本发明专利技术公开了一种甲胎蛋白含量的检测方法，包括如下步骤：将待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液混合，加入缓冲液后在37℃下温育20min；温育完成后的反应体系用洗涤液洗涤除杂，接着加入所述缓冲液，并用300nm的激发波长和605nm的发射波长的荧光分光光度计测定荧光值；以及根据测得的荧光值得到待测样品的甲胎蛋白含量。通过半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体结合甲胎蛋白形成了通过荧光分光光度计检测而监控的夹心免疫反应，这种甲胎蛋白含量的检测方法具有较高的灵敏度和精确度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫荧光领域，特别是涉及一种。
技术介绍
1956年，Bergstrandh和Czar发现了甲胎蛋白（AFP)。AFP是一种单聚肽糖蛋白， 其平均分子量约为68000Da。作为在胎儿血清里的一种特殊蛋白，正常成人的肝细胞失去了 合成AFP的能力。在健康成人体内，AFP的浓度比低于3. 4ng/mL的平均值。 临床研究表明，血清AFP的敏感性为41-65%，特异性80-94% (临界值为ng/mL)。 AFP-般只可用于肝癌的监视，诊断和监测作为血清学标志物。如果甲胎蛋白水平在手术不 降低，复发的可能性较大。伴有高水平AFP的患者在治疗后比普通水平患者的存活率要低。 酶联免疫吸附测定（ELISA)和化学发光酶免疫测定（CLEIA)经常被用来检测血 清中AFP的水平。然而，酶联免疫吸附法具有如再现性差，低灵敏度和线性范围窄的限制。 CLEIA被认为是准确和可靠的，但其缺点是短暂的照明时间。 半导体量子点（QDs)拥有高亮度和荧光的持续时间长等独特的光学性质，所以它 的出现引起相当大的关注。目前，QDs已经被开发成为一类新的高灵敏度和高发光强度的 探针并且没有有机染料和荧光蛋白的固有局限性。与其他发光标记物相比，QDs具有独特 的光学和电子特性，例如高亮度和狭窄发射带以及其它优于传统的有机荧光团。QDs已在活 的动物和细胞成像中用于作为对肿瘤显像的荧光标记。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种基于半导体量子点的。 -种，其特征在于，包括如下步骤： 将待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的 抗甲胎蛋白抗体溶液混合，加入缓冲液后在37°c下温育20min，其中，半导体量子点标记的 抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液中各自的抗甲胎蛋白 抗体不同； 温育完成后的反应体系用洗涤液洗涤除杂，接着加入所述缓冲液，并用300nm的 激发波长和605nm的发射波长的荧光分光光度计测定荧光值；以及 根据测得的荧光值得到待测样品的甲胎蛋白含量。 在一个实施例中，进行温育的反应体系中，所述待测样品、所述半导体量子点 标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和所述羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液的加 入量的体积比为2 :3 :3,半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液的浓度为16. 5i!g/ mL?18. 3yg/mL，羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液的浓度为20. 4yg/mL? 23. 8ug/mL。 在一个实施例中，所述半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液通过如下步骤制 备： 将半导体量子点溶液与1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐溶液混 合，接着加入抗甲胎蛋白抗体和所述缓冲液，37°C摇动下温育3小时进行耦合反应，接着加 入pH为7. 4的TIRS-HCl使耦合反应停止，最后将反应体系以3000rpm/min的速度离心20 分钟，弃去上清并加入所述缓冲液，得到所述半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液。 在一个实施例中，所述半导体量子点溶液为CdSe半导体量子点溶液。 在一个实施例中，所述羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液通过如下操作 制备得到： 将羧基化标准磁珠用活化液洗涤至少三次，接着1-乙基-3 (3-二甲基氨基丙基） 碳二亚胺盐酸盐溶液混合，37°C摇动温育lOmin，接着加入抗甲胎蛋白抗体同时37°C摇动 下温育2h，最后加入所述缓冲液，得到所述羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液。 在一个实施例中，所述活化液为含有4mg/mL的1-乙基-3 (3-二甲基氨基丙基） 碳二亚胺盐酸盐的PBS缓冲液。 在一个实施例中，所述缓冲液为PBS缓冲液，所述洗涤液为含有质量百分数为 0? 05%的吐温20的浓度为0? 05mol/L的（羟甲基）氨基乙烷（Tris)溶液。 在一个实施例中，根据测得的荧光值得到待测样品中甲胎蛋白含量的操作为：对 若干组不同浓度的已知含量的甲胎蛋白溶液进行与所述待测样品相同的处理，根据测得的 甲胎蛋白溶液的荧光值，得到线性拟合曲线，将得到的所述待测样品的荧光值带入所述线 性拟合曲线，得到所述待测样品的甲胎蛋白含量。 在一个实施例中，所述若干组不同浓度的甲胎蛋白溶液中的甲胎蛋白的浓度分别 为：0ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、100ng/mL和 400ng/mL〇 在一个实施例中，反应体系温育完成后到完成荧光值测定的时间间隔不超过3h。 这种，通过半导体量子点和羧基化标准磁珠去标记两种 不同抗甲胎蛋白的单克隆抗体。半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体和羧基化标准磁珠标 记的抗甲胎蛋白抗体结合甲胎蛋白形成了通过荧光分光光度计检测而监控的夹心免疫反 应。这种用于甲胎蛋白含量具有较高的灵敏度和精确度，显示出 其在临床实验室中应用的巨大潜力。 【附图说明】 图1为一实施方式的有机聚合物基导热微球的制备方法的流程图； 图2为通过使用三个不同的激发波扫描的QDs抗体偶联物的光谱达到最佳信号得 到的光谱图； 图3为温育时间和免疫测定的灵敏度的曲线关系。 【具体实施方式】 为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术 的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发 明。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不 违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。 本专利技术中使用的部分药品和仪器如下：1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基）碳二 亚胺盐酸盐（EDC)购自Sigma-Aldrich公司（密苏里州，美国）。牛血清白蛋白（BSA) 从北京JingKeHongDa生物技术有限公司（北京，中国）购买。CdSeQDs605自Life Technologies(AB&Invitrogen公司）（卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国）购得。羧基化标 准磁珠（珠）从Ademtech有限公司（佩萨克，法国）购买。两种不同鼠抗人甲胎蛋白单克 隆抗体（AFP-3，AFP-28)从Fapon生物科技股份有限公司公司（深圳，中国）获得。繁殖和 摇晃的程序在恒温容器（FYL-YS，中国）和振动筛（ZXWL-100,中国）中进行。使用Hitachi F-4600荧光分光光度计（日本东京）进行免疫程序。 结合图1，一实施方式的，包括如下步骤： S10、将待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标 记的抗甲胎蛋白抗体溶液混合，加入缓冲液后在37°C下温育20min。 待测样品可以为血清。 半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白 抗体溶液中，被半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体与被羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋 白抗体不同。本实施例中，两种抗甲胎蛋白抗体分别为AFP-3,AFP-28(从Fapon生物科技 股份有限公司公司获得，深圳）。 进行温育的反应体系中，待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和 羧基化标准磁珠标记本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甲胎蛋白含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液混合，加入缓冲液后在37℃下温育20min，其中，半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和羧基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液中各自的抗甲胎蛋白抗体不同；温育完成后的反应体系用洗涤液洗涤除杂，接着加入所述缓冲液，并用300nm的激发波长和605nm的发射波长的荧光分光光度计测定荧光值；以及根据测得的荧光值得到待测样品的甲胎蛋白含量。
【技术特征摘要】
1. 一种甲胎蛋白含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 将待测样品、半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和駿基化标准磁珠标记的抗甲 胎蛋白抗体溶液混合，加入缓冲液后在37C下温育20min，其中，半导体量子点标记的抗甲 胎蛋白抗体溶液和駿基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液中各自的抗甲胎蛋白抗体 不同； 温育完成后的反应体系用洗涂液洗涂除杂，接着加入所述缓冲液，并用300nm的激发 波长和605nm的发射波长的英光分光光度计测定英光值；W及 根据测得的英光值得到待测样品的甲胎蛋白含量。2. 根据权利要求1所述的甲胎蛋白含量的检测方法，其特征在于，进行温育的反应体 系中，所述待测样品、所述半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液和所述駿基化标准磁 珠标记的抗甲胎蛋白抗体溶液的加入量的体积比为2 ;3 ;3,半导体量子点标记的抗甲胎蛋 白抗体溶液的浓度为16. 5 y g/mL?18. 3 y g/mU駿基化标准磁珠标记的抗甲胎蛋白抗体 溶液的浓度为20. 4 y g/mL?23. 8 y g/mL。3. 根据权利要求1所述的甲胎蛋白含量的检测方法，其特征在于，所述半导体量子点 标记的抗甲胎蛋白抗体溶液通过如下步骤制备： 将半导体量子点溶液与1-己基-3 (3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐溶液混合，接 着加入抗甲胎蛋白抗体和所述缓冲液，37巧惡动下温育3小时进行禪合反应，接着加入抑 为7. 4的TIRS-HC1使禪合反应停止，最后将反应体系W 3000rpm/min的速度离也20分钟， 弃去上清并加入所述缓冲液，得到所述半导体量子点标记的抗甲胎蛋白抗体溶液。4. 根据权利要求3所述的甲胎蛋白含量的检测方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢妮，李仲航，齐素文，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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