丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用，属于豆科植物的培养方法技术领域。该应用中单株豆科植物中丛枝菌根真菌接种菌量为30～50个孢子/ml，根瘤菌接种量为浓度1.0×109cfu.mL-1的根瘤菌菌液5～15mL。该应用中矿物磷含量为每kg豆科植物培养基质中含有0.1～0.2g难溶性磷，难溶性磷为有效磷含量为0.67g/kg的磷矿粉。本发明专利技术为丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种豆科植物吸收难溶性矿物质提供了理论依据，为减少化学肥料使用及促进豆科植物更好地利用营养物质提供了理论依据。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用，属于豆科植物的培养方法
。该应用中单株豆科植物中丛枝菌根真菌接种菌量为30～50个孢子/ml，根瘤菌接种量为浓度1.0×109cfu.mL-1的根瘤菌菌液5～15mL。该应用中矿物磷含量为每kg豆科植物培养基质中含有0.1～0.2g难溶性磷，难溶性磷为有效磷含量为0.67g/kg的磷矿粉。本专利技术为丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种豆科植物吸收难溶性矿物质提供了理论依据，为减少化学肥料使用及促进豆科植物更好地利用营养物质提供了理论依据。【专利说明】丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用
本专利技术属于豆科植物的培养方法
，具体涉及丛枝菌根菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用。
技术介绍
丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza, AM)真菌是一类内生菌根真菌，广泛存在于土壤中，能与陆地上90%以上的植物根系形成共生体，其宿主包括苔藓植物、蕨类植物、裸子植物和被子植物。同时AM真菌的根外菌丝可以从外界环境中吸收水分和矿质元素，促进植物生长，改善植物营养状况。根瘤菌是革兰氏阴性细菌，广泛分布于土壤中，可与相应的豆科植物根系共生，侵染豆科植物的根部形成根瘤，进而将空气中的分子态氮转化为植物可利用的氨。研究表明，豆科植物根系周围生长着大量的AM真菌和根瘤菌，它们在长期的进化过程中形成了 AM真菌-豆科植物-根瘤菌三重共生体系，从而为豆科植物的生长提供了丰富的营养。磷素是植物所必需的，对于豆科植物来说，磷酸盐浓度的高低影响着植物的生长和有效根瘤的形成，且相对较高的磷水平有利于根瘤的形成和氮的固定。但大田土壤中90%的磷素是难溶性的，植物不能直接吸收利用，施用过多磷肥又会造成营养流失，环境污染。AM真菌作为内生菌根真菌，可与90%的植物形成共生体系，并可通过增加植物根际土壤中磷酸酶活性，增加植物对土壤中磷素的吸收，满足根瘤生长和固氮作用对磷的需求。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供利用丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收难溶性磷的方法的技术方案。所述的丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用。所述的应用，其特征在于所述的单株豆科植物中丛枝菌根真菌接种菌量为30~50个孢子/ml，根瘤菌接种量为浓度1.0X 19Cfu.mL—1的根瘤菌菌液5~15 mL。所述的应用，其特征在于所述的丛枝菌根真菌为根内球囊霉，来自根内球囊霉与发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根建立的共生系统，所述的根瘤菌经YMA斜面培养基活化及YMA液体培养基摇床培养获得。所述的应用，其特征在于矿物磷含量为:每kg豆科植物培养基质中含有0.1~0.2g难溶性磷，所述的难溶性磷为有效磷含量为0.67g/kg的磷矿粉。所述的应用，其特征在于所述的根内球囊霉与发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根建立的共生系统为:以发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根作为宿主。本专利技术通过对丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种豆科植物的试验，得到了丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种能够促进豆科植物吸收难溶性磷的用途，为丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种豆科植物吸收难溶性矿物质提供了理论依据，为减少化学肥料使用及促进豆科植物更好地利用营养物质提供了理论依据。【专利附图】【附图说明】图1为三室隔离培养盒的示意图； 图2为不同浓度磷矿粉对茎叶总磷含量的影响图。图2中磷矿粉中的有效磷含量为0.67g/kg，设置每kg河沙中0、0.06、0.12、和0.24g磷矿粉，分别用P0、P1、P2、P3表示。【具体实施方式】以下结合实施例来进一步说明本专利技术。实施例(I)育苗处理 选取籽粒饱满的绿豆种子，10%H202消毒10 min，蒸馏水反复冲洗干净后播种于盛有灭菌蛭石的培养杯中，置于智能光照培养箱中培养。待种子萌发，植株长出两片真叶后选取长势一致的绿豆苗进行移栽。(2)菌剂的制备 将AM真菌根内球囊霉iGlomus.1ntraradices)与毛根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根建立的共生系统倒入粉碎机中粉碎，然后倒入400目筛子中用自来水反复冲洗至培养基消失。漂洗干净后，用蒸馏水稀释到每毫升30~50个孢子后倒入试剂瓶，内含有侵染根，孢子和菌丝。根瘤菌在YMA斜面培养基上活化后，后转接到盛于200mLYMA液体培养基的500mL三角瓶中，置于摇床上培养。(3)培养方法 将育好的绿豆苗转移到三室隔离培养盒中(如图1所示)，三室隔离培养盒是由不锈钢的白色铁皮制作，两层孔径大小为38 μ m的尼龙网将培养盒分成菌根室1、隔离室2和菌丝室3。菌丝室3的体积为5 cmX 10 cmX 13 cm,菌根室I的体积为3 cmX 10 cmX 10 cm,隔离室2的体积仅为I cmX 10 cmX 10 cm,并且隔离室2的尼龙网只允许菌丝通过而不允许植物根通过进入菌丝室3，这样有效地减少了菌根室和菌丝室之间的营养物质流动。同时菌根室I比菌丝室3高3cm，进一步限制了两室之间的营养物质流动。菌根室I中的培养基质为灭菌的河沙，该河沙经自来水反复冲洗后再用去离子水冲洗，然后IX 15 Pa灭菌2 h得到。因根瘤菌是细菌，不能产生菌丝，不能透过隔离层吸收菌丝室的营养物质，故本试验设置3个处理，接种根瘤菌、AM真菌及根瘤菌和AM真菌双接种。AM真菌接种菌剂为2 mL(孢子数约为60~100个)，根瘤菌菌液5~15 mL (浓度约1.0X 109cfu.mL—1)，在接种根瘤菌之前先用根瘤菌菌液浸泡根5min,后都置于智能光照培养箱中培养,光照温度为25 °C,夜间温度为18°C。每隔6d向菌根室加5mL的Hoagland限氮限磷营养液(如表1)。30d后往菌丝室施加灭菌河沙，继续培养10d，保证菌根室I的菌丝可以延伸进入到菌丝室3，在此培养过程中每隔6d在菌根室I和菌丝室3加入5mL的Hoagland限氮限磷营养液。 表1 Hoagland限氮限磷营养液【权利要求】1.丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的单株豆科植物中丛枝菌根真菌接种菌量为30~50个孢子/ml，根瘤菌接种量为浓度1.0X 19Cfu.mL—1的根瘤菌菌液5~15 mL。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的丛枝菌根真菌为根内球囊霉，来自根内球囊霉与发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根建立的共生系统，所述的根瘤菌经YMA斜面培养基活化及YMA液体培养基摇床培养获得。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于矿物磷含量为:每kg豆科植物培养基质中含有0.1~0.2g难溶性磷，所述的难溶性磷为有效磷含量为0.67g/kg的磷矿粉。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的根内球囊霉与发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根建立 的共生系统为:以发根农杆菌质粒DNA转化的胡萝卜根作为宿主。【文档编号】A01G31/00GK104025983SQ201410247847【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月6日 优先权日:2014年6月6日 【专利技术者】金海如, 刁亚南 申请人:浙江师范大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种促进豆科植物吸收矿物磷的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金海如，刁亚南，
申请(专利权)人：浙江师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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