一种生物复合型木霉抑制剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于防治食用菌木霉污染的微生物技术领域，具体涉及一种生物复合型木霉抑制剂及其制备方法。本发明专利技术的目的是解决现有防治木霉的药剂存在防治效果低、残留量大和成本高的问题。本发明专利技术技术方案为：一种生物复合型木霉抑制剂，它是由枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041分别进行单菌种发酵培养制成发酵液，然后将两种发酵液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；或者将两种发酵液的菌体过滤后剩余的滤液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂。本发明专利技术具有治愈率高、环保无害的优点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于防治食用菌木霉污染的微生物
，具体涉及。本专利技术的目的是解决现有防治木霉的药剂存在防治效果低、残留量大和成本高的问题。本专利技术技术方案为：一种生物复合型木霉抑制剂，它是由枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041分别进行单菌种发酵培养制成发酵液，然后将两种发酵液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；或者将两种发酵液的菌体过滤后剩余的滤液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂。本专利技术具有治愈率高、环保无害的优点。【专利说明】
本专利技术属于防治食用菌木霉污染的微生物
，特别涉及一种生物复合型木 霉抑制剂及其制备方法。
技术介绍
木霉引起的绿霉病是食用菌生产过程中最大的威胁，生产上通常采用化学药剂防 治，一旦在出菇期采用不得当的农药防治，就会造成农药的残留。且长时间使用单一化学药 剂会使病害抗性增强，防治效果降低，且残留量大，对人体健康构成威胁，并且污染环境。近 年来国内外开发代替化学农药的植物提取物如木醋液、植物熏蒸物、小桐子提取物一类提 取物质控制木霉危害，虽然抑菌效果较好，但以上成品制造成本高、产率较低。因此利用微 生物防治木霉具有较好的应用前景。目前已有用来防治木霉的微生物菌株以及抗生素，如 枯草芽孢杆菌、纳他霉素等。虽然微生物对木霉的抑制效果较好，但是将能够抑制木霉的微 生物菌株复配从而达到更好的抑制效果，并没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有防治木霉的药剂存在的防治效果低、残留量大和制造成 本高的技术问题，提供。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案为： -种生物复合型木霉抑制剂，它是由枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌 ACCC40041分别进行单菌种发酵培养制成发酵液，然后将两种发酵液按照重量比为1?5 : 5?1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；或者将两种发酵液的菌体过滤后剩余 的滤液按照重量比为1?5 :5?1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；其中生物 复合型木霉抑制剂中枯草芽孢杆菌ACCC11088的菌数为0. 5亿/mL?40亿/mL，泾阳链霉 菌ACCC40041的菌数为0. 5亿/mL?20亿/mL。 本专利技术生物复合型木霉抑制剂的制备方法包括如下步骤： (1)单菌种发酵液的制备： 枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液的制备：将枯草芽孢杆菌ACCC11088在无菌条件 下接种到液体培养基中，在30°C、180r/min条件下发酵培养，镜检80%形成芽孢制成，其中 所述的液体培养基为：各组分在1. 0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨9?llg，牛肉膏3?5g， 氯化钠4. 5?5. 5g，PH调至7. 2?7. 4之间； 泾阳链霉菌ACCC40041发酵液的制备：泾阳链霉菌ACCC40041在无菌条件下接种 到高氏I号液体培养基中，在28°c、180r/min条件下发酵培养，发酵进行5?7天制成，其 中所述高氏I号培养基为：各组分在1. 0L蒸馏水中的含量为：可溶性淀粉：18?23g，硝酸 钾lg，磷酸氢二钾〇. 4?0. 6g，七水硫酸镁0. 4?0. 6g，氯化钠0. 4?0. 6g，七水硫酸亚铁 0.018，？!1调至7.4?7.6之间； (2)复合木霉抑制剂的制备： 将步骤⑴制备得到的枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液和泾阳链霉菌ACCC40041 发酵液按照重量比为1?5 :5?1的比例混合制成； 或者是将枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液和泾阳链霉菌ACCC40041发酵液分别过 滤，取各自的滤液按照重量比为1?5 :5?1的比例混合制成。 本专利技术复合木霉抑制剂由两种有益微生物复合而成，分别是中国微生物菌种保藏 管理委员会农业微生物中心保存的枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041。它 们能够在食用菌菌丝生长初期有效的抑制食用菌木霉的生长，同时不会抑制食用菌菌丝的 生长，且对人畜无毒无害。 为进一步表明本专利技术生物复合型木霉抑制剂的效果，本专利技术做了如下实验： 一、从发病的平菇、香菇和金针菇的栽培料中分离木霉真菌，为木霉拮抗实验提供 病原菌，具体步骤如下： 1、从发病的平菇、香菇和金针菇栽培料或子实体上挑取木霉孢子于PDA平板上， 置于26°C培养，观察培养好的平板，选择生长数量多的、绿色菌落进行纯化，挑取菌丝划线 于PDA平板上，26°C培养，待得到纯的菌落后，接种于PDA斜面试管，保存于4°C冰箱中；纯 化的木霉菌在PDA培养基上于26°C黑暗培养，每天观察菌落的形态特征和颜色，测量菌落 直径并挑取菌丝及孢子制片，于显微镜下观察分生孢子梗分枝方式、产孢细胞和孢子的形 态； 2、经分尚纯化，从香燕上分尚出一株木霉菌编号为XG，从平燕上分尚出两株木霉 菌编号为M3, M5,从金针菇上分离出一株木霉菌编号为JZG，各菌株的特征为如下： XG:在PDA平板上，菌落初呈白色绒状，后期出现轮状的菌丝密实产孢区，颜色为 绿色至深绿色，分生孢子梗呈环状排列，次级分枝单个或以2-3个为一组，大角度伸出，分 枝弯曲或波状，瓶梗基部缢缩，中部较宽，从中部以上变窄形成长颈，分生孢子呈球形，表面 有刺。 M3 :菌丝生长快，背面无色至淡黄色，菌落初呈白色，后变成绿色，后期在菌落中 间有一圈明显的产孢区，分生孢子梗分枝多，分枝角度大，瓶梗细长，对生、轮生于孢子梗 上，末端瓶梗较长，分生孢子呈椭圆形或卵圆形。 M5 :菌落初呈白色，后变成绿色，后期在菌落中间有一圈明显的产孢区，分生孢子 梗分枝多，分枝角度大，瓶梗细长，对生、轮生于孢子梗上，分生孢子呈短柱状。 JZG :菌丝生长很快，背面无色或暗黄色。菌落初呈白色绒状，后变为绿色至深绿 色，后期出现轮状的菌丝密实产孢区，分生孢子梗分枝少，次级分枝单个或2-3个为一组， 大角度伸出，分枝略呈弯曲状。 二、食用菌感染木霉治疗实验 实验方法： 1、栽培袋的制备 将平菇栽培原料棉籽皮和玉米芯经过简单的发酵处理后（约5天左右），装袋，并 接种平菇菌种，待平菇菌丝体生长至3?5cm左右时备用。 2、各种拮抗菌株的制备 分别配制普通、高氏液体培养基，在28°C下摇瓶培养，菌液培养完成后备用。 3、病原菌返接 将M5、M3、XG和JZG病原菌活化后，用移液枪吸取0. 1ml定量的注入到菌袋中，培 养2?3天后备用。 4、病原菌治疗 待病原菌生长到3?8cm时，用注射器吸取枯草芽孢杆菌ACCC11088+泾阳链霉菌 ACCC40041原液、10倍稀释液和过滤液的菌液注入病原菌部位，保证拮抗菌液接触到病原 菌，测定各处理的治愈率。 实验结果：原液处理组对四个木霉病原菌治愈率达到88%、93%、90%、91 %;十倍 稀释液处理组对四个木霉病原菌治愈率达到75%、81%、84%、84% ;菌体过滤液处理组对 四个木霉病原菌治愈率达到85%、91%、90%、91% ;空白对照的治愈率为5%、5%、10%、 9%。具体数据见表1。 上述实验表明，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物复合型木霉抑制剂，其特征在于：它是由枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041分别进行单菌种发酵培养制成发酵液，然后将两种发酵液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；或者将两种发酵液的菌体过滤后剩余的滤液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；其中生物复合型木霉抑制剂中枯草芽孢杆菌ACCC11088的菌数为0.5亿/mL～40亿/mL，泾阳链霉菌ACCC40041的菌数为0.5亿/mL～20亿/mL。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冬至，杨丽丽，杨文艳，刘李玄牝，
申请(专利权)人：山西昌鑫生物农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西;14