一种生物酶法制备肝素钠的方法技术

本发明专利技术公开了一种生物酶法制备肝素钠的方法，通过将猪肺粉碎、酶解后，进行去蛋白处理，在进行氧化脱色后利用树脂交换得肝素钠溶液，将肝素钠溶液实施沉淀、脱水、干燥得到肝素钠精品。本发明专利技术原料来源广泛，通用性强，活性收率高，工艺品质稳定，生产成本低廉，实现肝素钠的低投入、低成本、高回收率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及粘多糖生物制药领域，尤其涉及。
技术介绍
肝素钠(Heparin Sodium)肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药。肝素钠是由猪或牛的粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。近年来研究证明肝素钠还有降血脂作用。目前市面上肝素钠提取工艺种类繁多，不过多数采用猪肠来制备，但猪肺中肝素含量大大超过了猪肠，现需要提供一种以猪肺为原料生产成本低廉，工艺简单的制备肝素钠的方法。
技术实现思路
基本
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种制备肝素钠的方法，原料来源广泛，通用性强，活性收率高，工艺品质稳定，生产成本低廉，实现肝素钠的低投入、低成本、高回收率。本专利技术提出的，包括如下步骤:S1、将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1: 1-2;S2、向猪肺混合液中加入0.2-0.5mol/L的氢氧化钠溶液使PH达到8_9，加入以猪肺混合液为基准0.8-1.0被％猪胰中提取的胰蛋白酶，在室温下以85-95rpm的搅拌速度搅拌70-75min得到一次酶解混合液，然后将一次酶解混合液以2_3°C /min的升温速率升至35-39°C并以30-40rpm的搅拌速度搅拌240_300min得到二次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为7.0-8.5 ； S3、将二次酶解混合液以1-2°C /min的升温速率升至61-65°C并以30_40rpm的搅拌速度搅拌150-180min得到三次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为8.2-8.7 ；S4、向三次酶解混合液加入0.1-0.2mol/L的盐酸，使液体PH值为4.3-5.4，将温度升至82-84°C并以70-80rpm的搅拌速度搅拌7_12min，再加入以三次酶解混合液为基准2-4wt%硫酸钠晶体后，维持温度为84-85°C并以65_75rpm的搅拌速度搅拌10_15min得到酶失活混合液；S5、将酶失活混合液在75_80°C时进行一次过滤得到一次滤液，待一次滤液冷却至36°C时，用0.2-0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9_10进行二次过滤后，再滴加0.l-ο.2mol/L的盐酸使PH值为8.2-8.7得到二次滤液；S6、将二次滤液冷却至室温，以50-60rpm的搅拌速度搅拌5_10min后静置30-40min以进行分层，吸取分层后的下层溶液，将下层溶液升温至55_65°C，加入以下层溶液为基准3.5-4wt% D217树脂，以45_50rpm的搅拌速度搅拌3_3.6h后静置l_2h得到含吸附肝素钠成分D217树脂混合液；S7、将含吸附肝素钠成分D217树脂混合液过滤后得到吸附肝素钠成分的D217树月旨，将吸附肝素钠成分的D217树脂充分清洗后，用以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准120-140Wt%硫酸钠溶液进行一次洗脱得到一次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9-1.1mol/L,洗脱时间为4-6h，再以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准40-50wt %进行二次洗脱得到二次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9-1.lmol/L，洗脱时间为l_2h，将一次洗脱液和二次洗脱液混合，用0.02-0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9.5-9.7，以20_25rpm的搅拌速度搅拌2-4h后静置5-6h，分层后吸取上层溶液得到物料A ；S8、向物料A中滴加0.1-0.2mol/L的盐酸使PH值为6.0-6.5，加入以物料A为基准120-130wt%乙醇搅拌20-30min，乙醇体积百分比为95%，静置7_8h进行分层，再次吸取上次溶液，真空烘干得到物料B ;S9、将物料B用浓度为0.2-0.4mol/L的硫酸钠溶液完全溶解，加入0.5-0.7mol/L氢氧化钠溶液调节PH至10.5-11.5，加入以物料B为基准0.1-0.2wt%双氧水，将温度维持在24-260C 10-15h，过滤后加入0.5-0.7mol/L氢氧化钠溶液调节PH至10.5-11.5，以30-40rpm的搅拌速度搅拌0.5-0.6h后加入以物料B为基准0.2-0.3wt%双氧水，将温度维持在23-24°C，保温14-15h，过滤后滴加0.03-0.07mol/L的盐酸调节PH为6.7-7.2，得到二次氧化液，其中双氧水浓度为3-4% ；S10、向二次氧化液加入以二次氧化液为基准180_200wt%，乙醇的体积百分比为35%，在3-4 °C沉淀36-40h，过滤后收集一次过滤物，加入以二次氧化液为基准0.2-0.5wt%硫酸钠溶液溶解，硫酸钠溶液的浓度为8-10%，再加入以二次氧化液为基准120-150wt%乙醇进行沉淀，乙醇的体积百分比为95%，过滤后收集二次过滤物，过滤物脱水、研细后，在35-45°C下真空烘干，即得肝素钠精品。优选的，SlO中 真空烘干为红外真空烘干。优选的，S9中，将物料B用浓度为0.3mol/L的硫酸钠溶液完全溶解，加入0.6mol/L氢氧化钠溶液调节PH至11，加入以物料B为基准0.15wt %双氧水，将温度维持在250C 13h，过滤后加入0.6mol/L氢氧化钠溶液调节PH至11，以35rpm的搅拌速度搅拌0.55h后加入以物料B为基准0.23wt%双氧水，将温度维持在23.5°C，保温14.5h，过滤后滴加0.05mol/L的盐酸调节PH为7，得到二次氧化液，其中双氧水浓度为35%。本专利技术通过采用对猪肺进行酶解生产，使原料来源广泛，通用性强，再通过氧化脱色后利用树脂交换得肝素钠溶液，其中采用D217树脂，可有效吸附高分子有机物，吸附稳定，不易破碎，降低生产成本，再将肝素钠溶液实施沉淀、脱水、干燥得到肝素钠精品，活性收率高，工艺品质稳定，生产成本低廉，实现肝素钠的低投入、低成本、高回收率。【具体实施方式】下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1本专利技术提出的，包括如下步骤:S1、将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1: 2;S2、向猪肺混合液中加入0.2mol/L的氢氧化钠溶液使PH达到9，加入以猪肺混合液为基准0.8wt %猪胰中提取的胰蛋白酶，在室温下以95rpm的搅拌速度搅拌70min得到一次酶解混合液，然后将一次酶解混合液以3°C /min的升温速率升至35°C并以40rpm的搅拌速度搅拌240min得到二次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为8.5 ； S3、将二次酶解混合液以1°C /min的升温速率升至65°C并以30rpm的搅拌速度搅拌180min得到三次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为8.2 ；S4、向三次酶解混合液加入0.2mol/L的盐酸，使液体PH值为4.3，将温度升至84°C并以70rpm的搅拌速度搅拌12min，再加入以三次酶解混合液为基准2wt%硫酸钠晶体后，维持温度为85°C并以65rpm的搅拌速度搅拌15min得到酶失活混合液；S5、将酶失活混合液在75°C时进行一次过滤得到一次滤液，待一次滤液冷却至36°C时，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9进行二次过滤后，再滴加0.2mol/L的盐酸使PH值为8.2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物酶法制备肝素钠的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1∶1‑2；S2、向猪肺混合液中加入0.2‑0.5mol/L的氢氧化钠溶液使PH达到8‑9，加入以猪肺混合液为基准0.8‑1.0wt％猪胰中提取的胰蛋白酶，在室温下以85‑95rpm的搅拌速度搅拌70‑75min得到一次酶解混合液，然后将一次酶解混合液以2‑3℃/min的升温速率升至35‑39℃并以30‑40rpm的搅拌速度搅拌240‑300min得到二次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为7.0‑8.5；S3、将二次酶解混合液以1‑2℃/min的升温速率升至61‑65℃并以30‑40rpm的搅拌速度搅拌150‑180min得到三次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为8.2‑8.7；S4、向三次酶解混合液加入0.1‑0.2mol/L的盐酸，使液体PH值为4.3‑5.4，将温度升至82‑84℃并以70‑80rpm的搅拌速度搅拌7‑12min，再加入以三次酶解混合液为基准2‑4wt％硫酸钠晶体后，维持温度为84‑85℃并以65‑75rpm的搅拌速度搅拌10‑15min得到酶失活混合液；S5、将酶失活混合液在75‑80℃时进行一次过滤得到一次滤液，待一次滤液冷却至36℃时，用0.2‑0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9‑10进行二次过滤后，再滴加0.1‑0.2mol/L的盐酸使PH值为8.2‑8.7得到二次滤液；S6、将二次滤液冷却至室温，以50‑60rpm的搅拌速度搅拌5‑10min后静置30‑40min以进行分层，吸取分层后的下层溶液，将下层溶液升温至55‑65℃，加入以下层溶液为基准3.5‑4wt％D217树脂，以45‑50rpm的搅拌速度搅拌3‑3.6h后静置1‑2h得到含吸附肝素钠成分D217树脂混合液；S7、将含吸附肝素钠成分D217树脂混合液过滤后得到吸附肝素钠成分的D217树脂，将吸附肝素钠成分的D217树脂充分清洗后，用以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准120‑140wt％硫酸钠溶液进行一次洗脱得到一次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9‑1.1mol/L，洗脱时间为4‑6h，再以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准40‑50wt％进行二次洗脱得到二次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9‑1.1mol/L，洗脱时间为1‑2h，将一次洗脱液和二次洗脱液混合，用0.02‑0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9.5‑9.7，以20‑25rpm的搅拌速度搅拌2‑4h后静置5‑6h，分层后吸取上层溶液得到物料A；S8、向物料A中滴加0.1‑0.2mol/L的盐酸使PH值为6.0‑6.5，加入以物料A为基准120‑130wt％乙醇搅拌20‑30min，乙醇体积百分比为95％，静置7‑8h进行分层，再次吸取上次溶液，真空烘干得到物料B；S9、将物料B用浓度为0.2‑0.4mol/L的硫酸钠溶液完全溶解，加入0.5‑0.7mol/L氢氧化钠溶液调节PH至10.5‑11.5，加入以物料B为基准0.1‑0.2wt％双氧水，将温度维持在24‑26℃10‑15h，过滤后加入0.5‑0.7mol/L氢氧化钠溶液调节PH至10.5‑11.5，以30‑40rpm的搅拌速度搅拌0.5‑0.6h后加入以物料B为基准0.2‑0.3wt％双氧水，将温度维持在23‑24℃，保温14‑15h，过滤后滴加0.03‑0.07mol/L的盐酸调节PH为6.7‑7.2，得到二次氧化液，其中双氧水浓度为3‑4％；S10、向二次氧化液加入以二次氧化液为基准180‑200wt％，乙醇的体积百分比为35％，在3‑4℃沉淀36‑40h，过滤后收集一次过滤物，加入以二次氧化液为基准0.2‑0.5wt％硫酸钠溶液溶解，硫酸钠溶液的浓度为8‑10％，再加入以二次氧化液为基准120‑150wt％乙醇进行沉淀，乙醇的体积百分比为95％，过滤后收集二次过滤物，过滤物脱水、研细后，在35‑45℃下真空烘干，即得肝素钠精品。...

【技术特征摘要】
1.一种生物酶法制备肝素钠的方法，其特征在于，包括如下步骤: S1、将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1: 1-2; S2、向猪肺混合液中加入0.2-0.5mol/L的氢氧化钠溶液使PH达到8_9，加入以猪肺混合液为基准0.8-1.0被％猪胰中提取的胰蛋白酶，在室温下以85-95rpm的搅拌速度搅拌70-75min得到一次酶解混合液，然后将一次酶解混合液以2_3°C /min的升温速率升至.35-39°C并以30-40rpm的搅拌速度搅拌240_300min得到二次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为7.0-8.5 ； S3、将二次酶解混合液以1-2°C/min的升温速率升至61_65°C并以30_40rpm的搅拌速度搅拌150-180min得到三次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体PH值为8.2-8.7 ； S4、向三次酶解混合液加入0.1-0.2mol/L的盐酸，使液体PH值为4.3-5.4，将温度升至..82-84°C并以70-80rpm的搅拌速度搅拌7_12min，再加入以三次酶解混合液为基准2_4wt%硫酸钠晶体后，维持温度为84-85°C并以65-75rpm的搅拌速度搅拌10_15min得到酶失活混合液； S5、将酶失活混合液在75-80°C时进行一次过滤得到一次滤液，待一次滤液冷却至.36 0C时，用0.2-0.5 mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值为9_10进行二次过滤后，再滴加.0.1-0.2mol/L的盐酸使PH值为8.2-8.7得到二次滤液； S6、将二次滤液冷却至室温，以50-60rpm的搅拌速度搅拌5_10min后静置30_40min以进行分层，吸取分层后的下层溶液，将下层溶液升温至55-65°C，加入以下层溶液为基准.3.5-4wt% D217树脂，以45_50rpm的搅拌速度搅拌3_3.6h后静置l_2h得到含吸附肝素钠成分D217树脂混合液； S7、将含吸附肝素钠成分D217树脂混合液过滤后得到吸附肝素钠成分的D217树月旨，将吸附肝素钠成分的D217树脂充分清洗后，用以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准.120-140Wt%硫酸钠溶液进行一次洗脱得到一次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9-1.1mol/L,洗脱时间为4-6h，再以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准40-50wt%进行二次洗脱得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵厚发，徐宾朋，郭庆，
申请(专利权)人：安徽科宝生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34