一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法技术

本发明专利技术研究了一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，包括种子的消毒、种子的诱变、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明专利技术方法通过离子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保护酶系统活性，提高种子抗逆性，且遗传稳定，种苗再生率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及马鞭草组织培养的快繁方法，属于植物栽培
。
技术介绍
马鞭草，/ferAa Verbenae马鞭草科,又名紫顶龙芽草、野荆芥、龙芽草，多年生直立草本植物，高30-120厘米，茎四方形，上部方形，老后下部近圆形，棱和节上被短硬毛。单叶对生，卵形至长卵形，长2-8厘米，宽1.5-5厘米，3-5深裂，裂片不规则的羽状分裂或不分裂而具粗齿，两面被硬毛，下面脉上的毛尤密。喜干燥、阳光充足的环境，对土壤要求不严，喜肥，喜湿润，怕涝，不耐干旱，一般的土壤均可生长，但以土层深厚、肥沃的壤土及沙壤土长势健壮，低洼易涝地不宜种植。多数生长于原野，原产于欧洲，中国华东、华南和西南大部地区都有分布。选择土层较厚的壤土或沙壤土为种植地，4月下旬-5月上旬播种，防止草荒，做到田间无杂草。田间长时间的大量积水有根腐病发生只要及时排水、松土就可以避免。全草含马鞭草甙，5-羟基马鞭草甙，另含苦杏仁酶、鞣质，戟叶马鞭草甙，羽扇豆醇，β_谷甾醇，熊果酸，桃叶珊瑚甙，蒿黄素。叶中含马鞭草新甙，腺甙，β_胡萝卜素。根和茎中含水苏糖，马鞭草甙对交感神经末梢小量兴奋，大量抑制；对哺乳动物可促进乳汁分泌。主要功效为清热解毒药；活血通经药；利水消肿药；截疟药；活血散瘀，截疟，解毒，利水消肿。目前主要采取野外采集，人工繁殖尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种马鞭草组织培养的快繁方法，本专利技术方法通过离子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保护酶系统活性，提高种子抗逆性,且遗传稳定,种苗再生率高。 本专利技术所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基 DPD+6-BA1.5-2.0mg/L+IAA0.03-0.05mg/L+ABA0.5-0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基l/3Dro+IBA0.5mg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度50001x,光照时间16h/d。 采用本专利技术制备的马鞭草再生率高，周期短，遗传性状稳定，产量大，污染小。 下面将结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。 【具体实施方式】 实施例1挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA1.5mg/L+IAA0.03mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率90%。 实施例2挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率91%。 实施例3挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率93%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，包括种子的消毒、种子的诱变、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下：（1）取马鞭草饱满的种子，进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0×1017ions/cm2；（3）取步骤（2）长出的无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6‑BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2,4‑D1mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，光照强度300lx，光照时间12h/d；（4）取步骤（3）诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6‑BA1.5‑2.0mg/L+IAA0.03‑0.05mg/L+ABA0.5‑0.8mg/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25℃，光照强度2100lx，光照时间12h/d；（5）取步骤（4）分化出来的芽苗接入生根培养基1/3DPD+IBA0.5mg/L，附加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，pH5.8，温度25℃，光照强度5000lx，光照时间16h/d。...

【技术特征摘要】
1.一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，包括种子的消毒、种子的诱变、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下: (1)取马鞭草饱满的种子，进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0X 10171ns/cm2 ； (3)取步骤(2)长出的无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基 DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d ； (4)取步骤(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，杨成东，
申请(专利权)人：南京帝道农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32