一株对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌制造技术

一株对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌，本发明专利技术涉及一株链霉菌。本发明专利技术提供一株链霉菌，对杨树灰斑病菌有抑制作用，为杨树灰斑病的生物防治提供了有效途径。本发明专利技术对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌为链霉菌Syjd3，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年6月17日，保藏编号为CGMCC No.9355。本发明专利技术链霉菌Syjd3对杨树灰斑病菌有抑制作用，该菌对杨树叶枯病菌、茄病镰刀菌、小麦根腐病菌、玉米弯孢病菌和水稻恶苗病菌也有一定抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
一株对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌
本专利技术涉及一株链霉菌。
技术介绍
杨树灰斑病是由杨树灰斑病菌(Sporocaduspopulinus(Bres.)Orsenigo,Rodondi&B.Sutton＝CoryneumpopulinumBres.)引起的一种危害杨树叶片叶部病害之一，发生面积大，危害严重，主要发生在幼树、幼苗的叶片和树梢上，使叶片提早脱落，干部溃疡，嫩梢枯顶，生长量减低，严重时可造成植株死亡，移栽成活率降低，对杨树育苗和造林威胁很大。植物病害是威胁农业生产的重要因素之一，目前使用化学农药是控制植物病害的主要方法，但化学农药的长期使用不仅污染环境，破坏生态平衡，而且残留对人、畜都有危害，并且使病原菌产生了抗药性，因此植物病害的生物防治研究越来越受到重视。植物内生放线菌是生活在植物健康组织内部的微生物，与植物宿主及和它共生的其他微生物间有密切的关系，是生物防治的一个新菌种。近年来植物内生菌已引起了植物保护学家、微生物学家、生态学家等的广泛关注，逐步成为国内外研究的热点，国内外研究均表明内生菌对防治植物病害具有潜在的应用和开发价值，因此寻找防治杨树灰斑病菌拮抗菌是重要的防治途径之一。
技术实现思路
本专利技术提供一株链霉菌(Streptomyces)，对杨树灰斑病菌有抑制作用，为杨树灰斑病的生物防治提供了有效途径。本专利技术对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌为链霉菌(Streptomycessp.)Syjd3，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年6月17日，保藏编号为CGMCCNo.9355。本专利技术链霉菌Syjd3在高氏一号培养基上划线插片培养，28℃培养7-14d后，分别用光学显微镜和电子显微镜观察插片上的气生菌丝、基生菌丝及孢子的形态特征。菌丝体初期白色，后变为浅黄褐色。菌落表边干燥、粉状、正反面颜色一致。气生菌丝丰富，多分枝。基内菌丝有分支、无横隔、无断裂。孢子丝柔曲型偶尔螺旋性，孢子杆状，表面光滑。本专利技术链霉菌Syjd3在高氏一号培养基上气生菌丝生长旺盛，粉状，浅黄褐色，无可溶性色素。在淀粉琼脂培养基上气生菌丝暗黄褐色，气生菌丝旺盛，无可溶性色素。燕麦粉琼脂培养基上气生菌丝暗灰色，旺盛，基内菌丝灰色，无可溶性色。所述淀粉琼脂培养基由10g可溶性淀粉、1g硫酸镁、1g硝酸钾、0.3g磷酸氢二钾、2g酵母浸粉、0.5g氯化钠、15g琼脂和1000mL蒸馏水组成，pH为7.2-7.6，121℃，灭菌20分钟。所述燕麦粉琼脂培养基由20g燕麦粉、0.001g七水硫酸铁、0.001g氯化锰、0.001g硫酸锌、18g琼脂和1000mL蒸馏水组成，pH为7.2-7.6，121℃，灭菌20分钟。参照《链霉菌鉴定手册》对链霉菌Syjd3分别进行明胶液化、牛奶凝固与胨化、淀粉水解、纤维素上生长、H2S产生及碳源利用。链霉菌Syjd3能使明胶液化、牛奶凝固、胨化慢、淀粉水解强。在纤维素上不生长。产生H2S。利用葡萄糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-果糖，不利用D-木糖、蔗糖、棉子糖、D-甘露醇、肌醇。本专利技术链霉菌Syjd3通过16SrDNA序列比对分析，与StreptomycescavourensisKC178676.1的相似度为99％。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定链霉菌Syjd3属于链霉菌属(Streptomyces)。本专利技术链霉菌Syjd3对杨树灰斑病菌有抑制作用，该菌对杨树叶枯病菌、茄病镰刀菌、小麦根腐病菌、玉米弯孢病菌和水稻恶苗病菌也有一定抑制作用。本专利技术链霉菌(Streptomycessp.)Syjd3，属于链霉菌属(Streptomyces)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年6月17日，保藏编号为CGMCCNo.9355。附图说明图1为本专利技术链霉菌Syjd3画线培养的菌落形态照片；图2为本专利技术链霉菌Syjd3与杨树灰斑病菌的对峙筛选图；图3为本专利技术链霉菌Syjd3和相近菌株进行同源性比对构建的系统发育树。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌为链霉菌(Streptomycessp.)Syjd3，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年6月17日，保藏编号为CGMCCNo.9355。本实施方式链霉菌Syjd3在高氏一号培养基上划线插片培养，28℃培养7-14d后，分别用光学显微镜和电子显微镜观察插片上的气生菌丝、基生菌丝及孢子的形态特征(如图1)。菌丝体初期白色，后变为浅黄褐色。菌落表边干燥、粉状、正反面颜色一致。气生菌丝丰富，多分枝。基内菌丝有分支、无横隔、无断裂。孢子丝柔曲型偶尔螺旋性，孢子杆状，表面光滑。本实施方式链霉菌Syjd3在高氏一号培养基上气生菌丝生长旺盛，粉状，浅黄褐色，无可溶性色素。在淀粉琼脂培养基上气生菌丝暗黄褐色，气生菌丝旺盛，无可溶性色素。燕麦粉琼脂培养基上气生菌丝暗灰色，旺盛，基内菌丝灰色，无可溶性色。参照《链霉菌鉴定手册》对链霉菌Syjd3分别进行明胶液化、牛奶凝固与胨化、淀粉水解、纤维素上生长、H2S产生及碳源利用。链霉菌Syjd3能使明胶液化、牛奶凝固、胨化慢、淀粉水解强。在纤维素上不生长。产生H2S。利用葡萄糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-果糖，不利用D-木糖、蔗糖、棉子糖、D-甘露醇、肌醇。具体实施方式二：本实施方式链霉菌(Streptomycessp.)Syjd3从黑龙江省哈尔滨市第三苗圃的3年生银中杨中分离得到。分离方法按以下步骤进行：(1)从黑龙江省哈尔滨市第三苗圃的3年生银中杨上随机挑选5株树，每株随机采集30片叶子，在超净工作台内用75％酒精将叶子进行表面消毒。(2)将消毒好的叶子10克用研钵研碎，后放入装有玻璃珠和无菌水的三角瓶中，在150转/分的摇床上摇30分钟，静止30秒后，依次稀释10倍，制备10-1、10-2、10-3、10-4稀释液，吸取稀释液0.2ml滴加到高氏一号培养基平板上，涂抹均匀，将培养皿放在28℃培养箱内倒置培养。高氏一号培养基由20g可溶性淀粉、1gKNO3、0.5gNaCl、0.5gK2HPO4、0.5gMgSO4、0.01gFeSO4、20g琼脂和1000mL水组成，pH为7.2-7.6。(3)采用平板对峙法筛选对杨树灰斑病菌有抑制作用的菌株将步骤(2)培养得到的菌株，用高氏一号培养基培养，将杨树灰斑病菌在PDA培养基上培养10-15d后，将步骤(2)培养得到的菌株用打孔器取7mm直径的菌块，接种于杨树灰斑病菌对称两侧，两者相距为7mm，培养10-12d后观察测量抑菌圈直径，选择拮抗作用最佳的菌株(如图2)，即为本实施方式的链霉菌Syjd3。对分离筛选得到的链霉菌Syjd3进行分子鉴定，提取菌株的基因组DNA，应用常规PCR扩增该菌株的16SrDNA并测序，其序列如SEQIDNO：1所示。链霉菌(St本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌，其特征在于该菌株为链霉菌(Streptomyces sp.)Syjd3，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年6月17日，保藏编号为CGMCC No.9355。

【技术特征摘要】
1.一株对杨树灰斑病菌有抑制作用的链霉菌，其特征在于该菌株为链霉菌(Streptomycessp.)Syjd3，保藏在中国微生物菌种保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪英，马玲，刘雪峰，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23