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂；所述的阿托西班的全保护的第一肽片段序列为：Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-OH，(2)使用I2或者H2O2为氧化剂氧化树脂，使得第1位的Mpa和第6位的Cys形成二硫键，得到环化的全保护的第一肽片段序列树脂；(3)环化的全保护的第一肽片段序列从固相载体上裂解，去除未反应的氧化剂(I2或者H2O2)；(4)环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到全保护的阿托西班；(5)将全保护的阿托西班裂解得到阿托西班粗品；(6)阿托西班粗品经纯化转盐得到醋酸阿托西班。步骤(1)中，全保护的第一肽片段序列树脂是由氨基酸依次偶联在固相载体上获得肽树脂；其中，所述的固相载体为酸敏感树脂，优选为2-氯-三苯甲基氯树脂。步骤(1)中，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；优选体积百分含量为20％哌啶的DMF溶液。步骤(1)中，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂的过程中，所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者DIC与HOBt按摩尔比1:1的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合。优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合；待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比是1:1。步骤(2)中，二硫键与氧化剂的摩尔比为1:5～10，优选1:6；溶剂为DMF或者DCM，优选为DMF。步骤(3)中，环化的全保护的第一肽片段序列从固相载体上裂解，所使用的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、或者体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物，优选体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液。去除未反应的氧化剂的方式是加入20～100mM维生素C水溶液去除未反应氧化剂，优选用20mM维生素C水溶液去除未反应氧化剂。步骤(4)中，环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合，所使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合、或者DIC与HOBt按摩尔比1:1的组合、或者EDC与HOBt按摩尔比1:1的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合，优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1:1:2的组合；待偶联的羧基端与HOBt的摩尔比是1:1。缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP、THF和DMSO中的任意一种或几种的组合，优选DMF。步骤(5)中，全保护阿托西班裂解的裂解液为TFA与H2O按体积比95:5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhOH与H2O按体积比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与H2O按体积比92.5:2.5:2.5:2.5的混合溶液。优选TFA与EDT与TIS与H2O按体积比92.5:2.5:2.5:2.5的混合溶液。步骤(6)中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐；流动相为0.25％v/v醋酸水溶液和80％v/v乙腈水溶液。有益效果：本专利技术相对现有技术具有以下优点：1、本专利技术利用高荷载量的树脂为起始原料，先采用标准的固相肽合成(SPPS)技术合成选定结构的高纯度肽片段，再采用液相缩合技术使肽片段缩合，从而获得高纯度(>99％)、高收率(>40％)的目标肽；2、相比较固相合成阿托西班的工艺，本专利技术：a.2-氯-三苯甲基氯树脂重复使用方法简便，相比Rink Amide树脂价格低廉；每个片段可使用高荷载量(>0.8mmol/g树脂)的固相载体，相比较Rink Amide树脂荷载量限制，物料通量增加；b.固相环化利用固相载体假稀释作用，使得环化产率提高，减少反应时间。相比较Rink Amide树脂固相环化，本专利技术中环化的肽片段在液相后处理可以更好地将未反应I2去除。3、采用超酸敏感型树脂合成的较短氨基酸的侧链保护肽片段序列纯度非常高，不必用色谱技术纯化，只需要进行沉淀、研磨即可使用；片段液相偶合，其杂质主要为未偶合的片段，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂，在固相中氧化形成二硫键，然后将环化的全保护的第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护的第一肽片段序列与H‑Gly‑NH2缩合得到全保护的阿托西班；然后脱去侧链保护基得到阿托西班粗肽，纯化转盐得到醋酸阿托西班；其中，所述的第一肽片段序列为阿托西班序列中的第1～8位氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，固相制备阿托西班的全
保护的第一肽片段序列树脂，在固相中氧化形成二硫键，然后将环化的全保护的第一肽
片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合
得到全保护的阿托西班；然后脱去侧链保护基得到阿托西班粗肽，纯化转盐得到醋酸阿
托西班；
其中，
所述的第一肽片段序列为阿托西班序列中的第1～8位氨基酸。
2.根据权利要求1所述的片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，它包
括以下步骤：
(1)固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂；
所述的阿托西班的全保护的第一肽片段序列为：
Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-OH，
(2)使用I2或者H2O2为氧化剂氧化树脂，使得第1位的Mpa和第6位的Cys形成
二硫键，得到环化的全保护的第一肽片段序列树脂；
(3)环化的全保护的第一肽片段序列从固相载体上裂解，去除未反应的氧化剂；
(4)环化的全保护的第一肽片段序列与H-Gly-NH2缩合得到全保护的阿托西班；
(5)将全保护的阿托西班裂解得到阿托西班粗品；
(6)阿托西班粗品经纯化转盐得到醋酸阿托西班。
3.根据权利要求2所述的片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，步骤
(1)中，全保护的第一肽片段序列树脂是由氨基酸依次偶联在固相载体上获得肽树脂；其
中，所述的固相载体为酸敏感树脂。
4.根据权利要求2所述的片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，步骤
(1)中，固相制备阿托西班的全保护的第一肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保
护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1％的DBU的
DMF溶液。
5.根据权利要求2所述的片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，其特征在于，步骤<...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭雅丽，常民，王锐，薛宏祥，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62