本发明专利技术公开了一种修复外周神经损伤的胶原材料的制备方法。该方法可包括如下步骤：将带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)和带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)与有序胶原材料共同孵育，得到所述修复外周神经损伤的胶原材料。本发明专利技术首次将两种因子CBD-CNTF和CBD-bFGF同时交联到有序胶原支架材料上，通过建立动物外周神经—面神经长横断损伤模型，评价含双因子的外周神经损伤修复胶原材料在长横断面神经损伤修复中发挥的作用。结果证实，含双因子的外周神经损伤修复胶原材料，和单因子CBD-CNTF或CBD-bFGF功能胶原支架材料相比可以更好地促进面神经的再生和功能的恢复，该功能材料在未来临床外周神经损伤修复的应用具有更为重要的现实指导意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医用材料领域，涉及一种修复外周神经损伤的胶原材料，特别涉及一种。
技术介绍
外周神经损伤是临床常见的疾病之一，目前临床上应用的直接断端缝合技术或自体神经移植方法，由于具有其应用的局限性，不能充分解决临床困难。随着组织工程的发展，采用组织工程方法促进神经再生以修复周围神经损伤成为研究热点。胶原支架材料能够为轴突的生长搭桥，起到引导轴突生长的作用。胶原蛋白是一种在组织工程中广泛应用的生物材料，它 免疫原性低，生物相容性好，可降解性能好。本专利技术的专利技术人所在实验室前期工作中制备的有序胶原材料(LOCS)是一种很好的神经生长引导材料，能引导神经细胞轴突沿有序胶原材料细丝的方向生长，这样，就能引导神经元形成正确的突触连接，有助于神经功能的恢复[Ma F，Xiao Z, Chen B, Hou X，Dai J, Xu R.Linearordered collagen scaffolds loaded with collagen-binding basic fibroblast growthfactor facilitate recovery of sciatic nerve injury in rats.Tissue engineering PartA.2014 ；20:1253-62.Cao J，Xiao Z，Jin Wj Chen B，Meng D，Ding Wj et al.1nduction of ratfacial nerve regeneration by functional collagen scaffolds.Biomaterials.2013 ；34:1302-10.]同时，有序胶原材料能结合神经营养因子，可以作为神经营养因子的载体。目前，尚未有关于结合双因子的外周神经损伤修复胶原支架材料在外周神经损伤修复中发挥作用的研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种修复外周神经损伤的胶原材料及其制备方法。本专利技术所提供的修复外周神经损伤的胶原材料的制备方法，具体可包括如下步骤:将带有胶原结合区的睫状神经营养因子和带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子与有序胶原材料共同孵育，得到所述修复外周神经损伤的胶原材料。在所述方法中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)、所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)和所述有序胶原材料的配比可为300-500 μ g =300-500 μ g:70_130mg。在本专利技术的一个实施例中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)、所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)和所述有序胶原材料的配比具体为400 μ g:400 μ g:100mg。在所述方法中，所述孵育可为25_37°C (如25°C )孵育0.5-1小时(如I小时)。在所述方法中，所述孵育时的液体环境具体为1XPBS。所述IXPBS的pH为7.4，溶剂为水，溶质及其浓度如下:磷酸二氢钾0.27g/L，磷酸氢二钠1.42g/L，氯化钠8g/L，氯化钾0.2g/L。在本专利技术中，所述孵育具体为:将IOOmg的所述有序胶原材料(如直径为50 μ m的有序胶原纤维)浸泡在0.5mL含400 yg所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)和400 μ g所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD_bFGF)的所述IXPBS中，25°C孵育I小时。在本专利技术中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)的氨基酸序列为如下(a)或(b);所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)的氨基酸序列为如下(c)或(d):(a)序列表中序列I的第22-243位；(b)序列表中序列I ;(c)序列表中序列2的第22-197位；(d)序列表中序列2。 其中，(b)相对(a)在氨基端连接有6个His标签；(d)相对(c)在氨基端连接有6个His标签。在本专利技术中，所述有序胶原材料(LOCS)的制备方法，具体可包括如下步骤:I)将牛筋膜用体积百分浓度为1-1.5% (如1% )的磷酸三丁酯溶液处理24-72小时(如48小时)；2)用含有 0.5-1.5mol/L (如 lmol/L) NaCl 的 25-100mmol/L (如 50mmol/L)、pH 为7.6-8.5 (如pH为8.0)的Tris-HCl缓冲液处理24-72小时(如48小时)；3)用 1.25Χ105-3.75 X IO5U (如(2.5 X IO5U))胰蛋白酶/IOOmL 缓冲液处理 48-96小时(如72小时)，得到所述有序胶原材料；所述缓冲液为25-lOOmmol/L(如50mmol/L)Tri s-HCl，pH 为 7-8(如 pH 为 8)；上述处理的温度均为2_8°C (如4°C )。进一步，在步骤3)用胰蛋白酶处理后，还可包括用0.5-1.5mol/L强碱溶液(如IMNaOH水溶液)处理5-10分钟(如5分钟)步骤。步骤I)中所述磷酸三丁酯溶液的溶剂为PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液，如25-100mmol/L (如 50mmol/L)、pH 为 7.6-8.5 (如 pH 为 8.0)的 Tris-HCl 缓冲液。步骤I)中，所述牛筋膜在处理前还要去除内层粘附的肌肉组织和外层粘附的脂肪。利用上述方法制备得到的修复外周神经损伤的胶原材料也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的另一个目的是提供一种修复外周神经损伤的胶原支架及其制备方法。本专利技术所提供的修复外周神经损伤的胶原支架的制备方法，具体可包括如下步骤:(I)根据待修复外周神经损伤部位的半径，采用胶原膜制备相同半径的胶原管；(2)向步骤(1)制备得到的胶原管中填充所述修复外周神经损伤的胶原材料，即获得了所述修复外周神经损伤的胶原支架。在所述方法中，步骤(1)具体可为:根据待修复外周神经损伤部位的半径，找到相同半径的模具(材质可为玻璃或塑料)，将胶原膜用水(如三蒸水)浸泡I~2min (如2min)(使胶原膜软透)，将浸泡过的胶原膜绕所述模具缠绕5/4圈，绕好后用液态胶原涂裹一圈，风干，10~30°C (如25°C )放置12小时使之交联，去除所述模具，获得所述胶原管。步骤(1)中，在去除所述模具后还包括将所述胶原管冻干、辐照的步骤。在所述方法中，步骤(2)中所述填充为将所述胶原管填充至占一半空间。利用所述方法制备得到的修复外周神经损伤的胶原支架也属于本专利技术的保护范围。另外，以上所述的修复外周神经损伤的胶原材料，或所述的修复外周神经损伤的胶原支架在如下任一中的应用也属于本专利技术的保护范围:(al)制备促进外周神经再生的材料；(a2)制备促进外周神经横断部位电生理恢复的材料；(a3)制备促进外周神经受损部位SlOO蛋白和/或神经丝蛋白表达的材料；(a4)制备促进外周神经受损部位髓鞘直径和髓鞘壁厚度增加的材料。在本专利技术中，所述外周神经具体为面神经；所述外周神经损伤具体为面神经长横断损伤。更加具体的，在本专利技术的一个实施例中，所述面神经长横断损伤是指将小型猪(如13月龄)的面神经游离切断3.5cm。本专利技术首次将两种 因子CBD-CNTF和CBD-本文档来自技高网...
【技术保护点】
修复外周神经损伤的胶原材料的制备方法，包括如下步骤：将带有胶原结合区的睫状神经营养因子和带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子与有序胶原材料共同孵育，得到所述修复外周神经损伤的胶原材料。
【技术特征摘要】
1.修复外周神经损伤的胶原材料的制备方法，包括如下步骤:将带有胶原结合区的睫状神经营养因子和带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子与有序胶原材料共同孵育，得到所述修复外周神经损伤的胶原材料。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子、所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子和所述有序胶原材料的配比为:300-500 μ g:300-500 μ g:70_130mgo3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述孵育为25-37°C孵育0.5-1小时。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于:所述孵育时的液体环境为IXPBSo5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于:所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子的氨基酸序列为如下(a)或(b);所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列为如下(C)或(d): (a)序列表中序列I的第22-243位； (b)序列表中序列I; (c)序列表中序列2的第22-197位； (d)序列表中序列2。6.利用权利要求1-5中任一所述的方法制备得到的修复外周...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，崔熠，侯祥林，肖志峰，陈冰，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。