一种玄参繁育方法技术

本发明专利技术公开了一种玄参繁育方法，包括以下步骤：a、株系筛选，b、材料处理，c、无性系建立，d、炼苗移植。脱毒种苗田间表现优异，植株健壮、长势一致，叶片浓绿、肥厚、宽大，产品品质极大提高。原原种田间无病虫害发生，原种及生产种病虫害极少发生，产量较常规苗分别提高166.6%、152.8%。

【技术实现步骤摘要】
一种玄参繁育方法
本专利技术涉及组织培养领域，确切地说是一种玄参繁育方法。
技术介绍
玄参为玄参科植物玄参(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根，始载于《神农本草经》，具有凉血滋阴，泻火解毒的功效，临床上用于热病伤阴、温毒发斑、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、白喉、痈肿疮毒等症，是我国特有种，目前仅在中国自然分布，全国大部分地区均有栽培，主产于浙江、安徽、湖北、贵州等地。为常用大宗药材，作为中成药的原料，可生产天王补心丸、天麻丸、脉络宁、清咽喉合剂等几十种中成药，现也运用于化妆品生产，作为植物润滑剂、防冻霜、防皱霜等。野生玄参的繁殖方式是利用种子进行有性繁殖，而药农为了保存优质品种，提高产量及缩短生长周期等，栽培玄参均采用无性繁殖的方式，但多年来缺乏品种的提纯复壮，病毒积累严重，产量和质量大幅度下降。因此，课题组于2009年开始进行玄参的品种搜集与鉴定工作，并于同期进行脱毒快繁技术研究，2010年成功获得玄参脱毒种，2011年进行田间对比试验。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种玄参繁育方法上述目的通过以下方案实现：一种玄参繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：a、株系筛选于玄参收获期优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃；b、材料处理与茎尖剥取(1)预处理与消毒于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm3左右，在无菌条件下置于70％左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1％升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；(2)茎尖剥取在解剖镜下将步骤(1)处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L；c、无性系建立外植体接种7d左右后，生长点开始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d左右形成丛生芽，待丛生芽苗高3～5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，20d左右为一个转接周期；增殖至适当的苗量后，选生长健壮，长势一致的试管苗，分批转入诱导生根培养基，诱导生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；d、炼苗移植苗生根后，将瓶塞打开，移至强光照下炼苗3d左右，炼苗后，取出试管苗，用自来水小心洗去根上的培养基残留物，然后将其移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1左右的基质中，成活后的试管苗生长稳定后移栽大田。所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：所述的无性系建立的所有操作的培养条件均为：培养温度为24～26℃，光照强度1500～2000Lx/12h.d。所述的一种玄参繁育方法，其特征在于：RT-PCR方法检测玄参花叶病毒：最佳反应体系：复性温度59℃，上、下游引物使用浓度各为25μmol/L，镁离子作用浓度为1.5μmol/L，dNTP作用浓度为400μmol/L，35个循环。最佳反应模式为：94℃预变性5min；94℃变性45s，59℃复性40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。所述的20d左右为一个转接周期指的是当增殖20d左右后，将茎段剪切后继续重复进行增殖培养所述的适当的苗量由试管苗需要繁育的数量决定。本专利技术的有益效果为：脱毒种苗田间表现优异，植株健壮、长势一致，叶片浓绿、肥厚、宽大，产品品质极大提高。原原种田间无病虫害发生，原种及生产种病虫害极少发生，产量较常规苗分别提高166.6％、152.8％。综合田间长势、产量、产品品质以及生产成本四个指标，形成玄参脱毒种苗繁育的最佳模式为：原原种——原种——生产种。具体实施方式实施例1、一、株系筛选玄参生长期，在亳州市谯城区进行地上片选，并于收获期在片选的基础上进行地下性状筛选，优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃。通过品种特征鉴别，与中国植物志玄参科植物玄参性状相吻合。多年生草本，株高140～160cm。根肥大，近圆柱形或纺锤形，支根3～6条，粗3～4cm，外皮灰黄褐色，纵皱多，具皮孔，顶端具多数由白色鳞片包裹的芽。茎直立、方形，光滑或有腺状柔毛。叶对生，叶片卵形或卵状椭圆形，先端渐尖，基部圆形或近截形，边缘具顿锯齿，齿缘反卷；叶背有稀疏散生的细毛。聚伞花序疏散开展，呈圆锥状，着生于枝茎上部，混合花序，花梗长。花萼具5萼片，卵圆形，先端钝，绿色；花冠暗红紫色，唇形，长约8mm，5裂。雄蕊5枚，4枚有花药，2强，一枚退化呈鳞片状，贴生在花冠管上；雌蕊一枚。花盘明显，子房上位，2室，花柱细长。蒴果卵圆形。种子多数，黑褐色。花期7～9月，果期9～11月。二、组织培养脱毒1、材料处理(1)预处理与消毒于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm3左右，在无菌条件下置于70％左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1％升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；(2)茎尖剥取在解剖镜下将步骤(1)处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L；2、无性系建立外植体接种7d后，生长点开始膨大，30d后分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d形成丛生芽，待丛生芽苗高3～5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，20d为一个转接周期；增殖至适当的苗量后，选生长健壮，长势一致的试管苗，分批转入诱导生根培养基，诱导生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；3、炼苗移植苗生根后，将瓶塞打开，移至强光照下炼苗3d，炼苗后，取出试管苗，用自来水小心洗去根上的培养基残留物，然后将其移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1的基质中，成活后的试管苗生长稳定后移栽大田；所述的无性系建立的所有操作的培养条件均为：培养温度为24～26℃，光照强度1500～2000Lx/12h.d；所述的20d为一个转接周期指的是当增殖20d后，将茎段剪切后继续重复进行增殖培养；4、田间对比试验试验采用随机区组设计，每小区10m2，3次重复。将按照上述操作得到的CK与脱毒苗的子芽按照颜色、大小进行分级，在整好的畦面上按行株距50cm×25cm挖穴，穴深10cm，每穴栽芽头1个，芽头向上，覆土与畦面平。种植期统一控制肥水及田间管理。(1)不同品种生育期表现(2)不同品种性状表现(单位：厘米)(3)不同品种药材性状以及产量的比较三、良种繁育体系无性繁殖的药材品种由于长期种植，病毒大量积累，种性退化严重，因此多采用茎尖脱毒与组培快繁技术进行提纯复壮与种苗快速繁育。对中药材进行茎尖剥取，脱毒处理，在实验室创造的适宜的营养、激素、光、温、气、湿等条件下组织培养，使离体培养材料发育成完整植株。随后在设施大棚内进行脱毒种苗的工厂化繁育，由于繁殖系数大，因此具有很大的潜力。通过田间对比试验显示，脱毒种苗田间表现优异，植株健壮、长势一致，叶片浓绿、肥厚、宽大，产品品质极大提高。原原种田间无病虫害发生，原种和生产种田间生长旺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玄参繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：a、株系筛选于玄参收获期优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃；b、材料处理与茎尖剥取（1）预处理与消毒于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm3左右，在无菌条件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1%升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；（2）茎尖剥取在解剖镜下将步骤（1）处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5 mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6‑BA1.0~1.5 mg/L；c、无性系建立外植体接种7d左右后，生长点开始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d左右形成丛生芽，待丛生芽苗高3~5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，20d左右为一个转接周期；增殖至适当的苗量后，选生长健壮，长势一致的试管苗，分批转入诱导生根培养基，诱导生根培养基为1/2MS+IBA0.05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；d、炼苗移植苗生根后，将瓶塞打开，移至强光照下炼苗3 d左右，炼苗后，取出试管苗，用自来水小心洗去根上的培养基残留物，然后将其移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1左右的基质中，成活后的试管苗生长稳定后移栽大田。...

【技术特征摘要】
1.一种玄参繁育方法，其特征在于：包括以下步骤：a、株系筛选于玄参收获期优选田间长势旺盛，无病虫害，支根多，根系肥大的植株，定植于资源圃；b、材料处理与茎尖剥取（1）预处理与消毒于玄参收获期取根部顶端具白色鳞片包裹的芽，以自来水冲洗去除表面泥土灰尘，逐层剥去芽外部鳞片至1cm3左右，在无菌条件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡10s左右，再用0.1%升汞溶液浸泡10min左右，无菌水浸洗6～7次；（2）茎尖剥取在解剖镜下将步骤（1）处理后的顶芽的茎尖仔细剥离，并切取0.3～0.5mm的尖端外植体，接种于诱导分化培养基上，诱导分化培养基为MS+6-BA1.0~1.5mg/L；c、无性系建立外植体接种7d左右后，生长点开始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽诱导分化培养基中培养40d左右形成丛生芽，待丛生芽苗高3~5cm时剪成带有2片叶，长约1.5cm的小段接入增殖培养基，增殖培养为MS全量培养基，2...

【专利技术属性】
技术研发人员：董玲，李卫文，李贝蓓，廖华俊，宁志怨，江芹，王爱听，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院园艺研究所，安徽井泉集团中药饮片有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34