一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法技术

一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，包括眼柄横截面的研磨以及生长纹观测和计数的方法，主要步骤为提取、清洗、保存、去脂、树脂包埋、切割、固定、打磨、抛光、图片制作和生长纹计数等过程；对眼柄的横截面进行打磨，即由眼柄的基部和末端分别向眼柄中部研磨成薄片；制作好的切片用CCD拍照，以保证今后随时可以读取生长纹；生长纹由眼柄内侧向外侧计数；解决眼柄不易研磨，研磨易脱落以及生长纹不易观察和计数的问题。

A method for the identification of eyestalk crustaceans age

A method of using the age identification of crustacean eyestalk, including grinding eyestalk cross-section and method of observation and counting the growth pattern, the main steps of extraction, cleaning, degreasing, preservation, resin process of embedding, cutting, grinding, polishing, fixed, and picture production growth pattern count; polished cross section of eyestalk that is, the base and the end of eyestalk respectively to the central eyestalk milled into sheets; making good sections with a CCD camera, to ensure that future growth patterns can be read at any time; the growth pattern from the inside to the outside of eyestalk count; solve the eyestalk not easy grinding, grinding and easy to fall off the growth pattern is not easy to observe and count the problem.

【技术实现步骤摘要】
一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法
本专利技术属于水产学领域，尤其涉及一种虾蟹类眼柄生长纹观测方法。
技术介绍
虾蟹类隶属于节肢动物门、甲壳纲、十足目，绝大多数种类寿命在1～10岁之间，它是是重要的海洋经济种类，广泛分布于世界各大洋和南、北极等海域。年龄鉴定作为虾蟹类渔业生物学和生态学的重点内容，一直以来受到国内外学者广泛关注。然而，虾蟹类与鱼类、头足类等其它海洋经济动物不一样，缺少直接鉴定其年龄的方法。对于鱼类和头足类来说，它们的生长记录在耳石、鳍条、角质颚等硬组织上，人们可通过对这些硬组织生长纹的计数来确定它们的年龄。然而，虾蟹类的生长与鱼类和头足类等不同，它们是脱壳时生长，因此每次脱壳时原先的硬壳被新的所替代。现有的技术通过实验室饲养、标记回捕等方法来获取虾蟹类的年龄，这一方面实验周期长，另一方面无法直接获取野外样本的年龄。本方法通过直接读取眼柄生长纹数目来鉴定虾蟹类的年龄，为直接鉴定虾蟹年龄提供了一个新方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，该方法利用形态稳定、容易提取、研磨方便的眼柄来鉴定虾蟹类的年龄，包括虾蟹类眼柄切片的制作步骤和眼柄生长纹的观察与计数步骤。本专利技术的技术方案如下：一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)剪裁：取出眼柄，将眼柄基部剪平，同时将眼柄末端的眼球剪除；(2)包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液充满中空的眼柄，并覆盖模具，然后放置室温避光处待其硬化；(3)切割：将包埋硬化后的树脂沿眼柄的横截面切割成树脂薄片；(4)固定：将所述树脂薄片眼柄末端朝下，固定在载玻片上；(5)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片眼柄基部打磨，先粗磨至眼柄基部表面，再细磨至眼柄基部，以研磨平面完全磨到眼柄基部为准；(6)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片眼柄基部的研磨；(7)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后由眼柄末端向基部先粗磨、再细磨直至横截面的生长纹清晰可见，最后再抛光得到眼柄切片；(8)生长纹观察：由眼柄内侧向外侧计数生长纹的数目。根据本专利技术所述利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，在步骤(4)中也可将眼柄基部朝下粘于载玻片上，然后由眼柄末端向基部打磨、抛光和实施后续步骤。根据本专利技术所述利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，优选的是，在步骤(1)剪裁之前对眼柄进行预处理，包括如下步骤：(1)提取：用手术剪刀剪取虾蟹类的1对眼柄；(2)清洗：用清水将眼柄表面清洗干净；(3)去除有机质：将清洗干净的眼柄放入清水中煮沸5分钟，然后用解剖针和尖头镊子将眼柄内部的肌肉和结缔组织剔除；(4)保存：将经步骤(3)处理的眼柄放入75％的酒精中保存。根据本专利技术所述利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，优选的是，在所述步骤(8)中的生长纹计数步骤为：(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水；在连接有CCD的显微镜400×倍下对眼柄的生长纹进行拍照，用图像处理软件对所拍的图片分别进行拼图处理；(2)生长纹计数：对400×倍下采集的图像由眼柄内侧向外侧计数生长纹数目。本专利技术还提供一种虾蟹类眼柄切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)剪裁：取出眼柄，将眼柄基部剪平，同时将眼柄末端的眼球剪除；(2)包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂(粘度为60mPas，采购于深圳市三昊仪器设备有限公司)配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液充满中空的眼柄，并覆盖模具，然后放置室温避光处待其硬化；(3)切割：将包埋硬化后的树脂沿眼柄的横截面切割成树脂薄片；(4)固定：将所述树脂薄片(眼柄末端朝下)固定在载玻片上；(5)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片(眼柄基部)打磨，先粗磨至眼柄基部表面，再细磨至眼柄基部(以研磨平面完全磨到眼柄基部为准)；(6)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片(眼柄基部)的研磨；(7)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后由眼柄末端向基部先粗磨、再细磨直至横截面的生长纹清晰可见，最后再抛光得到眼柄切片。根据本专利技术提供所述虾蟹类眼柄切片的制作方法，优选的是，在步骤(1)剪裁之前对眼柄进行预处理步骤为，包括如下步骤：(1)提取：用手术剪刀剪取虾蟹类的1对眼柄；(2)清洗：用清水将眼柄表面清晰干净；(3)去除有机质：将清晰干净的眼柄放入清水中煮沸5分钟，然后用解剖针和尖头镊子等将眼柄内部的肌肉和结缔组织剔除。根据本专利技术提供所述虾蟹类眼柄切片的制作方法，优选的是，在所述步骤(1)中的裁剪要将眼柄基部剪平，同时末端的眼球部分必须剪除；在所述步骤(2)中所述包埋时使树脂充满中空的眼柄；在所述步骤(4)中也可将眼柄基部朝下粘于载玻片上，然后由眼柄末端向基部打磨、抛光和实施后续步骤。本专利技术还提供一种虾蟹类眼柄生长纹的观察与计数方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水；在连接有CCD的显微镜400×倍下对眼柄的生长纹进行拍照，用图像处理软件对所拍的图片分别进行拼图处理；(2)生长纹计数：对400×倍下采集的图像由眼柄内侧向外侧计数生长纹数目。作为本专利技术第二方面的一种虾蟹类切片的制作方法，是通过如下技术方案来实现的：(1)提取：用手术剪刀将眼窝内的眼柄取出；(2)清洗：取出后的眼柄用清水清洗其表面的粘液及其它有机物；(3)去除有机质：将清晰干净的眼柄放入清水中煮沸5分钟，然后用解剖针和尖头镊子等将眼柄内部的肌肉和结缔组织剔除；(4)保存：处理好的眼柄，放入离心管中，加入重量百分比浓度为75％的酒精浸泡保存；(5)裁剪：取出保存的眼柄，用手术剪刀将眼柄基部剪平，同时将眼柄末端的眼球剪除；(6)包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液充满中空的眼柄，并覆盖模具，然后放置室温避光处待其硬化；(7)切割：将包埋硬化后的树脂沿眼柄的横截面切割成2-3mm树脂薄片，并使研磨面平行于眼柄的切割面；(8)固定：将所述树脂薄片(眼柄末端朝下)用强力速粘胶粘在载玻片上；(9)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片(眼柄基部)打磨，研磨过程中，先用240水磨砂纸粗磨至眼柄基部表面，再用600、1200、2000水磨砂纸细磨，并随时在光学显微镜下观察其研磨程度，直至眼柄基部(以研磨平面完全磨到眼柄基部为准)；(10)抛光：以0.05μm氧化铝剂加水在绒布抛光研磨面，除去水磨砂纸造成的表面划痕以及多余的杂质，如此完成眼柄基部的研磨；(11)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后由眼柄末端向基部重复上述的研磨和抛光过程直至横截面的生长纹清晰可见。作为本专利技术第三方面的一种虾蟹类眼柄生长纹的观察与计数方法，是通过如下技术方案来实现的：(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上一滴清水(增加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)剪裁：取出眼柄，将眼柄基部剪平，同时将眼柄末端的眼球剪除；(2)包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液充满中空的眼柄，并覆盖模具，然后放置室温避光处待其硬化；(3)切割：将包埋硬化后的树脂沿眼柄的横截面切割成树脂薄片；(4)固定：将所述树脂薄片眼柄末端朝下固定在载玻片上；(5)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片眼柄基部打磨，先粗磨至眼柄基部表面，再细磨至眼柄基部，以研磨平面完全磨到眼柄基部为准；(6)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片眼柄基部的研磨；(7)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后由眼柄末端向基部先粗磨、再细磨直至横截面的生长纹清晰可见，最后再抛光得到眼柄切片；(8)生长纹观察：由眼柄内侧向外侧计数生长纹的数目。

【技术特征摘要】
1.一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)剪裁：取出眼柄，将眼柄基部剪平，同时将眼柄末端的眼球剪除；(2)包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液充满中空的眼柄，并覆盖模具，然后放置室温避光处待其硬化；(3)切割：将包埋硬化后的树脂沿眼柄的横截面切割成树脂薄片；(4)固定：将所述树脂薄片眼柄末端朝下固定在载玻片上；(5)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片眼柄基部打磨，先粗磨至眼柄基部表面，再细磨至眼柄基部，以研磨平面完全磨到眼柄基部为准；(6)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片眼柄基部的研磨；(7)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后由眼柄末端向基部先粗磨、再细磨直至横截面的生长纹清晰可见，最后再抛光得到眼柄切片；(8)生长纹观察：由眼柄内侧向外侧计数生长纹的数目。2.根据权利要求1所述的一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于，在所述步骤(1)剪裁之前对眼柄进行预处理，步骤为：(1)提取：用手术剪刀剪取虾蟹类的1对眼柄；(2)清洗：用清水将眼柄表面清洗干净；(3)去除有机质：将清洗干净的眼柄放入清水中煮沸5分钟，然后用解剖针和尖头镊子将眼柄内部的肌肉和结缔组织剔除；(4)保存：将步骤(3)的眼柄放入75％的酒精中保存。3.根据权利要求1所述的一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于步骤(4)中将眼柄基部朝下粘于载玻片上，然后由眼柄末端向基部打磨、抛光和实施后续步骤。4.根据权利要求1所述的一种利用眼柄鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于所述步骤(8)中的生长纹计数步骤为：(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水；在连接有CCD的显微镜400×倍下对眼柄的生长纹进行拍照，用图像处理软件对所拍的图片分别进行拼图处理；(2)生长纹计数：对400×倍下...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘必林，陈新军，蒋瑞，张健，李建华，林静远，舒畅，侯明磊，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31