草乌粗提物及有效成分的制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种草乌粗提物及从中分离得到的化合物neoechinulinA在抗植物病毒中的应用，本发明专利技术所述的草乌粗提物是以干燥草乌(AconitumcarmichaeliDebx.)为原料，粉碎过筛后以浓度为70~95%的乙醇浸泡，浸泡液经减压浓缩得到乙醇浸膏，加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水层，所得的各种萃取液减压浓缩得到的相应浸膏，化合物neoechinulinA是通过活性跟踪从草乌乙酸乙酯层中分离得到，草乌粗提物和化合物neoechinulinA对黄瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病、南方水稻黑条矮缩病毒病和水稻条纹叶枯病毒等植物病毒有较好的防治作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种草乌粗提物及从中分离得到的化合物neoechinulin A在抗植物病毒中的应用，属于植物保护中植物源农药领域。
技术介绍
近年来，植物病毒病的危害日益严重，给农业生产带造成了巨大的经济损失，据报道，每年仅因黄瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病、水稻条纹叶枯病毒和南方水稻黑条矮缩病毒病等烟草花叶病毒病造成的损失就高达1亿多美元。目前对于病毒病的防治还没有非常有效的方法，已有的防治农作物病毒病的商品药品种少，防治效果也不够理想。研究发现，很多天然植物中含有的化学成分具有高效、低毒的特点，从植物中寻找具有较高活性的先导化合物已成为开发植物病毒抑制剂的重要途径之一。草乌为毛茛科植物乌头的干燥块根，别名：五毒根、断肠草、鸭头、药羊蒿、鸡头草、百步草。草乌的植物基源较多，包括北乌头(Aconitum kusnezoffii Reichb)、乌头(Aconitum Carmichaeli Debx.)、华乌头(Aconitum Chinense Paxt)、黄草乌(Aconitum Vilmorinianum Kowar)、紫草乌(Aconitum Delavyl Franch)等的块根，主要为野生品种。乌头属植物约有350种，主要分布于亚洲、欧洲和北美洲，我国大约有167种，大部分分布在云南北部、四川西部、西藏东部的高山地带。根据文献报道，草乌主要含有的化学成分为生物碱、黄酮、甾醇、挥发油等，其中以二萜生物碱居多。2013年，黄烈军等报道了从岩乌头(Aconitum recemulosum Franch)中分离得到的13个二萜生物碱的抗烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)活性，在浓度为30 μg/mL时，化合物racemulosine A、sachaconitine、circinasine A、talatisamine、8-decetylyunaconitine和14-acetytalatisamine的抗TMV活性均优于阳性对照药剂宁南霉素，化合物racemulosine A、sachaconitine、circinasine A和14-acetytalatisamine的抗TMV侵染活性尤其显著，抑制率在60%以上；化合物racemulosine A和talatisamine对TMV增殖的抑制活性明显比阳性对照药好。(黄烈军，葛永辉，刘开兴，张建新，郝晓江，岩乌头的化学成分及对烟草花叶病毒病的活性，农药，2013, 52(4), 295-297.)这说明乌头属植物在抗植物病毒方面具有很大的研究发展空间。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供草乌粗提物和化合物neoechinulin A的制备和应用。本专利技术的专利技术人在研究中发现草乌粗提物对植物病毒病如黄瓜花叶病毒病、水稻条纹叶枯病毒和南方水稻黑条矮缩病毒病等具有较好抑制作用，通过活性跟踪对草乌粗提物进行分离，从乙酸乙酯层分离得到对植物病毒病具有较好抑制作用的化合物neoechinulin A。本专利技术所述的草乌粗提物包括草乌总浸膏、草乌石油醚层提取物、草乌乙酸乙酯层提取物、草乌正丁醇层提取物和草乌水层提取物，其特征在于以干燥草乌(Aconitum carmichaeli Debx.)为原料，粉碎过筛后以浓度为70~95%的乙醇浸泡，浸泡液经减压浓缩，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，称为草乌总浸膏，再将乙醇浸膏加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水层，所得各种萃取液减压浓缩得到相应浸膏，分别称为草乌石油醚层提取物，草乌乙酸乙酯层提取物，草乌正丁醇层提取物，草乌水层提取物，加上草乌总浸膏，统称草乌粗提物。取乙酸乙酯层浸膏用乙酸乙酯溶解，100~200目硅胶拌样，200~300目硅胶装柱，用中压柱层析分离，以石油醚:乙酸乙酯=1:0~0:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，TLC点板跟踪，收集相同极性的洗脱液，得Fr 2-1至Fr 2-6 6个组分。其中Fr 2-4用100~200目硅胶拌样，200~300目硅胶装柱，常压柱层析分离，以二氯甲烷:甲醇=1:0~1:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，得到化合物neoechinulin A，结构式如下： 。本专利技术草乌粗提物及有效成分的应用，在于防治农作物病害的药物或药剂。本专利技术所述的草乌粗提物和化合物neoechinulin A用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有1%-99%的本专利技术草乌粗提物或化合物neoechinulin A，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。本
技术实现思路
中，可为一种药物组合物，其特征在于包含有效量的草乌粗提物或化合物neoechinulin A，其用途是用于防治农业上的植物病毒病。所述药物组合物，含有作为活性成分的至少草乌粗提物或化合物neoechinulin A本身或其与一种或多种可药用的惰性无毒赋形剂或载体的混合物。本专利技术提供所述的草乌粗提物和化合物neoechinulin A在防治农作物病害方面的应用。所述的农作物包括蔬菜和禾谷类作物。所述的草乌粗提物防治的农作物病害包括黄瓜花叶病毒病、玉米条纹叶枯病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、水稻矮缩病毒病和南方水稻黑条矮缩病毒病。所述的化合物neoechinulin A防治的农作物病害为黄瓜花叶病毒病、玉米条纹叶枯病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、水稻矮缩病毒病和南方水稻黑条矮缩病毒病。具体实施方式为了更好地理解专利技术的实质，下面用实例来详细说明专利技术的
技术实现思路
，但本专利技术的内容并不局限于此。实施例一草乌粗取物的制备：将26 kg干燥草乌(Aconitum carmichaeli Debx.)粉碎，过40目筛，加入5倍量的95%乙醇冷浸三次，每次3天，浸泡液经旋转蒸发仪减压浓缩，回收乙醇后得到乙醇浸膏2.0 kg；乙醇浸膏称为草乌总浸膏，乙醇浸膏加少量水分散，首先以石油醚萃取、得草乌石油醚层萃取液，然后用乙酸乙酯萃取，得草乌乙酸乙酯层萃取液，最后用正丁醇萃取，得草乌正丁醇层萃取液，最后余下水层，将各层萃取液分别减压浓缩得浸膏，所有浸膏包括乙醇浸膏统称草乌粗提物，26 kg干燥草乌经本法提取，得到约250 g的石油醚层浸膏，称为草乌石油醚层提取物。得到约150 g的乙酸乙酯层浸膏，称为草乌乙酸乙酯层提取物。得到约600 g的正丁醇层浸膏，称为草乌正丁醇层提取物。得到约800 g的水层浸膏，称为草乌水层提取物。实施例二化合物neoechinulin A的分离：取乙酸乙酯层浸膏用乙酸乙酯溶解，100~200目硅胶拌样，200~300目硅胶装柱，用中压柱层析分离，以石油醚:乙酸乙酯=1:0~0:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，TLC点板跟踪，收集相同极性的洗脱液，得Fr 2-1至Fr 2-6 6个组分。其中Fr 2-4用100~200目硅胶拌样，200~300目硅胶装柱，常压柱层析分离，以二氯甲烷:甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗植物病毒的草乌粗提物及有效成分，其特征是以干燥草乌(Aconitum carmichaeli Debx.)为原料，以浓度为70～95%的乙醇浸泡，浸泡液经减压浓缩，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，称为草乌总浸膏，再将乙醇浸膏加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水层，所得各种萃取液减压浓缩得到的浸膏加上乙醇浸膏，统称草乌粗提物；取乙酸乙酯层浸膏用乙酸乙酯溶解，100～200目硅胶拌样，200～300目硅胶装柱，用中压柱层析分离，以石油醚:乙酸乙酯=1:0～0:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，TLC点板跟踪，收集相同极性的洗脱液，得Fr 2‑1至Fr 2‑6 6个组分；其中Fr 2‑4用100～200目硅胶拌样，200～300目硅胶装柱，常压柱层析分离，以二氯甲烷:甲醇=1:0～1:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，得到化合物neoechinulin A，结构式如下：。

【技术特征摘要】
1. 一种抗植物病毒的草乌粗提物及有效成分，其特征是以干燥草乌(Aconitum carmichaeli Debx.)为原料，以浓度为70～95%的乙醇浸泡，浸泡液经减压浓缩，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，称为草乌总浸膏，再将乙醇浸膏加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水层，所得各种萃取液减压浓缩得到的浸膏加上乙醇浸膏，统称草乌粗提物；取乙酸乙酯层浸膏用乙酸乙酯溶解，100～200目硅胶拌样，200～300目硅胶装柱，用中压柱层析分离，以石油醚:乙酸乙酯=1:0～0:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，TLC点板跟踪，收集相同极性的洗脱液，得Fr 2-1至Fr 2-6 6个组分；
其中Fr 2-4用100～200目硅胶拌样，200～300目硅胶装柱，常压柱层析分离，以二氯甲烷:甲醇=1:0～1:1(V:V)的洗脱液梯度洗脱，得到化合物neoechinuli...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡德禹，朱芸莹，宋宝安，薛伟，陈卓，王贞超，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52