本发明专利技术公开了一种从西兰花种子中提取高纯萝卜硫素的方法，包括：⑴用干燥的西兰花种子粉碎后加水，水解得到固液混合物；⑵往该混合物中加入无水乙醇，超声浸提，抽滤或双层纱布过滤；⑶将滤液真空浓缩蒸发乙醇；⑷料液用大孔树脂柱层析，用乙醇水溶液进行梯度洗脱；⑸收集含萝卜硫素洗脱液，再用氧化铝柱层析；萝卜硫素层析液经浓缩至浸膏，获得萝卜硫素粗品；⑹将获得的粗品加水溶解,采用极性溶剂进行萃取；⑺收集有机层,再经真空浓缩至油状浸膏，即获得高纯萝卜硫素。本方法可从西兰花种子及西兰花相关材料中直接提取高纯萝卜硫素，优点是流程简单、产品稳定、设备简单、生产安全。适用于工业化提纯萝卜硫素的企业。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及提取纯化天然产物中有效成分的方法，具体而言，涉及从西兰花种子中提取高纯度萝卜硫素的方法。
技术介绍
据世界卫生组织统计，目前全球每年因癌症死亡的人数高达700万。但至今为止，人们尚未找到攻克癌症的办法。因此，研究和控制肿瘤是当今生命科学领域的重大课题。流行病学及药理学研究表明癌症发病率低的地方，人们饮食中的蔬菜、水果所占比例较大。究其原因，是蔬菜水果中存在一种或多种阻止或减缓癌症发展的活性成分，如番茄中的番茄红素、大豆制品中的大豆异黄酮、浆果中的鞣化酸以及十字花科蔬果中的萝卜硫素、吲哚类物质，均已证实具有良好的防癌抗癌作用。在众多含有抗癌活性成分的蔬菜中，十字花科(洋白菜、花茎甘蓝、球茎甘蓝、青花椰菜、芥蓝、白萝卜和高丽菜等)富含硫代葡萄糖苷(硫 甙)，其在蔬菜本身具有的黑芥子酶作用下能降解成异硫代氰酸盐类抗癌物质。萝卜硫素是属于异硫代氰酸盐中的一种，也是迄今为止蔬菜中发现的最强抗癌成分。西兰花又名绿花菜、青花菜等，为十字花科芸薹属甘蓝种中以绿色花球为产品的一个变种。研究表明，西兰花中含有丰富的萝卜硫素，能有效对抗乳腺癌和大肠癌。健康的人们经常食用西兰花也能起到预防癌症的作用。因此，西兰花被誉为“防癌新秀”。目前已有一些从西兰花中提取萝卜硫素的专利申请件，例如《一种提取萝卜硫素的方法(CN101143842)》、《一种西兰花种子提取物及其制备方法(CN101229211)》、《一种莱菔硫烷的制备方法(CN1982294)》、《一种萝卜硫素的提取方法(CN101544995)》，均公开了西兰花种子中有效活性成分萝卜硫素的提取和纯化方法。这些方法存在的问题有纯化过程中都采用硅胶柱层析，再用C18制备色谱或凝胶柱来纯化萝卜硫素，硅胶柱展开剂中使用有毒有机溶剂洗脱，生产过程还存在易燃易爆的问题，再加上柱层析材料再生较难等缺陷，导致上述专利只适合小批量及实验室制备用，不适于工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从西兰花种子中提取高纯萝卜硫素的方法，以克服现有技术不能工业化生产的缺陷，从而为将从西兰花种子中提取的萝卜硫素用于人类防治癌症打下基础。专利技术人经过系统的研究和试验后，提出的方法包括以下步骤 (1)用干燥的西兰花种子为原料，粉碎后加水；在温水中水解，得到固液混合物； (2)往水解后的固液混合物中加入无水乙醇，超声浸提，抽滤或双层纱布过滤； (3)将滤液在真空条件下浓缩蒸发乙醇； (4)将去醇后料液用同极性大孔树脂柱层析，用乙醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，选择性收集含萝卜硫素洗脱液； (5)将获得萝卜硫素洗脱液，过氧化铝干柱层析脱色，收集萝卜硫素层析液，再经真空浓缩至油状浸膏，即获得纯度为60%的萝卜硫素； (6)将上步获得纯度为60%的萝卜硫素浸膏,加水溶解后，采用有机溶剂进行萃取； (7)萃取后弃去水层，有机层进行真空浓缩，即得纯度大于90%的萝卜硫素提取物。上述步骤(I)中，所述西兰花种子粉碎至30 60目；所述加水的质量是种子粉末质量的I. 5 2倍；所述温水的温度为25°C 35°C ;所述水解时间为7 9h。上述步骤(2)中，所述加入无水乙醇的质量是固液混合物质量的8 8. 5倍；所述超声浸提时间为30 60min，超声浸提频率40kHz，功率200W。上述步骤(3)中，所述真空条件下浓缩时的真空度为-O. 06 -O.OSMPa，温度为30°C 40°C。上述步骤(4)中，所述同极性大孔树脂的型号是AB-8、DM-130, DlOl ;所述梯度洗·脱的乙醇溶液的质量分数分别为30 %、50 %、70 %。上述步骤(5)中，所述真空浓缩时的真空度为-O. 06 -O. 08MPa，温度为30°C 40。。。上述步骤￠)中，所述加水溶解的量为浸膏量的10倍量；所述有机溶剂是乙酸乙酯或二氯甲烷与乙醇按照I : I组成的混合溶剂；所述萃取次数为3次，萃取所用有机溶剂的量为水层料液的两倍量。上述步骤(7)中，所述真空浓缩时控制的真空度为-O. 06 -O. 08MPa。专利技术人指出，本专利技术的技术步骤可归纳如下西兰花种子粉碎至30 60目后加水I. 5 2倍，于25°C 35°C的温度下水解7 9h，往水解后的固液混合物中加入8 8. 5倍的无水乙醇后超声浸提30 60min，板框过滤(双层纱布)，30°C 40°C条件下真空浓缩去醇，去醇后的提取液用大孔树脂柱层析(洗脱梯度为30 %、50 %、70 %的乙醇水溶液)，收集含萝卜硫素的液体(经HPLC检测确定)，洗脱液过氧化铝干柱层析，收集层析液；经30°〇 40°C条件下真空浓缩至浸膏，获得纯度为60%的萝卜硫素，加入适量水溶解后，采用有机溶剂进行萃取，弃去水层，有机层真空浓缩，即得纯度大于90%的萝卜硫素提取物。本专利技术方法可以从西兰花种子中直接提取纯度大于90%的高纯萝卜硫素，具有工艺流程简单、产品质量稳定、使用试剂安全及生产设备简单等易工业化生产的优点。适用于以西兰花种子为原料工业化提取萝卜硫素的企业。具体实施例方式实施例I 取西兰花种子100g，粉碎至30 60目后，加水200ml ;在35°C的温度下水解8h，加入无水乙醇800ml，超声浸提30min，超声浸提频率40kHz，功率200W ;然后采用双层纱布过滤；将滤液在40°C条件下真空浓缩蒸发乙醇；采用抽滤的方式过滤至清亮，将清亮后料液150mL,用AB-8大孔树脂柱层析，用质量分数为30%的乙醇400mL除去杂质，并弃去洗脱液，再用质量分数为50%的乙醇600mL洗脱大孔树脂层析柱上的萝卜硫素，收集洗脱液，再用氧化铝柱层析，并收集萝卜硫素洗脱液，再经40°C条件下真空浓缩至油状浸膏，称取5mg的浓缩油状物用甲醇IOml溶解，再用HPLC检测，产品中萝卜硫素纯度为60%。将上步获得的纯度为60%的萝卜硫素浸膏适量水溶解后，采用乙酸乙酯进行萃取3次，弃去水层，收集有机层，并在40°C、真空-O. 08MPa条件下浓缩至油状浸膏；称取5mg的浓缩油状物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC检测，即得纯度大于90%的萝卜硫素提取物。实施例2 取西兰花种子100g，粉碎至30 60目后，加水200mL ;在35°C的温度下水解10h，加入无水乙醇800mL，超声浸提30min，超声浸提频率40kHz，功率200W ;然后采用双层纱布过滤； 将滤液在40°C条件下真空浓缩蒸发乙醇；采用抽滤的方式过滤至清亮，将清亮后料液150mL，用DM130大孔树脂柱层析，用质量分数为30%的乙醇400mL除去杂质，并弃去洗脱液，再用质量分数为50%的乙醇600mL洗脱大孔树脂层析柱上的萝卜硫素，收集洗脱液，再用氧化铝柱层析，并收集萝卜硫素洗脱液，再经40°C条件下真空浓缩至油状浸膏，称取5mg的浓缩油状物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC检测，产品中萝卜硫素纯度为60%。将上步获得60%纯度萝卜硫素浸膏适量水溶解后，采用二氯甲烷和乙醇1:1混合溶剂进行萃取3次，收集有机层，并在40°C、真空-O. 06MPa条件下浓缩至油状浸膏，称取 5mg的浓缩油状物用甲醇IOmL溶解，再用HPLC检测，即得纯度大于90%的萝卜硫素提取物。权利要求1.一种从西兰花种子中提取高纯萝卜硫本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从西兰花种子中提取高纯萝卜硫素的方法，其特征包括以下步骤：⑴？用干燥的西兰花种子为原料，粉碎后加水；在温水中水解，得到固液混合物；⑵？往水解后的固液混合物中加入无水乙醇，超声浸提，抽滤或双层纱布过滤；⑶？将滤液在真空条件下浓缩蒸发乙醇；⑷？将去醇后料液用同极性大孔树脂柱层析，用乙醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，选择性收集含萝卜硫素洗脱液；⑸？将获得萝卜硫素洗脱液，过氧化铝干柱层析脱色,收集萝卜硫素层析液，再经真空浓缩至油状浸膏，即获得纯度为60％的萝卜硫素；(6)？将上步获得纯度为60％的萝卜硫素浸膏，加水溶解后,采用有机溶剂进行萃取；(7)？萃取后弃去水层,有机层进行真空浓缩,即得纯度大于90％的萝卜硫素提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何珺，谢述琼，康冀川，杨佳年，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：
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