本发明专利技术公开了一种食用香精香料中七种成分同时测定的方法，包括以下步骤：萃取溶液的配制、标准溶液的配制、样品溶液的制备、超高效液相色谱-串联质谱分析以及含量的计算。本发明专利技术通过对食用香精香料中七种成分测定方法的前处理条件、液相色谱条件和质谱条件的优化，建立了一种简便、快速、高通量的测定方法，本发明专利技术具有操作简单、灵敏度高、回收率好、重现性好且检测时间短、溶剂消耗小、检测通量高、检测效率高的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于理化检验
，具体涉及一种食用香精香料中七种成分水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯同时测定的方法。
技术介绍
水杨酸又名邻羟基苯甲酸，是重要的精细化工原料，在医药工业中，水杨酸是一种用途极广泛的消毒、防腐剂，许多国家都将水杨酸列为限用添加剂，在我国水杨酸禁止用于食品加工生产，我国国标GB 7916-1987规定其最高允许用量质量分数为0.15%。水杨酸为有机酸类防腐剂，在酸性条件下具有较强的抗真菌性质，毒理学试验研究表明，防腐剂成分用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至致癌。美国食品药品管理局、美国皮肤病学会认为水杨酸的安全限量为0.5%-2.0%。目前已报道测定水杨酸的检测方法有光度法、气相色谱法、液相色谱法等。 苯甲酸是食品工业中常用的防腐剂，能有效防止酵母、霉菌、细菌的生长，但过量、长期食用会危害人体肝脏、肾脏功能。国家标准GB2760－2007中明确规定了苯甲酸的最大使用限量。在进出口贸易中，日本等国要求这种物质的检出量小于1mg/kg，而我国标准GB/T 23495-2009中苯甲酸为1.8mg/kg，GB/T 5009.29-2003中苯甲酸的检出限均为1mg/kg。目前已报道测定苯甲酸的检测方法有气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等。 对羟基苯甲酸酯（又称尼泊金酯），因其良好的杀菌能力和稳定性，被广泛应用于食品、饮料、化妆品等诸多领域，主要作为防腐剂。尼泊金酯包括甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等，其抑菌作用随着醇烃基碳原子数的增加而增加，且碳链愈长，毒性愈小，用量愈少。生产过程中，通常是将几种酯混合使用，在提高溶解度的同时具有更好的防腐性能。国内外大量的实际应用也证实了混用的尼泊金酯比单一的抑菌效果强。尼泊金酯虽有良好的防腐作用，但也有一定的毒性。中国、加拿大、日本和欧盟等许多国家和国际组织对食品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的使用制定了添加限量。Routledge等首次发现对羟基苯甲酸酯具有雌激素活性，且其过量使用会危害人体健康。中国食品添加剂的使用标准GB 2760-2011规定了单一品种和混合使用的最大使用量，其中对羟基苯甲酸丙酯被明确禁止使用，对羟基苯甲酸丁酯也未被列入允许使用名单。尼泊金酯的测定方法主要有高效液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法等。 甜蜜素，化学名为环己基氨基磺酸钠，是一种低热量人工合成甜味剂，是食品生产中常用的人工合成非营养型甜味剂，其甜度是蔗糖30-40倍，使用成本低，因此在饮料、糕点、蜜饯等食品中广泛添加。近年来，食品中甜蜜素含量超标及在禁止添加甜蜜素的食品中添加甜蜜素的报道日渐增多，因此，甜蜜素过量食用，就会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害，特别是对代谢排毒的能力较弱的老人、孕妇、小孩危害更明显。甜蜜素的测定方法主要有气相色谱/质谱法、离子色谱法、液相色谱-串联质谱法等。 目前，国内外公开文献无关于这七种成分同时检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种食用香精香料中七种成分水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯同时测定的方法。 本专利技术针对现有技术的不足，通过长期的研究和探索，在方法对比、优化的基础上提出了一种食用香精香料中七种成分（水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯）同时测定的方法，用于检测食用香精香料中的水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯。本专利技术考察研究了食用香精香料中水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的前处理条件、液相色谱条件和质谱条件，为简便、快速、高通量的测定食用香精香料中的七种成分提供了技术支持。 本专利技术的技术方案为：所述的测定方法包括以下步骤： A、萃取溶液的配制：取甲醇制备成体积比7:3的甲醇-水溶液即为萃取溶液；B、标准溶液的配制：用含内标的萃取溶液分别配制水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的标准溶液；C、样品溶液的制备：使用含内标的萃取溶液萃取食用香精香料样品，过有机相滤膜后得到样品溶液；D、超高效液相色谱-串联质谱仪分析：利用超高效液相色谱-串联质谱仪分别对标准溶液和样品溶液进行检测分析；E、食用香精香料中七种成分水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯含量的计算。B步骤中所述标准溶液的配制是：分别称取水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯各20mg，用甲醇溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，定容至刻度，分别得到单一标准储备液；称取水杨酸-d4 10mg，用甲醇溶解后转移至50mL棕色容量瓶中，甲醇定容至刻度，得到内标储备液；分别取单一标准储备液0.5~2mL至50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到一级混合标准溶液；取内标储备液1mL至50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到一级内标标准溶液；分别准确移取0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL的一级混合标准溶液至50mL棕色容量瓶中，每个棕色容量瓶均加入1mL一级内标标准溶液，用萃取溶液定容至刻度，得到系列标准溶液。 取0.4mL内标储备液至1L棕色容量瓶中，用萃取溶液定容至刻度，得到含内标的萃取溶液。所述含内标的萃取溶液中的内标物为水杨酸-d4。 C步骤中所述样品溶液的制备方法是：称取0.5g试样于50mL具塞锥形瓶中，准确加入25mL含内标的萃取溶液，用150r/min振荡萃取20min，取上清液过有机相滤膜，滤液为样品溶液。所述的有机相滤膜为0.22μm聚醚砜滤膜。所述振荡萃取的振荡频率为120-180r/min，萃取时间为10-30min。 D步骤中所述的色谱分析条件为：色谱柱：C18，1.7μm，2.1×100mm柱；流动相为甲醇A和0.05%甲酸水溶液B；流速：0.4mL/min；进样量：5μL；柱温：40℃；样品温度：10℃；采用梯度洗脱程序，即初始A是10%，B是90%，1min时A是35%，B是65%，4min时A是65%，B是35%，6min时初始A是90%，B是10%，7min时A是90%，B是10%，8min时A是10%，B是90%，10min时A是10%，B是90%。所述的质谱条件为：电喷雾离子源（ESI）负离子模式，扫描方式为多反应监测模式，电喷雾电压为-4500V，离子源温度600℃，气帘气：25Psi；雾化气：55Psi；辅助加热气：50Psi；水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯和水杨酸-d4的定量离子对分别为：m/z 92.9、79.9、77.0、92.0、91.9、92.0、92.1、96.9。其它质谱参数见表1。 E步骤中所述含量的计算是：首先以标准溶液所检测出的目标物和内标物的色谱峰面积比对应其相应浓度比进行回归分析得到标准曲线线性方程，然后将样品溶液检出的目标物的色谱峰面积，代入标准曲线线性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食用香精香料中七种成分同时测定的方法，其特征在于包括以下步骤：A、萃取溶液的配制：取甲醇制备成体积比7:3的甲醇‑水溶液即为萃取溶液；B、标准溶液的配制：用含内标的萃取溶液分别配制水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的标准溶液；C、样品溶液的制备：使用含内标的萃取溶液萃取食用香精香料样品，过有机相滤膜后得到样品溶液；D、超高效液相色谱‑串联质谱仪分析：利用超高效液相色谱‑串联质谱仪分别对标准溶液和样品溶液进行检测分析；E、食用香精香料中七种成分水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯含量的计算。
【技术特征摘要】
1.一种食用香精香料中七种成分同时测定的方法，其特征在于包括以下步骤：
A、萃取溶液的配制：取甲醇制备成体积比7:3的甲醇-水溶液即为萃取溶液；
B、标准溶液的配制：用含内标的萃取溶液分别配制水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的标准溶液；
C、样品溶液的制备：使用含内标的萃取溶液萃取食用香精香料样品，过有机相滤膜后得到样品溶液；
D、超高效液相色谱-串联质谱仪分析：利用超高效液相色谱-串联质谱仪分别对标准溶液和样品溶液进行检测分析；
E、食用香精香料中七种成分水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯含量的计算。
2.根据权利要求1所述食用香精香料中七种成分同时测定的方法，其特征在于B步骤中所述标准溶液的配制是：分别称取水杨酸、环己基氨基磺酸钠、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯各20mg，用甲醇溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，定容至刻度，分别得到单一标准储备液；称取水杨酸-d4 10mg，用甲醇溶解后转移至50mL棕色容量瓶中，甲醇定容至刻度，得到内标储备液；分别取单一标准储备液0.5~2mL至50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到一级混合标准溶液；取内标储备液1mL至50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到一级内标标准溶液；分别准确移取0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL的一级混合标准溶液至50mL棕色容量瓶中，每个棕色容量瓶均加入1mL一级内标标准溶液，用萃取溶液定容至刻度，得到系列标准溶液。
3.根据权利要求1所述食用香精香料中七种成分同时测定的方法，其特征在于取0.4mL内标储备液至1L棕色容量瓶中，用萃取溶液定容至刻度，得到含内标的萃取溶液。
4.根据权利要求1或3所述食用香精香料中七种成分同时测定的方法，其特征在于所述含内标的萃取溶液中的内标物为水杨酸-d4。
5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：王素娟，缪明明，秦云华，张承明，夏建军，王岚，蒋次清，陈进雄，罗林，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南;53
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