从猪分离的菌株制造技术

本发明专利技术的第一方面涉及一种猪乳酸菌菌株，其中所述菌株的特征在于一种或多种以下特征：(i)展现出针对大肠杆菌的抗微生物活性的能力；(ii)展现出针对肠炎沙门氏菌的抗微生物活性的能力；(iii)抑制由12-氧-十四烷酰戟二萜醇-13-乙酸酯（PMA）诱导的IPEC细胞中的炎症的能力；(iv)阻断肠炎沙门氏菌附着或侵入IPEC细胞的能力；(v)阻断大肠杆菌附着或侵入IPEC细胞的能力；(vi)没有对选自以下的一种或多种抗生素的抗生素抗性：氨苄西林；头孢噻肟；氯霉素；红霉素；艮他霉素；四环素；万古霉素；甲硝唑；萘啶酸；和卡那霉素；和(vii)当遭受三个循环的加热时展现出热稳定性的能力，每个所述循环包括在70℃的温度下加热15分钟。本发明专利技术的其他方面涉及包含所述菌株的组合物及所述菌株的治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从猪分离的菌株
本专利技术涉及从猪分离的菌株。更具体地，本专利技术涉及从有机饲养的猪分离乳酸菌。所要求保护的乳酸菌具有有益的益生菌应用和治疗应用。
技术介绍
猪的菌群组成，其消化道先天免疫功能和可能的对感染的易感性受到其生命早期饲养环境的极大影响(Mulder et al，2009)。室外饲养的猪通常比室内饲养的猪具有更发达的消化道免疫系统，表现更好且更健康。户外环境显著地影响了消化道的微生物的多样性，并且与高水平的硬壁菌门(Firmicutes)，尤其是乳酸菌[LAB]有关。 LAB包含一个进化枝的革兰氏阳性、低GC、耐酸、通常不形成孢子、不呼吸的细菌，其与某些常见的代谢和生理特征有关。LAB是棒状杆菌或球菌，其特征为对较低的pH范围有增加的耐受性。LAB可产生乳酸，作为碳水化合物发酵的主要代谢终产物并且是食品工业中使用的最重要的微生物类群之一。 乳杆菌(Lactobacilli)在有机(室外)饲养的猪的消化道菌群中占优势地位。相比之下,在室内饲养的猪中这些细菌的数量低,可能致病的种系型的水平高(Mulder etal, 2009) 0此外，已知室内饲养的猪的消化道免疫发育和功能偏离了正常水平。具体地，已知I型干扰素基因、主要组织相容性复合体I类和若干趋化因子的表达增加(Mulder etal, 2009)。 乳酸菌可以以若干方式改变菌群以及消化道结构和功能(Cotter et al, 2005 ；Ohashi and Ushida，2009)。例如，乳酸菌可以与有害细菌竞争关键营养素或消化道上的附着位点，导致有害细菌被驱逐。或者，乳酸菌可产生生物活性物质，其帮助或促进有益细菌的定殖或杀死可能有害的细菌或致病菌或干扰其生长。或者，这些生物活性因子可以是促进免疫系统发育和消化道屏障完整性的免疫调节剂。LAB菌株的生物活性大不相同。本专利技术旨在提供具有在治疗上有用的特性的LAB菌株。更具体地，本专利技术旨在提供能够促进消化道和免疫系统发育和健康的LAB菌株,从而作为益生菌具有可观的治疗潜力。
技术实现思路
本 申请人:已经表明，室外饲养的猪的微生物丛含有可产生强效且特异性的抗微生物生物活性因子或细胞_/免疫-调节生物活性因子的LAB菌株。 本专利技术的多个方面与优选的实施方案一起在所附的权利要求书中列出。 本专利技术的第一方面涉及一种猪乳酸菌菌株，其中所述菌株的特征在于一种或多种如下特征: (i)展现出针对大肠杆菌(E.coli)的抗微生物活性的能力； (ii)展现出针对肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)的抗微生物活性的能力； (iii)抑制由 12-氧-十四烧酰戟二職醇-13-乙酸酯(12-0-tetradecaboylphorbol-13-acetate (PMA))诱导的IPEC细胞中的炎症的能力； (iv)阻断肠炎沙门氏菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (V)阻断大肠杆菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (vi)没有对选自以下的一种或多种抗生素的抗生素抗性:氨苄西林；头孢噻肟；氯霉素；红霉素；艮他霉素；四环素；万古霉素；甲硝唑(metronizadole);萘唳酸；和卡那霉素；和 (vii)当遭受三个循环的加热时展现出热稳定性的能力，每个循环包括在70°C的温度下加热15分钟。 第二方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株和可药用赋形剂、载体或稀释剂的组合物。 第三方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株的益生菌组合物。 第四方面涉及一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株用于药物。 第五方面涉及一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株用于治疗受试者中的肠道病症。 第六方面涉及一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株在制备用于治疗受试者中肠道病症的药物中的用途。 第七方面涉及一种治疗受试者中的肠道病症的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株或本专利技术的组合物。 本专利技术的第八方面涉及一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株用于改善肠道微生物群。 本专利技术的第九方面涉及一种改善受试者中的肠道微生物群的方法，所述方法包括给予所述受试者一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株或本专利技术的组合物。 第十方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株的饲料。 第H^一方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株的食品。 第十二方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株的饮食补充剂。 第十三方面涉及一种包含一种或多种本专利技术的乳酸菌菌株的食品添加剂。 第十四方面涉及一种产生益生菌的方法，所述方法包括培养本专利技术的乳酸菌菌株。 本专利技术的第十五方面涉及一种获得猪乳酸菌菌株的方法，所述方法包括从有机饲养的猪获得粪便并从所述粪便提取一种或多种猪乳酸菌菌株。 本专利技术的第十六方面涉及通过上述方法获得或可获得的一种或多种猪乳酸菌菌株。 【具体实施方式】 如上所述，本专利技术涉及一种或多种猪乳酸菌菌株。所述乳酸菌菌株的特征在于一种或多种如下特征: (i)展现出针对大肠杆菌的抗微生物活性的能力； (ii)展现出针对肠炎沙门氏菌的抗微生物活性的能力； (iii)抑制由12-氧-十四烷酰戟二萜醇-13-乙酸酯(PMA)诱导的IPEC细胞中的炎症的能力； (iv)阻断肠炎沙门氏菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (V)阻断大肠杆菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (vi)没有对选自以下的一种或多种抗生素的抗生素抗性:氨苄西林；头孢噻肟；氣霉素；红霉素；艮他霉素；四环素；万古霉素；甲硝唑；奈淀酸；和卡那霉素；和 (vii)当遭受三个循环的加热时展现出热稳定性的能力，每个循环包括在70°C的温度下加热15分钟。 本文使用的术语“猪”意指“猪的或属于猪”，即任一种猪科哺乳动物的或属于任一种猪科哺乳动物，尤其是年幼的或体积相对小的家养阉猪、驯化的欧洲中部野猪(Susscrofa domesticus)或家猪(Sus domesticus)。 优选地，所述猪不到3个月大，优选地，不到2个月大。 优选地，所述猪乳酸菌菌株来自有机饲养的猪。在这一点上，优选地，所述猪是在没有抗生素、生长促进剂和/或生长增强剂的情况下在外面自由放养的(同时暴露于土壤)。 优选地，所述猪乳酸菌菌株来自室外饲养的猪。优选地，所述猪生命的至少60 %是在外面饲养的。更优选地，所述动物生命的至少80%是在外面饲养的，更优选地，所述动物生命的至少90 %，甚至更优选其生命的100 %是在外面饲养的。 在一个优选的实施方案中，所述乳酸菌菌株选自约氏乳杆菌(L.johnsonii)、路氏乳杆菌(L.reuteri)、植物乳杆菌(L.plantarum)、加氏乳杆菌(L.gasseri)、戍糖乳杆菌(L.pentosus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、阴道乳杆菌(L.vaginalis)和粘膜乳杆菌(L.mucosae)。 在一个优选的实施方案中，所述乳酸菌菌株选自约氏乳杆菌、路氏乳杆菌和植物乳杆菌。 在另一个优选的实施方案中，所述乳酸菌菌株的形式是活的细菌群、冻干的细菌群、不活的细菌制剂或其细胞组分。优选地，当所述菌株的形式是不活的细菌制剂时，其选自热灭活的细菌、辐照的细菌和裂解的细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪乳酸菌菌株，其中所述菌株的特征在于一种或多种以下特征：(i)展现出针对大肠杆菌（E.coli）的抗微生物活性的能力；(ii)展现出针对肠炎沙门氏菌（S.enteritidis）的抗微生物活性的能力；(iii)抑制由12‑氧‑十四烷酰戟二萜醇‑13‑乙酸酯（PMA）诱导的IPEC细胞中的炎症的能力；(iv)阻断肠炎沙门氏菌附着或侵入IPEC细胞的能力；(v)阻断大肠杆菌附着或侵入IPEC细胞的能力；(vi)没有对选自以下的一种或多种抗生素的抗生素抗性：氨苄西林；头孢噻肟；氯霉素；红霉素；艮他霉素；四环素；万古霉素；甲硝唑；萘啶酸；和卡那霉素；和(vii)当遭受三个循环的加热时展现出热稳定性的能力，每个循环包括在70℃的温度下加热15分钟的时间。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.14 GB 1112091.21.一种猪乳酸菌菌株，其中所述菌株的特征在于一种或多种以下特征: (i)展现出针对大肠杆菌(E.coli)的抗微生物活性的能力； (ii)展现出针对肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)的抗微生物活性的能力； (iii)抑制由12-氧-十四烷酰戟二萜醇-13-乙酸酯(PMA)诱导的IPEC细胞中的炎症的能力； (iv)阻断肠炎沙门氏菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (v)阻断大肠杆菌附着或侵入IPEC细胞的能力； (vi)没有对选自以下的一种或多种抗生素的抗生素抗性:氨苄西林；头孢噻肟；氯霉素；红霉素；艮他霉素；四环素；万古霉素；甲硝唑；萘啶酸；和卡那霉素；和 (vii)当遭受三个循环的加热时展现出热稳定性的能力，每个循环包括在70°C的温度下加热15分钟的时间。2.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有选自(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)的任意两种特征。3.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有选自(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)的任意三种特征。4.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有选自(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)的任意四种特征。5.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有选自(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)的任意五种特征。6.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有选自(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)的任意六种特征。7.权利要求1的乳酸菌菌株，其具有所有七种特征:(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(V)、(vi)和(vii)。8.前述权利要求任一项的乳酸菌菌株，选自约氏乳杆菌(L.johnsonii)、路氏乳杆菌(L.reuteri)>植物乳杆菌(L.plantarum)、加氏乳杆菌(L.gasseri)、戍糖乳杆菌(L.pentosus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、阴道乳杆菌(L.vaginalis)和粘膜乳杆菌(L.mucosae)。9.前述权利要求任一项的乳酸菌菌株，选自约氏乳杆菌、路氏乳杆菌和植物乳杆菌。10.前述权利要求任一项的乳酸菌菌株，选自: NCIMB41846:路氏乳杆菌 GGDK31 ； NCIMB41847:类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)和路氏乳杆菌 GGDK161 ； NCIMB41848:路氏乳杆菌 GGDK255 ； NCIMB41849:植物 / 戍糖 / 瑞士(Lactobacillus helveticus) / 类植物乳杆菌GGDK258 ； NCIMB41850:约氏乳杆菌和路氏乳杆菌GGDK266 ； NCIMB42008约氏乳杆菌； NCIMB42009:路氏乳杆菌； NCIMB42010:植物乳杆菌； NCIMB42011路氏乳杆菌；和NCIMB42012:路氏乳杆菌。11.一种组合物，其包含一种或多种权利要求ι-?ο任一项的乳酸菌菌株以及可药用赋形剂、载体或稀释剂。12.—种益生菌组合物，其包含一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·凯利，
申请(专利权)人：GT生物制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB