一种弱背景荧光的树脂包埋方法技术

本发明专利技术公开了一种弱背景荧光的树脂包埋方法，属于生物工程技术领域。该方法采用溶解了苏丹黑B的树脂溶液作为染色包埋液来渗透包埋荧光生物样品。该方法所得生物样品在保持荧光信号强度的前提下，背景荧光大大降低。本方法能适用于厘米尺寸的大样本，所得生物样品能用于连续超薄切片。本发明专利技术方法成本低廉，操作步骤简单，适合在一般实验室推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种弱背景荧光的树脂包埋方法
本专利技术属于生物工程
，特别涉及一种弱背景荧光的树脂包埋方法。
技术介绍
现代生物学面临的巨大挑战是理解跨度范围从细胞到组织到器官甚至到完整生物体的结构和功能。传统的落射式荧光显微成像由于景深和背景荧光的影响，只能对几十微米的薄切片进行成像。将这种块面成像方法与连续机械薄切片结合起来，能成功地对厘米级大尺寸生物样品进行快速三维成像。通常，为了保证生物样品能进行连续薄切片，需要采用树脂对其进行包埋。然而，该技术虽然解决了成像景深的问题，但仍然存在背景荧光干扰的问题。大尺寸生物样品存在组织自发荧光和焦面外的信号荧光导致的背景荧光干扰，而在样品包埋的过程中会进一步提高背景荧光。这种强烈的背景荧光干扰往往使得焦面上的细节信息被湮没。因此，专利技术一种弱背景荧光的树脂包埋方法具有非常重要的意义。目前，有研究者通过在树脂中掺入不透明剂的方法减少树脂包埋样本的背景荧光，如文献“SurfaceImagingMicroscopy,anAutomatedMethodforVisualizingWholeEmbryoSamplesinThreeDimensionsat本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种弱背景荧光的树脂包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将生物样品用冰水预冷却的质量百分比为4%的多聚甲醛溶液固定6～24h；（2）将步骤（1）得到的生物样品用冰水预冷却的浓度为0.01mol/L的PBS漂洗液清洗3～24h，其间更换新鲜漂洗液3～5次；（3）将步骤（2）得到的生物样品依次放入冰水预冷却的质量百分比为50%、70%和95%的乙醇溶液中进行梯度脱水，每次15min～2h；（4）将步骤（3）得到的生物样品依次放入质量百分比为70%、85%和100%的乙二醇甲基丙烯酸酯水溶性包埋液（GMA）中进行梯度渗透，每个梯度1～3h，随后再次放入新鲜的质量百分比为100%的GMA水溶性包...

【技术特征摘要】
1.一种弱背景荧光的树脂包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将生物样品用冰水预冷却的质量百分比为4％的多聚甲醛溶液固定6～24h；(2)将步骤(1)得到的生物样品用冰水预冷却的浓度为0.01mol/L的PBS漂洗液清洗3～24h，其间更换新鲜漂洗液3～5次；(3)将步骤(2)得到的生物样品依次放入冰水预冷却的质量百分比为50％、70％和95％的乙醇溶液中进行梯度脱水，每次15min～2h；(4)将步骤(3)得到的生物样品依次放入质量百分比为70％、85％和100％的乙二醇甲基丙烯酸酯水溶性包埋液(GMA)中进行梯度渗透，每个梯度1～3h，随后再次放入新鲜的质量百分比为100％的GMA水溶性包埋液中渗透6～12h；(5)将步骤(4)得到的生物样品放入苏丹黑B染色包埋液中渗透1～4天；(6)将步骤(5)得到的生物样品放入包埋模具中，包埋模具中充满苏丹黑B染色包埋液，然后在45～50℃下隔氧聚合12～60h；其中，所述步骤(4)中质量百分比为100％的GMA水溶性包埋液由质量百...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚辉，骆清铭，胡碧荷，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42