提供一种可简便且正确地测定LDL胆固醇的新的测定方法。一种试样中的LDL胆固醇的测定方法，包括：使表面活性剂A1、表面活性剂B1和表面活性剂B2存在于含有实施了HDL消去处理的试样的反应液中，以使LDL中的胆固醇酶反应的步骤。表面活性剂A1是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚，表面活性剂B1是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种，表面活性剂B2是选自由HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚以及聚氧乙烯（35-40）辛基苯基醚组成的组的至少一种。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及低密度脂蛋白(以下称为“LDL”)中的胆固醇的测定方法及测定用试剂盒。
技术介绍
LDL是起到将肝脏中合成的胆固醇搬运到周围组织的作用的脂蛋白。已知LDL中的胆固醇(以下也称“LDL胆固醇”)为动脉硬化的原因物质之一。因此，LDL胆固醇量从2008年4月起被追加为基于日本劳动安全卫生法的健康诊断的检查项目。作为LDL胆固醇的测定方法，例如有如下方法:通过超离心分离将LDL与其他脂蛋白(例如，高密度脂蛋白(以下也称“HDL”)、超低密度脂蛋白(以下也称“ VLDL”)等分离之后，使用酶仅测定LDL胆固醇的方法；以及通过电泳分离LDL之后，进行脂质的染色，测定其发色强度的方法等。但是，这些方法操作繁杂，难以处理多数待测体，因此难以在临床检查等中使用。因此，开发了各种使用了酶的LDL胆固醇的测定方法。作为使用了酶的测定方法，有直接测定LDL 胆固醇本身的直接法、用第一反应使源自LDL以外的脂蛋白的胆固醇反应并将它们消去，用第二反应使剩余的LDL胆固醇反应并由此测定LDL胆固醇量的消去法等。更具体地，作为直接法，例如通过环糊精以及表面活性剂来提高酶针对LDL胆固醇的特异性并测定LDL胆固醇的方法(专利文献I)。作为消去法，有通过聚阴离子和2价金属离子来优先使源自LDL以外的脂蛋白的胆固醇酶反应之后，再测定LDL胆固醇的方法(专利文献2);在使硫酸杯芳烃(硫酸力A 7 k >)或聚苯胺等与LDL胆固醇结合而形成可溶性复合体的状态下使源自LDL以外的脂蛋白的胆固醇酶反应之后，再测定LDL胆固醇的方法(专利文献3)等。在含有胺的缓冲液中使源自LDL以外的脂蛋白的胆固醇酶反应之后，测定LDL胆固醇的方法(专利文献4)等。在先技术文献专利文献专利文献1:特许第3091230号公报专利文献2:特许第3193634号公报专利文献3:特许第3822340号公报专利文献4:特许第3058602号公报
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术提供一种能够测定LDL胆固醇的新方法及用于测定的试剂盒。用于解决问题的手段本专利技术涉及一种试样中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，包括:使表面活性剂Al、表面活性剂BI和表面活性剂B2存在于含有实施了高密度脂蛋白消去处理的试样的反应液中，以使低密度脂蛋白中的胆固醇酶反应的步骤(I )，所述表面活性剂Al是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚，所述表面活性剂BI是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种，所述表面活性剂B2是选自由HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯肉豆蘧基醚以及聚氧乙烯(35-40)辛基苯基醚组成的组的至少一种。本专利技术作为其他方式，涉及一种低密度脂蛋白中的胆固醇的测定用试剂盒，其是在低密度脂蛋白中的胆固醇的测定中使用的试剂盒，包含:表面活性剂Al，所述表面活性剂Al是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚；表面活性剂BI，所述表面活性剂BI是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种；以及表面活性剂B2，所述表面活性剂B2是选自由HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯肉豆 蘧基醚以及聚氧乙烯(35-40)辛基苯基醚组成的组的至少一种。专利技术效果根据本专利技术，能够提供LDL胆固醇的新的测定方法。附图说明图1是示出参考例I的结果的一个例子的曲线图；图2的A和B是示出参考例3的结果的一个例子的曲线图；图3的A和B是示出参考例4的结果的一个例子的曲线图；图4的A和B是实施例1的结果的一个例子的曲线图；图5的A C是示出实施例2的结果的一个例子的曲线图；图6的A和B是示出实施例3的测定值和现有方法的测定值的相关关系的一个例子的曲线图。具体实施例方式本专利技术基于如下见解:在上述的表面活性剂Al、表面活性剂BI和表面活性剂B2存在的情况下，通过对至少含有LDL和VLDL的试样、优选含有LDL、VLDL和乳糜微粒(以下也称“CM”)的试样、更优选的是实施了 HDL消去处理的生物体试样进行酶处理，由此能够选择性使LDL胆固醇酶反应，因此能够测定LDL胆固醇。根据本专利技术的LDL胆固醇测定方法，虽然能够测定LDL胆固醇的机理的详细不清楚，但是可以如下所述地推测。即，在表面活性剂Al的存在下表面活性剂BI选择性地使LDL增溶，在表面活性剂Al和表面活性剂BI的存在下表面活性剂B2抑制VLDL和CM等LDL之外的脂蛋白的增溶，因此能够选择性地使LDL胆固醇酶反应。但是，本专利技术不限定于该机理。SP，本专利技术涉及:[I] 一种试样中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，包括:使表面活性剂Al、表面活性剂BI和表面活性剂B2存在于含有实施了 HDL消去处理的试样的反应液中，以使LDL中的胆固醇酶反应的步骤(I)，其中，所述表面活性剂Al是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚，所述表面活性剂BI是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种，所述表面活性剂B2是选自由HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯肉豆蘧基醚以及聚氧乙烯(35-40)辛基苯基醚组成的组的至少一种。[2]根据[I]所述的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其中，所述HDL消去处理包括:将所述表面活性剂Al、表面活性剂A2以及试样混合以使所述试样中的HDL中的胆固醇酶反应，所述表面活性剂A2是选自由HLB为18.0以上的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚、HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚以及聚氧乙烯肉豆蘧基醚组成的组的至少一种。[3]根据[I]或[2]所述的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其中，所述步骤(I)包括:通过在含有实施了所述HDL消去处理的试样的反应液中添加表面活性剂B3，来使所述表面活性剂Al、所述表面活性剂B1、所述表面活性剂B2和所述表面活性剂B3存在于所述反应液中，以使LDL中的胆固醇酶反应，所述表面活性剂B3是聚氧乙烯烷基醚硫酸酯盐和烷基苯磺酸盐中的至少一种。[4]根据[I]至[3]中任一项所述的测定方法，其中，所述聚氧化烯多环苯基醚是聚氧乙烯聚氧丙烯多环苯基醚。[5]根据[I]至[4]中任一项所述的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其中，所述步骤(I)中的酶反应包括:使试样中的LDL与胆固醇脱氢酶以及胆固醇酯酶反应。[6] 一种低密度脂蛋白中的胆固醇的测定用试剂盒，是在LDL中的胆固醇的测定中使用的试剂盒，包含:表面活性剂Al，所述表面活性剂Al是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚；表面活性剂BI，所述表面活性剂BI是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种；以及表面活性剂B2，所述表面本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.29 JP 2010-2435691.一种试样中的低密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，包括: 使表面活性剂Al、表面活性剂BI和表面活性剂B2存在于含有实施了高密度脂蛋白消去处理的试样的反应液中，以使低密度脂蛋白中的胆固醇酶反应的步骤(I)， 所述表面活性剂Al是HLB为12.5以下的聚氧化烯多环苯基醚， 所述表面活性剂BI是选自由HLB为12.6以上的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB为12.7以上且14.5以下的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚以及HLB为12.0以上且14.5以下的聚氧乙烯苯乙烯化苯基醚组成的组的至少一种， 所述表面活性剂B2是选自由HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯肉豆蘧基醚以及聚氧乙烯(35-40)辛基苯基醚组成的组的至少一种。2.根据权利要求1所述的测定方法，其中， 所述高密度脂蛋白消去处理包括:将所述表面活性剂Al、表面活性剂A2以及试样混合以使所述试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇酶反应， 所述表面活性剂A2是选自由HLB为18.0以上的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚、HLB为16.9以上的聚氧乙烯月桂基醚以及聚氧乙烯肉豆蘧基醚组成的组的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其中， 所述步骤(I)包括:通 过在含有实施了所述高密度脂蛋白消去处理的试样的反应液中添加表面活性剂B3，来使所述表面活性剂Al、所述表面活性剂B1、所述表面活性剂B2和所述表面活性剂B3存在于所述反应液中，以使低密度脂蛋白中的胆固醇酶反应， 所述表面活性剂B3是聚氧乙烯烷基醚硫酸酯盐和烷基苯磺酸盐中的至少一种。4.根据权利要求1至3中任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：今井敏博，滨隆志，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：
国别省市：
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