一株血清5型副猪嗜血杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株血清5型副猪嗜血杆菌菌株JX1002，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2014127。该菌株生物学性能稳定，对仔猪具有很强的致病性，灭活后接种仔猪，具有很好的免疫原性。将其作为疫苗候选株制成的单价疫苗安全性好，能够对仔猪产生较高的抗体，持续期长，能够抵抗同型野毒株的攻击，具有很好的免疫效力。在临床上使用该灭活疫苗，能够有效降低该病的发生，减少猪场的经济损失，其免疫效果达到或优于市场上现有商品化疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一株血清5型副猪嗜血杆菌及其应用
本专利技术涉及生物免疫领域，具体地说，涉及一株血清5型副猪嗜血杆菌及其应用。
技术介绍
副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病（Glasser ' sdisease),由副猪嗜血杆菌 (Haemophilus parasuis, Hps)引起。该病于1910年由德国学者Glasser首先报道，现已 在全世界范围内广泛分布。目前，副猪嗜血杆菌感染是引起猪场仔猪高死亡率的主要病因 之一。在美国，该病已成为危害保育猪群健康的重要传染病，与蓝耳病（PRRS)、圆环病毒 (PCV)并列为第一位，排在流感、链球菌和大肠杆菌病之前。该病目前也给中国猪群带来很 大威胁，随着猪繁殖与呼吸综合征（PRRS，蓝耳病）的流行，副猪嗜血杆菌病给猪群造成的 损失比以往更为严重，而爆发性的副猪嗜血杆菌病也比以往更为普遍。 Hps只感染猪，有很强的宿主特异性，可以影响2周龄?4月龄的猪，主要在断奶前 后和保育舍阶段发病，常见于5?8周龄，感染高峰通常见于保育期的4?6周，有些可早 在保育舍内最初2周时就开始出现，并一直持续到肥育期早期，发病率可达40%，严重时死 亡率可达50%。与以往相比，本病的流行特点已经发生改变。以前本病是零星散发发生的， 且与断奶猪的应激有关，但目前此病的发病率和死亡率均呈显著上升趋势，呈现地方流行 性，而且常与猪的几种重要病原体并发感染，如与猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及 猪圆环病毒引起混合感染。 Hps是一种细小杆菌，在显微镜下呈多形态，非溶血性，不运动，无芽孢，无鞭毛，革 兰氏阴性。新分离的菌株多呈球杆状或双球状，有时可呈短链状，在陈旧培养物中多呈多 形态，有长杆状和丝状。Hps属于需氧或兼性厌氧菌，最适生长温度为35?37°C，pH7. 6? 7.8, C023%?5%。在适宜培养基上生长的菌落呈圆形，隆起，表面光滑，边缘整齐，灰白色 半透明，针尖大小。Hps培养条件严格，生长依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD或V因子）， 不需要X因子。在巧克力培养基上生长较差，在加 NAD、马血清的M96支原体培养基或加酵 母浸出物的PPLO培养基上生长良好。目前副猪嗜血杆菌至少有15种血清型，其中血清1、 5、10、12、13、14型毒力最强，2、4、8、15型具有中等毒力，3、6、7、9、11型不能引起临床感染。 从世界范围内看，血清4、5、13型最为流行，日本、德国、美国、西班牙、加拿大和中国以血清 4型和5型最常见，澳大利亚和丹麦分离的菌株主要为血清5型和13型，但临床分离菌中约 20%无法定型。但最新的研究结果表明，危害北美各猪场的Hps流行血清型发生了改变，在 美国的猪场中血清5型不再广泛流行，而以血清4型（39%)和不能分型的分离株（27%) 最为流行。我国当前Hps流行的优势血清型主要为4、5、12、13型。Hps毒力和致病性可能 与细菌毒素有关，但至今这方面的报道很少。副猪嗜血杆菌是否只产生巴氏杆菌科的一些 非常重要的毒力因子如荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白以及它们与本菌的毒力是否有关，目 前还知之甚少。 我国是猪肉消费大国，猪肉的消费占总体肉食消费的80%以上，生猪价格的波动 会严重影响居民消费指数。目前曾严重影响我国养猪业的猪瘟、高致病性蓝耳病、猪圆环病 毒病等已经得到有效控制，但以副猪嗜血杆菌病为代表的细菌病对养猪业的危害正日益加 重。从而导致大量使用抗生素进行治疗，结果是：一方面导致猪产品抗生素超标，危害人的 身体健康，另一方面导致细菌耐药性不断增强，耐药菌株不断出现，尤其是副猪嗜血杆菌， 非常容易耐药，导致治疗效果不好，从而养殖户加大抗生素用量，造成恶性循环。国外研究 表明，用同血清型的菌株制成的灭活疫苗能够有效抵抗野毒株的感染，是预防和控制副猪 嗜血杆菌病最有效的措施。近年来，国内也开展了灭活疫苗的研究，显示了很好的防治效 果。因此，在了解本我国主要流行菌的血清型的基础上，采用灭活疫苗进行接种，可以有效 预防本病的发生。血清5型副猪嗜血杆菌致病力较强，在世界范围内流行最广，在我国也流 行最广泛，引起的危害也最大。同为5型的不同副猪嗜血杆菌菌株毒力不同，免疫原性也不 同，所以，通过动物试验筛选出一株毒力强、免疫原性好的菌株是制备副猪嗜血杆菌灭活疫 苗的关键技术。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一株毒力强、免疫原性好 的血清5型副猪嗜血杆菌及其应用。 为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下： 本专利技术首先提供一株血清5型副猪嗜血杆菌株JX1002,分类命名为副猪嗜血杆 菌（Haemophilus parasuis)(血清5型）（Serovar5),已于2〇14年4月 10 日保藏于中 国典型培养物保藏中心CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072,保藏编号CCTCC M 2014127。 该菌株是专利技术人于2010年2月在江西省南昌市一猪场发病猪分离获得的一株副 猪嗜血杆菌，经琼脂凝胶扩散试验证明，该菌株为血清5型。培养该菌株，经甲醛灭活，与适 宜的佐剂混合，制成单价灭活疫苗，使疫苗中含菌量为2. 5X 109CFU/mL。经动物试验表明， 该菌株是一株强毒株，对仔猪具有很强的致病力和很好免疫原性。 所述血清5型副猪嗜血杆菌株JX1002与其他5型副猪嗜血杆菌比较具有如下生 物学特性： 1.致病力强用该菌腹腔注射攻击16g?20g健康Balb/c小鼠，剂量为 5. OXlO9CFU/只，可导致80%以上小鼠死亡。用该菌腹腔注射攻击50日龄左右的健康易 感仔猪，剂量为5. 0 X IO9CFU/只，可导致100%以上仔猪发病或死亡。 2.免疫原性好灭活该菌，与白油佐剂1 :2乳化制成灭活疫苗，使每毫升疫苗中 含灭活前活菌数为2. OX IO9CFU,接种2?3周龄健康易感仔猪，首免2周后，以相同剂 量再接种一次，二免3周后，用该菌腹腔注射攻击50日龄左右的健康易感仔猪，剂量为 5. OX IO9CFU/只，免疫组猪80 %保护，而对照组至少80 %仔猪发病或死亡。 3.繁殖滴度高该菌的培养液OD值与活菌数大致呈现一种线性关系，经过拟合，得 到菌液OD值与活菌数关系曲线Y = (15. 244X-0. 1959) X IO8CFUAiL (R = 0. 9862)。通过菌 液OD值与活菌数的关系曲线，在确定菌液中活菌数时，可以很方便的通过测定菌液的OD值 而得到。 本专利技术还提供了所述血清5型副猪嗜血杆菌菌株JX1002在制备防治由血清5型 副猪嗜血杆菌导致的副猪嗜血杆菌病的药物中的应用。 本专利技术进一步提供一种防治副猪嗜血杆菌病的疫苗，包含前述菌株或由前述菌株 制备。所述疫苗可为单价或多价疫苗。 当其为单价疫苗时，可针对性较强的防治由血清5型副猪嗜血杆菌导致的副猪嗜 血杆菌病；当其为多价疫苗时，也可有效的防治由血清5型副猪嗜血杆菌导致的副猪嗜血 杆菌病。 作为优选，所述疫苗为灭活疫苗，包含灭活前述菌株。 作为优选，所述疫苗为单价疫苗，含菌量为I. 0-5. 0X109CFU/mL。 更为优选，所述单价疫苗的含菌量为2.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株血清5型副猪嗜血杆菌菌株JX1002，其特征在于，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2014127。

【技术特征摘要】
1. 一株血清5型副猪嗜血杆菌菌株JX1002,其特征在于，保藏在中国典型培养物保藏 中心，保藏编号为：CCTCC M 2014127。2. 权利要求1所述的血清5型副猪嗜血杆菌菌株JX1002在制备防治由血清5型副猪 嗜血杆菌导致的副猪嗜血杆菌病的药物中的应用。3. -种防治副猪嗜血杆菌病的疫苗，其特征在于，包含权利要求1所述菌株或由权利 要求1所述菌株制备。4. 根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗，包含灭活的权利要 求1所述菌株。5. 根据权利要求3或4所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为单价疫苗，含菌量为 1. 0 ?5. 0X109CFU/mL。6. 根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗的含菌量为2. 5X 109CFU/mL。7. 根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓成，邵卫星，吴发兴，张志，刘爽，董雅琴，李鹏，王佳，于美芳，
申请(专利权)人：中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：山东;37