萝卜硫素制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种萝卜硫素制剂，该制剂包含：萝卜硫素、介孔二氧化硅、脂质膜，其中，介孔二氧化硅表面具有纳米级孔洞，该孔洞中载有萝卜硫素，所述脂质膜包覆在该载有萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒表面。本发明专利技术还公开了该萝卜硫素制剂的制备方法和应用。本发明专利技术的萝卜硫素制剂，对于癌症治疗具有积极作用，它不仅可以显著提高萝卜硫素的稳定性，而且具有缓释和靶向双重作用，维持较长的血液循环时间及必需的血药浓度，同时可以识别癌症组织或细胞，并且还可以通过细胞的内吞作用实现细胞内给药，应用前景非常广阔。

【技术实现步骤摘要】
萝卜硫素制剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种萝卜硫素的新制剂，即脂质膜包覆介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒，以及该萝卜硫素纳米制剂的制备方法和应用。
技术介绍
恶性肿瘤是人类健康的头号杀手，近些年来恶性肿瘤发病率有逐年上升的趋势，并且发病年龄越来越年轻化。一直以来医学研究都致力于治疗和防治癌症，但肿瘤患者死亡率未得到有效抑制。目前，从天然植物中寻求高效低毒的抗肿瘤药物已经成为肿瘤防治的重要方向之一。萝卜硫素，又称“莱菔硫烷”，是从十字花科蔬菜中提取出来的异硫氰酸盐物质，是所有天然抗癌物质里，效力最强、效果最好的活性成分。它有独特的抗癌功效，可以造成癌细胞的细胞凋亡和细胞阻滞；诱导人体内II相解毒酶，同时抑制I型酶的产生，最终通过多种酶体系排出致癌物和H自由基H等有害成分。目前越来越多的研究表明，癌症干细胞是肿瘤细胞中数量较少但生命力很强的细胞，它们对化疗和放疗有抵抗性，不易定位，还可以“生出”新的肿瘤细胞，手术、化疗对癌症干细胞没有作用，导致癌症复发，所以抑制癌症干细胞成为治疗癌症的一个重要课题。国内外研究表明，萝卜硫素不仅对肿瘤细胞有杀伤效果，更能抑制肿瘤干细胞。同时，萝卜硫素成分在人体内无残留，对机体无副作用，是一种新型抗癌成分。萝卜硫素虽然有显著的抗癌和抑癌作用，但是结构不稳定，体内半衰期短，生物利用度极低，难以富集于病灶部位达到有效浓度，这些使萝卜硫素的临床应用有很大的局限性。鉴于萝卜硫素的不稳定性，目前研究多将其制备成与β环糊精、麦芽糖、戊二醛、乳清蛋白等的复合物或微胶囊，使之由不稳定的液体转化成较稳定的固态颗粒，方便用药。但是这些复合物或微胶囊中药物萝卜硫素的稳定性有限，且仍不能解决萝卜硫素体内半衰期短，生物利用度低的问题。而对于纳米制剂，由于萝卜硫素自身的物理性质，常规纳米粒的制备方法不能达到理想的载药量和包封效果，国内外至今未见萝卜硫素纳米制剂的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决萝卜硫素稳定性差、体内半衰期短的技术问题，提供一种萝卜硫素制剂，该制剂以介孔二氧化硅纳米粒作为萝卜硫素的载体材料，在载有萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒表面包覆有脂质膜，该制剂不仅能显著提高萝卜硫素的稳定性，而且具有很好的缓释萝卜硫素的作用。此外，还需要提供一种上述萝卜硫素制剂的制备方法及应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一个方面，提供了一种萝卜硫素制剂，该制剂包含:萝卜硫素、介孔二氧化硅、脂质膜，所述介孔二氧化硅表面具有纳米级孔洞，该孔洞中载有萝卜硫素，所述脂质膜包覆在该载有萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒表面。所述介孔二氧化硅是由十六烷基三甲基胺溴化物和正硅酸四乙酯经反应制备而O O所述脂质膜包含:D0PC或 DOTAP，DOPE，胆固醇，18: 1PEG2000-PE。优选的，所述脂质膜表面修饰有抗体，通过抗体抗原反应将本专利技术的萝卜硫素制剂靶向肿瘤细胞及肿瘤干细胞。本专利技术萝卜硫素制剂的粒径在200nm以下，可以通过细胞的内吞作用进入胞内，在细胞内环境中缓慢释放药物，达到抗癌作用。优选的，所述萝卜硫素制剂的粒径为100~200nm。在本专利技术的另一方面，提供了一种上述萝卜硫素制剂的制备方法，包括以下步骤:将十六烷基三甲基胺溴化物溶于碱性溶液后，加入正硅酸四乙酯反应，得空白介孔二氧化硅纳米粒；将萝卜硫素水溶液加入介孔二氧化硅纳米粒中，制成载萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒；将DOPC或DOTAP，DOPE，胆固醇，18: 1PEG2000-PE溶于氯仿中混匀，得脂质膜，再将该脂质膜水化后，用薄膜挤出器过聚碳酸酯膜多次，得纳米级脂质体混悬液；将上述制备的脂质体混悬液，滴加入载萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒的混悬液中，搅拌孵育，获得脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒。本专利技术萝卜硫素制剂的上述制备工艺简单，条件温和，能充分保持药物活性，解决了萝卜硫素不稳定、不易被包封的问题。优选的，所述载萝卜硫素介孔二氧化硅纳米粒混悬液浓度为7.49~27.0mg/ml,脂质体混悬液浓度为1.5~3mg/ml,该载萝卜硫素介孔二氧化娃纳米粒混悬液与脂质体混悬液体积比为1:3~1:5。在本专利技术的另一方面，还提供了上述萝卜硫素制剂的应用，用于制备治疗肿瘤的药物。本专利技术的萝卜硫素制剂，对萝卜硫素有很好的包封作用，载药量高达6.2%。经过体外药物释放实验表明，该制剂在体液环境PH7.4的条件下不释放药物或少量释放药物，48h内累积释放量低于8%，极大的降低了药物在体内广泛释放所带来的毒性作用；在细胞内环境PH5的条件下能缓慢释放药物长达48h，体外48h累积释放量为85%左右。该制剂适用于癌症的治疗，将脂质膜用抗体修饰后，可以靶向肿瘤细胞，并且该制剂粒径小于200nm，易于进入细胞内部，在细胞内环境中缓慢释放药物。因此，本专利技术的萝卜硫素纳米制剂，对于癌症的治疗具有非常积极的作用，它不仅可以显著提高萝卜硫素的稳定性，而且具有缓释和靶向双重作用，维持较长的血液循环时间及必需的血药浓度，同时可以识别癌症组织或细胞，克服了其他制剂全身给药的无选择性分布和严重毒性的缺点，并且特定粒径范围的纳米粒还可以通过细胞的内吞作用实现细胞内给药，应用前景非常广阔。【附图说明】 下面结合附图和【具体实施方式】对本专利技术作进一步详细的说明。图1是本专利技术实施例1介孔二氧化硅纳米粒的氮气吸附-脱附等温线(图1A)和BJH模型孔径分布曲线图(图1B)；图2是本专利技术实施例2脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒粒径分布图；图3是本专利技术脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒的场发射扫描电镜图； 图4是本专利技术脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒的场发射透射电镜图；图5是本专利技术脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒的体外释放曲线图。【具体实施方式】为了克服萝卜硫素稳定性差、体内半衰期短的技术问题，本专利技术研制出了一种萝卜硫素新制剂，即脂质膜包覆的介孔二氧化硅载萝卜硫素纳米粒。本专利技术萝卜硫素制剂选择介孔二氧化硅纳米粒作为萝卜硫素的载体材料，该介孔二氧化硅表面有规则排列的纳米级孔洞，可以吸附大量萝卜硫素药物，使载药量显著提高。在萝卜硫素吸附于介孔二氧化硅后，再用脂质材料对介孔二氧化硅纳米粒进行包裹，使药物释放行为得到控制，使其在体液PH值条件下释放量低于8%，而在细胞内pH环境下缓慢持续释放48h。脂质膜上的功能基团，可以连接抗体，通过抗体抗原反应而靶向肿瘤细胞及肿瘤干细胞；制剂粒径在200nm以下，可以通过细胞的内吞作用进入胞内，在细胞内环境中缓慢释放药物，达到抗癌作用。本专利技术萝卜硫素制剂的制备方法，包括以下步骤:1.制备载萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒I)制备空白介孔二氧化硅纳米粒将一定量的十六烷基三甲基胺溴化物(CTAB)溶解于去离子水中，加入氢氧化钠溶液，充分混匀。将混合溶液加热，得到澄清液体。将一定量的正硅酸四乙酯(TEOS)注入到上述澄清液体中，搅拌，得白色沉淀。将白色沉淀固体在马弗炉中煅烧，充分去除介孔中的表面活性剂及其他有机残留物，研钵中研磨，使粒子均匀分散。所用材料的配比为:CTAB 0.25-0.75g去离子水120_360mlNaOH 0.875-2.625mlTEOS 1.25-3.7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种萝卜硫素制剂，其特征在于，该制剂包含：萝卜硫素、介孔二氧化硅、脂质膜，所述介孔二氧化硅表面具有纳米级孔洞，该孔洞中载有萝卜硫素，所述脂质膜包覆在该载有萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒表面。

【技术特征摘要】
2013.04.15 CN 201310129707.81.一种萝卜硫素制剂，其特征在于，该制剂包含--萝卜硫素、介孔二氧化硅、脂质膜，所述介孔二氧化硅表面具有纳米级孔洞，该孔洞中载有萝卜硫素，所述脂质膜包覆在该载有萝卜硫素的介孔二氧化硅纳米粒表面。2.根据权利要求1所述的萝卜硫素制剂，其特征在于，所述介孔二氧化硅是由十六烷基三甲基胺溴化物和正硅酸四乙酯经反应制备而成。3.根据权利要求1所述的萝卜硫素制剂，其特征在于，所述脂质膜包含:DOPC或DOTAP, DOPE，胆固醇，18:1PEG2000-PE。4.根据权利要求1所述的萝卜硫素制剂，其特征在于，所述脂质膜表面修饰有抗体。5.根据权利要求4所述的萝卜硫素制剂，其特征在于，所述抗体靶向肿瘤细胞、和/或肿瘤干细胞。6.根据权利要求1所述的萝卜硫素制剂，其特征在于，所述制剂的粒径为100~200nmo7.权利要求1所述萝卜硫素制剂的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张国庆，钟延强，周闺臣，王新霞，王东，孙治国，鲁莹，张翮，邹豪，俞媛，陈琰，刘俊杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31