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一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针及其应用制造技术

技术编号:10230752 阅读:195 留言:0更新日期:2014-07-18 05:22
本发明专利技术涉及一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针及其应用。所述的荧光探针具有分子通式为BDP-NO或BDP-NO-T,BDP-NO的结构通式如(Ⅰ)所示。本发明专利技术的荧光探针能够快速的定位于线粒体中,并能够对其中的一氧化氮进行原位实时的检测,另外,该探针还具有较好的化学、光稳定性,较好的溶解性和生物兼容性,较高的一氧化氮选择性,不受其他活性氧和活性氮等物种的干扰。激光共聚焦成像实验表明这类探针具有较好的细胞通透性,对细胞和生物体无明显的毒副作用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针及其应用。所述的荧光探针具有分子通式为BDP-NO或BDP-NO-T,BDP-NO的结构通式如(Ⅰ)所示。本专利技术的荧光探针能够快速的定位于线粒体中,并能够对其中的一氧化氮进行原位实时的检测,另外,该探针还具有较好的化学、光稳定性,较好的溶解性和生物兼容性,较高的一氧化氮选择性,不受其他活性氧和活性氮等物种的干扰。激光共聚焦成像实验表明这类探针具有较好的细胞通透性,对细胞和生物体无明显的毒副作用。【专利说明】一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针及其应用
本专利技术涉及一类可定位于线粒体,并检测线粒体中一氧化氮的荧光探针。
技术介绍
一氧化氮在生命科学中扮演重要角色,是一个重要的信使分子。自20世纪80年代,科学家们发现在生物体生命活动中会产生一氧化氮分子。一氧化氮不仅具有免疫调节、神经传递、血压生理调控和血小板凝聚的抑制等生理功能,而且还与很多疾病,包括基因突变、癌变、动脉硬化等疾病密切相关。然而,生物体中产生的一氧化氮由于其生成量较少并且半衰期较短,对其进行实时、原位、定量的检测,将有助于我们进一步了解一氧化氮的生理功能,有助于了解某些疾病的致病原因,并最终找到合适的治疗方法。生命体中的一氧化氮主要由处于线粒体中的一氧化氮合成酶生成,线粒体中的一氧化氮对于心脑血管系统、免疫系统以及神经系统具有非常重要的调节作用。目前对一氧化氮进行检测的荧光探针种类很多,例如商品化的一氧化氮探针DAF-FM(InvitrogenTM),但是所有的这些探针都不具有线粒体定位功能,更无法实现对线粒体中所产生的一氧化氮进行检测。为了实现对线粒体中产生的一氧化氮进行实时原位的检测,急需开发具有线粒体定位功能的一氧化氮荧光探针。
技术实现思路
为了解决以上问题,本专利技术提供一种可以检测线粒体中一氧化氮的高灵敏度荧光探针。本专利技术采用的技术方案是:一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,所述的荧光探针的分子通式是BDP-NO或BDP-NO-T,BDP-NO的结构通式如(I )所示,BDP-NO-T的结构通式如(II )所示:【权利要求】1.一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,其特征在于:所述的荧光探针的分子通式是BDP-NO或BDP-NO-T,BDP-NO的结构通式如(I )所示,BDP-NO-T的结构通式如(II )所示: 2.如权利要求1所述的检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,其特征在于:所述的BDP-NO荧光探针的制备方法包括如下步骤:将3-硝基-4-氨基苯酚和氟硼吡咯类化合物加入到四氢呋喃中,再加入KI和碳酸钾,加热回流反应22-26小时,除去溶剂,用二氯甲烷或甲醇为洗脱剂进行硅胶柱层析,得到中间产物;将中间产物溶于四氢呋喃和甲醇的混合液中,在还原剂存在下,反应4-24小时,得到目标产物BDP-NO ;或者,在2.5MPa的氢气和催化剂催化下,反应4-24小时,得到目标产物BDP-N0。3.如权利要求2所述的检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,其特征在于:所述的催化剂为钯碳或雷尼镍;所述的还原剂为铁粉和盐酸的混合物,或氯化亚锡和盐酸的混合物。4.如权利要求1所述的检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,其特征在于:所述的BDP-NO-T的制备方法包括如下步骤:将BDP-NO溶于甲醇和水的混合液中,加入饱和一氧化氮水溶液,室温搅拌20-40分钟,以二氯甲烷或甲醇为洗脱剂,经硅胶柱层析,得到目标产物 BDP-NO-T。5.如权利要求1所述的检测线粒体中一氧化氮的荧光探针在检测生理体系中一氧化氮的应用。6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,荧光探针在检测活细胞线粒体中一氧化氮的应用。7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的活细胞为Hela细胞株、MCF-7细胞株、或RAW264.7细胞株。8.如权利要求6或7所述的应用,其特征在于方法如下:取浓度为0.05-0.1M的BDP-NO的二甲基亚砜溶液,加入到含有活细胞线粒体的培养皿中,与细胞培养液混合均匀后,使BDP-NO在培养液中的终浓度达到l_50uM,将该培养皿置于培养箱中培养12-24小时,分别取上清液和细胞进行检测。【文档编号】C09K11/06GK103923641SQ201410189357【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年5月6日 优先权日:2014年5月6日 【专利技术者】于海波, 宋有涛, 李红玲, 王杰琼, 王宁, 曹珍 申请人:辽宁大学本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针,其特征在于:所述的荧光探针的分子通式是BDP‑NO或BDP‑NO‑T,BDP‑NO的结构通式如(Ⅰ)所示,BDP‑NO‑T的结构通式如(Ⅱ)所示:其中,R1=‑H、‑CH2CH3、‑COOC2H5、‑COOCH3、‑COOCH(CH3)3、‑COOCH2Ph、‑COOH、‑CH2CH2COOCH3、‑CH2CH2COOCH2Ph、‑CH2CH2COOCH(CH3)3、‑CH2CH2COOC2H5、或‑CH2CH2COOH。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:于海波宋有涛李红玲王杰琼王宁曹珍
申请(专利权)人:辽宁大学
类型:发明
国别省市:辽宁;21

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