一种对照提取物的标定方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种对照提取物的标定方法，对照提取物共有n批，每批均含有m个成分，将它们配成溶液，分别利用色谱法将其分离检测，以不同的进样体积进样并对各个成分进行线性回归，得出回归方程，利用此方程计算出同一成分在不同批次对照提取物中的信号质量比，列出一个n行的m元一次方程组，这个方程组的根共有Cnm种解，统计每种根，在相对标准偏差低于可接受的判别误差R时，标定成功。此标定方法可成功的解决对照品来源困难的问题，为中药、天然药物提供更科学合理的标准制定思路，为化药品种中有关物质的准确定量提供混合对照品，还为归一法定对照品纯度的缺限提供了一个更好的补充。

【技术实现步骤摘要】
-种对照提取物的标定方法及应用
本专利技术涉及分析领域，具体的涉及一种对照提取物的标定方法及应用。
技术介绍
在进行药品的研发和检验过程中，对照品起着一个非常重要的角色，然而对照品 的分离和精制是一项繁琐而又困难的工作。现行新药注册法规上对于含量测定用对照品的 技术要求是；一般化药对照品的纯度要求为99. 5%，有关物质对照品纯度要求为95%，中药 对照品的纯度要求为98%，所述的纯度检测方法大都采用归一法，为了达到该个纯度，研究 者用尽各种分离方法如萃取、柱色谱、高速逆流色谱、制备液相色谱、反复重结晶等手段，即 便该样，还不能达到含量测定所需的纯度，期间所用到的大量有机溶剂，试验过程中试剂的 消耗带来的环境污染和人体的健康是巨大的。 在进行中药、天然药物等含多种成分药物的质量研究时，由于成分复杂，测量某一 两个成分并不能代表该产品的质量，欲分离出其中的纯大多数成分并作为对照品进行含量 测定时，就目前的技术来说是不现实的，纵然投入大量的物力、人力，浪费大量的有机溶剂， 甚至动用制备色谱等，从经济上和W后的推广上也是不合算的。 对于有关物质用对照品，分离则更困难。 可喜的是针对中药成分复杂该一现状，人们提出了使用对照提取物作为对照，制 定质量标准，简化了应用，降低了成本。文献马玲云，马双成中药标准物质的发展现状与展 望[J].中国药事，2010,24 (12):1232-1235.上提到了对照提取物的标定要求；1)原料 的来源、提取部位及制备工艺应明确；2)主成分及含量相对固定（TLC、HPLC、GC);3)理化特 征换批间应一致(溶解度、相对密度、折光率、旋光度等)。从上述要求可知，对照提取物中的 主成分只是含量相对固定，并不能标定出其具体的含量比例，如若确定其具体的主成分含 量，还得使用对照品进行测定。 就目前的行业现状，对照品的纯度检测方法通常是用归一法进行检测，W主成分 峰面积占所有成分的峰面积的百分比，此种检测方法有一个缺限，不同成分的峰面积与质 量比通常是不同的，因此归一法测定对照品的纯度实际上是有一定的方法误差，如同一对 照品，采用HPLC-UV法检测纯度，当检测波长不同时，检测结果是不一样的。 如上，在新药研发和药品的质量控制中，对照品的来源是相当的困难，归一法测定 对照品纯度有一定的缺限，如何突破技术难关，弄清中药中的大部分成分的质量，还能解决 化药中有关物质对照品来源困难，完善对照品的纯度标定方法，对多成分对照提取物中各 成分的含量进行标定，并将对照提取物作为对照进行新药研发和药品的质量控制是本专利技术 所要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术针对上述问题，提出了一种对照提取物的各组分的标定方法，在标定过程 中不需要使用高纯度的对照品，而只需多批对照提取物。 本专利技术是该样实现的： 一种对照提取物的标定方法，对照提取物共有n个批次，分别为第1、2、3…… i……n化每个批次均含有m个成分，它们分别为V A2、As……k;……A。，其中n > m， Ki《n，Kj《m，每批对照提取物通过色谱法W在仪器中进行检测，各种成分均能达到分 离的效果，成分Aj.的信号质量Nj.与一定范围巧j,，Dj,]内的信号值Sj.存在如下的一一对应 函数关系式： Sj 二 fj(Nj)，式中，j=l、2、3......m。 步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式 每批对照提取物如第i批对照提取物，均配制成一定的浓度W-定的进样体积Vi 进样，进样质量为Mi=。* Vi，第i批对照提取物中的成分Ai、A2、As......Aj......Am的进样浓 度分别为C。、、C。......Cy...... Cim，在仪器中的信号质量分别为N。、Nc、Ni3 ...... N。……Nim ，它们在仪器中的信号值分别为S。、Si2、Si3……S。……Sim,各批对照提取 物中的各组分存在如下的关系式：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对照提取物的标定方法，其特征在于：对照提取物共有n个批次，分别为第1、2、3……i……n批，每个批次均含有m个成分，它们分别为A1、A2、A3……Aj……Am，其中n≥m, 1<i≤n， 1<j≤m，每批对照提取物通过色谱法W在仪器中进行检测，各种成分均能达到分离的效果，成分Aj的信号质量Nj与一定范围[Dj1，Dj2]内的信号值Sj存在如下的一一对应函数关系式：Sj = fj(Nj) ，式中，j=1、2、3……m步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式每批对照提取物如第i批对照提取物，均配制成一定的浓度Ci，以一定的进样体积Vi进样，进样质量为Mi=Ci* Vi  ，第i 批对照提取物中的成分A1、A2、A3……Aj……Am的进样浓度分别为Ci1 、Ci2 、Ci3 ……Cij…… Cim ，在仪器中的信号质量分别为Ni1 、Ni2 、Ni3 ……Nij…… Nim  ，它们在仪器中的信号值分别为Si1 、Si2 、Si3 ……Sij…… Sim，各批对照提取物中的各组分存在如下的关系式：M1＝N11+ N12 + N13……N1j……+ N1m                                       M2＝N21+ N22 +N23……N2j……+ N2m……Mi＝Ni1+ Ni2 + Ni3……Nij……+ Nim……Mn＝Nn1+ Nn2 + Nn3……Nnj……+ NnmSij = fj(Nij)Nij=Cij* Vi  其中，i=1、2、……n     j=1、2、……m步骤二、方程组的建立由于成分Aj的信号质量Nij与信号值Sij存在一一对应的关系，将任一批对照提取物溶液如第1批，以不同的进样体积（V）通过色谱法W分离并进行检测，根据函数Sj = fj(Nj) = fj(C1j*V)可知：由于C1j是一个固定的未知值，因此对于第1批对照提取物所配制的溶液，存在函数关系式：Sj = gj(V) 及它的反函数V= gj‑1(Sj) ，即第1批对照提取物的溶液的不同进样体积（V），有一个固定的信号值与之相对应，同样，一个固定的信号值，存在第1批对照提取物溶液的某个进样体积与之相对应，且这两个函数的相关系数是通过线性回归可确定出具体数值，令Nij =λij * N1j =λij * C1j* V1 ，式中，λij是信号质量比，则存在下列等式：　S ij = fj(N i j)= fj(N1j*λij)= fj(C1j*V1*λij)= gj(V1*λij )S 1j = fj(N 1j) =gj(V1) λij = gj‑1(S ij )/ V1，其中i=2、3……n ，j=1、2、……m在上式中， S ij、S 1j 、V1是具体的固定值，函数gj（V）的相关系数是固定的，因此λij是可以计算出的一个具体值，这样，根据步骤一中的关系式，可得到如下的方程组： 1） M1＝N11+ N12 + N13……N1j……+ N1m                                                    2） M2＝N21+ N22 +N23……N2j……+ N2m   ＝λ21*N11+λ22* N12 +λ23* N13……λ2j*N1j……+λ2m*N1m             …… i） Mi＝Ni1+ Ni2 + Ni3……Nij……+ Nim＝λi1*N11+ λi2* N12 + λi3* N13……λij*N1j……+λim*N1m             ……n） Mn＝Nn1+ Nn2 + Nn3……Nnj……+ Nnm ＝λn1*N11+ λn2* N12 +λn3* N13……λnj*N1j……+λnm*N1m             步骤三、方程组的求解选择其中的m行，共有u=Cnm种m行组成的方程组，解第1种m行的方程组，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（N111、N121……N1j1……N1m1），各成分的信号质量和为：N101= N111+ N121 + N131……N1j1……+ N1m1，记Q11=（N111，N121……N1j1……N1m1，N101）；解第2种m行的方程组，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（N112、N122……N1j2……N1m2），各成分的信号质量和为：N102= N112+ N122 + N132……N1j2……+ N1m2，记Q12=（N112，N122……N1j2……N1m2，N102）；……解第k种m行的方程组，其中1≤k≤u，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为：（N11k、N12k……N1jk……N1mk），各成分的信号质量和为：N10k=N11k...

【技术特征摘要】
2013.06.13 CN 201310231882.81. 一种对照提取物的标定方法，其特征在于： 对照提取物共有η个批次，分别为第1、2、3……i……η批，每个批次均含有m个成分， 它们分别为Αρ A2、A3……Α』……Am，其中η彡m，l〈i彡n，l〈j彡m，每批对照提取物通过 色谱法W在仪器中进行检测，各种成分均能达到分离的效果，成分?的信号质量％与一定 范围[Df D]内的信号值&存在如下的一一对应函数关系式： Sj =心叫），式中，j=l、2、3……m 步骤一、各批对照提取物中的各成分关系式 每批对照提取物如第i批对照提取物，均配制成一定的浓度Q，以一定的进样体积\ 进样，进样质量为吣=(；* \，第i批对照提取物中的成*ApA2、A3……A」……进样浓 度分别为C n、Ci2、Ci3……Cu……Cim，在仪器中的信号质量分别为N n、Ni2、Ni3…… Njj……Nim ，它们在仪器中的信号值分别为Sn、Si2、Si3……Si」……S im，各批对照提取 物中的各组分存在如下的关系式： Ml = Nn+ N12 + N13 ……&……+ Nlm - N21+ N22 +N23......N2j......+ N2m Mi = Nn+ Ni2 + Ni3 ……心……+ Nim Mn = Nnl+ Nn2 + Nn3......NnJ......+ N· S。· = f爲） NfC# ν, 其中，i=l、2、......n j=l、2、......m 步骤二、方程组的建立 由于成分?的信号质量与信号值存在一一对应的关系，将任一批对照提取物溶 液如第1批，以不同的进样体积（V)通过色谱法W分离并进行检测，根据函数& = &(%)= f^CjV)可知： 由于是一个固定的未知值，因此对于第1批对照提取物所配制的溶液，存在函数关 系式4 = g^v)及它的反函数v= g^(sp，即第1批对照提取物的溶液的不同进样体积 (V)，有一个固定的信号值与之相对应，同样，一个固定的信号值，存在第1批对照提取物溶 液的某个进样体积与之相对应，且这两个函数的相关系数是通过线性回归可确定出具体数 值，令队』=λ υ = λ u ，式中，λ υ是信号质量比，则存在下列等式： s ij = f j (N i j) = f j (Νυ* λ ij) = f j (cu*vi* λ ij) = gj (νι* λ ij ) s u = fj(N ij) =gj(vi) λ u = gj-1(S u )/ V!，其中 i=2、3......n，j=l、2、......m 在上式中，SpSn、％是具体的固定值，函数& (V)的相关系数是固定的，因此入^ 是可以计算出的一个具体值，这样，根据步骤一中的关系式，可得到如下的方程组： 1. Ml = Nn+ N12 + N13……&……+ Nlm 2. M2 = N21+ N22 +N23......N2j......+ N2ni =λ 21*Nn+ λ 22* N12 + λ 23* N13......入 2产心......+ 入 2ηι*Ν1ηι i) Mi = Nn+ Ni2 + Ni3……心……+ Nim =λ n*Nn+ λ i2* N12 + λ i3* N13...... λ ......+ λ ini*Nlni n) Mn = Nnl+ Nn2 + Nn3......Nnj......+ N· =λ nl*Nn+ λ n2* N12 + λ n3* N13...... λ jNu.......+、*?> 步骤三、方程组的求解 选择其中的m行，共有u=Cn°'种m行组成的方程组， 解第1种m行的方程组，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为： (Nm、N121......Njjj......Nlml )， 各成分的信号质量和为： Ni〇i= Nm+ N121 + N131......Nij!......+ Nlml, 记 Qn- (Nm，Nm......Ν。、......Nlml，N101); 解第2种m行的方程组，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为： (N112、N122......N1J2......Nlm2), 各成分的信号质量和为： Ni〇2_ N112+ N122 + Ν132......N1J2......+ Nlm2， 记 Q12_ (Ν112, Ν122......Nlj2......Nlm2, Ν1(ι2); 解第k种m行的方程组，其中1 < k < u，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的 信号质量为： (Nllk、N12k......Nljk......Nlmk)， 各成分的信号质量和为： Ni〇k_Nllk+ N12k + N13k......N1Jk......+ Nlmk, 记 Qik_ (Nnk，N12k......Nljk......Nlmk，N 1(lk); 解第u种m行的方程组，得出第1批对照提取物中各成分在仪器中的信号质量为： (Nllu、N12u......Nlju......Nlmu)， 各成分的信号质量和为： Ni〇u=Nllu+ N12u + N13u......Nlju......+ Nlmu， 记 Qlu- (Nllu，N12u......Nlju......Nlmu，N 10u) 步骤四、统计第1批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和 统计第1批对照提取物的第1种成分Ai信号质量的U种值（Nm，N112，……Nllk…… Nllu)，得出统计值（Tn，en)，其中Tn为平均值，e n为标准偏差，相对标准偏差Pn= en/ T11; 统计第1批对照提取物的第2种成分Α2信号质量的u种值（Ν121，Ν122,……N 12k……N12u)， 得出统计值（T12, e12)，其中T12为平均值，e12为标准偏差，相对标准偏差P 12 = e12/ T12 ; 统计第1批对照提取物的第j种成分Α」信号质量的u种值（Nw，Nlj2,……Nljk……N lju)， 得出统计值（L，eij)，其中为平均值，eij为标准偏差，相对标准偏差Ρυ_ = eij/ ; 统计第1批对照提取物的第m种成分信号质量的u种值（Ν1η?，Ν1ηι2，......N lnik...... Nlmu)，得出统计值（Tlm，elm)，其中Tlm为平均值，e lm为标准偏差，相对标准偏差Plm = elm/Tlm ; 统计第1批对照提取物的m种成分信号质量总和的u种值（N1CI1，N1CI2,......N 1(lk......N1(lu)， 得出统计值（T1CI，e1(l)，其中T1(l为平均值，e1(l为标准偏差；相对标准偏差P 1(l = e1(l/T1(l ; 当相对标准偏差Pn、P12……Pu……。均低于可接受的判另Ο误差R时，贝1J标定成功， 第1批对照提取物的各成分在仪器中的信号质量为（Tn，T12…………Tlm)，总信号质量为 T1(l，第1批对照提取物的各成分的百分含量或者为（Τη/ Μ。L/X…………Tlm/ ΜΡ， 或者为（Tn/ T1(l，T12/ T1(l……IV Τ1(ι……Tlm/ Τ1(ι)，其中，可接受的判别误差R与仪器的精 密度、操作人员的操作误差、提取物纯化的难易程度、提取物中成分的稳定性等有关，其值 或者是5%，或者3%，或者2%，或者1%等。2. 根据权利要求1所述的对照提取物的标定方法，其特征在于： 在步骤三中解出了第1批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的u种值， 即 Qik_ (Nnk，N12k......Nljk......Nlmk，N 10k)，其中，k-l、2......u ; 于是可计算出第i批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的U种值，即 Qik_ (Nnk，Ni2k......Nijk......Nimk，N i0k) =(λ n*Nllk，λ i2*N12k......入 ij*N1Jk......入 im*Nlnik，Ni0k)， 其中，i=2、3......n，k=l、2、......u ; 在步骤四中，除了统计第1批对照提取物各成分的信号质量及信号质量总和的相对标 准偏差（Pn，P12…………Plm，P10)夕卜，还应统计： 第i批对照提取物中各成分的信号质量及信号质量总和的u种值的相对标准偏差（Ρη， Pi2……Pi」……？^--))，其中1=2、3……η; 当相对标准偏差？^均低于可接受的判别误差R时，则标定成功，其中i=l、2、3……n， j=l、2、3......m、0〇3. 根据权利要求1或2所述的对照提取物...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈浩达，
申请(专利权)人：陈浩达，
类型：发明
国别省市：河北;13