卡特兰初代诱导培养基及外植体预处理方法技术

本发明专利技术公开了一种卡特兰初代诱导培养基及外植体预处理方法。本发明专利技术所述的卡特兰初代诱导培养基，其以改良MS培养基为基础培养基，并添加有柠檬酸、水杨酸、硝酸镧、6-BA、NAA、琼脂粉、蔗糖和硅胶，能够有效减少卡特兰外植体褐化。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种。本专利技术所述的卡特兰初代诱导培养基，其以改良MS培养基为基础培养基，并添加有柠檬酸、水杨酸、硝酸镧、6-BA、NAA、琼脂粉、蔗糖和硅胶，能够有效减少卡特兰外植体褐化。【专利说明】
本专利技术涉及兰花组织培养
，特别是涉及一种卡特兰初代诱导培养基及外 植体预处理方法。
技术介绍
卡特兰，又名嘉德丽亚兰（Cattleya Hybrida)，因其花朵硕大，色泽艳丽，富有美 感，品种众多，有的品种还具有芳香气味，而被誉为"洋兰之王"，具有极高的欣赏价值和经 济价值。 卡特兰的繁殖可以通过种子繁殖、分株繁殖和组织培养。由于卡特兰种子在自然 条件下极难萌发，分株法繁殖率低，难以达到大规模生产的目的，而组织培养法是目前卡特 兰大规模生产的主要方法。然而，卡特兰的外植体在组织培养过程中极易褐化坏死，是原球 茎诱导成功的一大障碍，也是制约卡特兰组培快速繁殖的关键。 针对卡特兰外植体褐化问题，现有的卡特兰初代诱导培养基通常在1/4MS培养基 的基础上，添加2. 5?3mg/L的6-BA、0. 15?0. 2mg/L的NAA、6?7g/L的琼脂粉、25? 30g/L的蔗糖，以及0. 1 %?0. 2 %的活性炭。活性炭对酚类物质有吸附作用，能减少酚类物 质被氧化为醌类物质，减少褐化现象，然而，活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附酚 类物质的同时，亦会吸附培养基中的其它营养成分，对外植体的诱导分化产生负面影响。
技术实现思路
基于此，有必要针对卡特兰组织培养过程中外植体褐化的问题，提供一种能有效 减少卡特兰外植体褐化的卡特兰初代诱导培养基。 此外，有必要针对卡特兰组织培养过程中外植体褐化的问题，提供一种能有效减 少卡特兰外植体褐化的卡特兰外植体预处理方法。 -种卡特兰初代诱导培养基，其以改良MS培养基为基础培养基，并添加有柠檬 酸、水杨酸、硝酸镧、6-苄氨基腺嘌呤出-BA)、萘乙酸（NAA)、琼脂粉、蔗糖和硅胶。 在其中一个实施例中，所述改良MS培养基中，二水氯化钙（CaCl2 ·2Η20)的浓度为 230mg/L，维生素 Bl的浓度为lmg/L，其余成分及其浓度与标准MS培养基相同。 在其中一个实施例中，柠檬酸的浓度为30?80mg/L，水杨酸的浓度为50? 150mg/L，硝酸镧的浓度为3?7mg/L，6_BA的浓度为2. 5?3mg/L，NAA的浓度为0· 15? 0. 2mg/L，琼脂粉的浓度为6?7g/L，蔗糖浓度为25?30g/L，硅胶的浓度为1?5g/L。 在其中一个实施例中，柠檬酸的浓度为50mg/L，水杨酸的浓度为100mg/L，硝酸镧 的浓度为5mg/L，6-BA的浓度为3mg/L，NAA的浓度为0. 2mg/L，琼脂粉的浓度为6g/L，蔗糖 浓度为30g/L，硅胶的浓度为3g/L。 在其中一个实施例中，所述的硅胶为固体，呈颗粒状、管状或棒状，其均匀镶嵌于 经凝固后的卡特兰初代诱导培养基中。 在其中一个实施例中，所述卡特兰初代诱导培养基的pH值为5. 5。 一种卡特兰外植体预处理方法，包括以下步骤：取健康、生长良好的卡特兰侧芽作 为外植体，于2?5°C低温处理12?24小时，经灭菌处理后将侧芽接种于本专利技术所述的卡 特兰初代诱导培养基中，然后置于人工气候箱中，在温度为15?20°C、湿度为80?90%、 光照强度为1800?20001u X、光暗周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，诱导出原 球茎。 在其中一个实施例中，所述的灭菌处理包括以下步骤：在超净工作台中，取出低温 处理后的侧芽，除去侧芽外的苞片，侧芽留一片叶子，用70%的酒精擦洗几秒，用无菌水冲 洗干净后，置于质量浓度为〇. 1 %的氯化汞溶液中灭菌5?10分钟，再用无菌水冲洗干净。 本专利技术的卡特兰初代诱导培养基中，采用改良的MS培养基，通过降低钙离子的浓 度，能够减轻外植体褐化，并通过提高维生素 Bl的含量，竞争性抑制外植体内单酚酶和二 酚酶的活性，减少酚类物质氧化成醌类物质，从而减缓褐化现象的出现；此外，培养基中添 加的柠檬酸具有抗氧化作用，能有效减缓外植体的氧化酶促反应，水杨酸则能够提高植物 组织自身的抗氧化能力，增加叶绿素含量，两者同时作用，能显著降低外植体褐化程度，使 褐化率从17. 03%下降到3. 88% ;硝酸镧中的稀土元素"镧"，能够加快外植体诱导出原球 茎，促使萌动时间从42天缩短为28天，同时亦能有效抑制褐化现象，提高外植体的成活率， 提高卡特兰组织培养的生产效率；6-BA和NAA为广谱性植物生长调节剂，能够促进卡特兰 外植体的萌发；硅胶具有特异性吸附作用，能够吸附植物组织的酚类、醌类物质，减少酶促 反应的底物，抑制褐化现象的发生，但对培养基中的营养成分没有吸收作用，不会影响组织 生长；以琼脂作为固体培养平台，为植材提供养分、水分与透气的效用，并以蔗糖作为碳源， 在成活率以及萌发率不受影响的前提下，降低了培养基的制备成本。 本专利技术的卡特兰初代诱导培养基中，柠檬酸的浓度优选为30?80mg/L，水杨酸的 浓度优选为50?150mg/L，若朽 1檬酸、水杨酸的用量过低，抗氧化作用差，若朽1檬酸、水杨酸 的用量过高，则会抑制植株生长，降低萌发率；硝酸镧的浓度优选为3?7mg/L，若其用量过 低，促进萌发的效果不理想，若其用量过高，则会抑制植株生长，增加萌发所需时间。 本专利技术的卡特兰初代诱导培养基中，采用固体硅胶，均匀镶嵌于经固化后的培养 基中，使之与培养基充分接触；培养结束后，固体硅胶可从培养基中分离回收，通过乙醇洗 涤所吸附的物质后，可以循环使用，能够降低培养基的成本，提高产品的市场竞争力。 本专利技术的卡特兰初代诱导培养基，将pH值控制在5. 5,呈弱酸性环境，能够抑制褐 变过程的发生，从而降低褐变率。 本专利技术的卡特兰初代诱导培养基，通过生化（柠檬酸、水杨酸、硝酸镧等）和物理 (硅胶、低温处理、暗培养等）的双重作用，能有效抑制卡特兰外植体褐化现象的发生，提高 外植体的成活率，以及缩短外植体的萌发时间。 本专利技术的卡特兰外植体预处理方法，通过对外植体在2?5°C下进行低温处理 12?24小时，能够有效减少外植体分泌酚类、醌类物质，从而减少酶促反应底物，抑制褐化 现象的发生；接种于培养基后置于人工气候箱中，在温度为15?20°C、湿度为80?90%、 光照强度为1800?20001u X、光暗周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，若温度过 高、光照过强或光照时间过长，会提高多酚氧化酶（PPO)的活性，促进多酚类物质的氧化， 而加速外植体褐变，同时，亦会使植物生陈代谢加快，使CO 2浓度提高，环境中的CO2向细胞 内扩散，细胞内CO广增多，与细胞膜上的CO广结合，使有效CO广减少，导致细胞内膜系统瓦 解，酚类物质与PPO相互接触，加剧褐变。 【具体实施方式】 实施例一：本专利技术所述的卡特兰初代诱导培养基的制备 按照表1所示的配方，分别称取改良MS培养基中的各成分，置于三角瓶中，加入适 量纯化水，搅拌溶解，定容至1L，制得改良MS培养基，备用。 表1改良MS培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卡特兰初代诱导培养基，其特征在于：以改良MS培养基为基础培养基，并添加有柠檬酸、水杨酸、硝酸镧、6‑苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、琼脂粉、蔗糖和硅胶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永得，
申请(专利权)人：遵义县宇宙星空观光旅游休闲农业有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52