【技术实现步骤摘要】
促进含非天然氨基酸的蛋白质产生的方法和组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是申请号为
201880049275.0、
申请日为
2018
年6月2日
、
专利技术名称为“促进含非天然氨基酸的蛋白质产生的方法和组合物”的中国专利技术专利申请的分案申请,原申请为国际申请号为
PCT/US2018/035764
的国家阶段申请,该国际申请要求申请日为
2017
年6月2日,申请号为
62/514,754
的美国临时专利申请的优先权,将其内容通过引用以其整体并入本文
。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已经以
ASCII
格式经由
EFS
‑
Web
递交的序列表并且将该序列表通过引用以其整体并入本文
。
创建于
2018
年5月
29
日的
ASCII
副本被命名为
AMBX_0223_PCT_SL.txt
,并且大小是
13,172
字节
。
[0005]本披露内容涉及产生含非天然氨基酸的多肽的细胞系的基因组工程化和产生的领域
。
本专利技术总体上涉及细胞系的产生
、
开发和含非天然氨基酸的多肽和蛋白质的产生的领域
。
技术介绍
[0006]化学正交定向的工程化系统在 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种产生用于将非天然氨基酸掺入蛋白质的细胞系的方法,该方法包括在表达含选择密码子的目的基因的细胞中一个或多个靶向失活的位点或区域,其中细胞包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)
和正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)。2.
如权利要求1所述的方法,其中该细胞或细胞系是真核的
。3.
如权利要求1所述的方法,其中该细胞或细胞系选自
COS、CHO、VERO、MDCK、WI38、V79、B14AF28
‑
G3、BHK、HaK、NS0、SP2/0
‑
Ag14、HeLa
或
HEK293。4.
如权利要求1所述的方法,其中该非天然氨基酸选自
O
‑
甲基
‑
L
‑
酪氨酸
、L
‑3‑
(2
‑
萘基
)
丙氨酸
、3
‑
甲基
‑
苯丙氨酸
、O
‑4‑
烯丙基
‑
L
‑
酪氨酸
、4
‑
丙基
‑
L
‑
酪氨酸
、
对炔丙基氧基
‑
L
‑
苯丙氨酸
、
三
‑
O
‑
乙酰基
‑
GlcNAc
β
‑
丝氨酸
、
左旋多巴
、
氟化苯丙氨酸
、
异丙基
‑
L
‑
苯丙氨酸
、
对叠氮基
‑
L
‑
苯丙氨酸
、
对酰基
‑
L
‑
苯丙氨酸
、
对苯甲酰基
‑
L
‑
苯丙氨酸
、L
‑
磷酸丝氨酸
、
膦酰基丝氨酸
、
膦酰基酪氨酸
、
对碘
‑
苯丙氨酸
、
对溴苯丙氨酸
、
对氨基
‑
L
‑
苯丙氨酸或异丙基
‑
L
‑
苯丙氨酸
。5.
如权利要求1所述的方法,其中该目的基因是生物治疗基因或产物
。6.
如权利要求1所述的方法,其中该生物治疗基因或产物是疫苗
。7.
如权利要求1所述的方法,其中该目的基因是抗体
、scFv、scFv
融合蛋白
、Fc
融合蛋白
、
因子
VII、
因子
VIII
或因子
IV。8.
如权利要求1所述的方法,其中该目的基因是抗体
。9.
如权利要求1所述的方法,其中该目的基因是细胞因子
、
白细胞介素
、
干扰素
、
趋化因子
、
生长因子
、
激素
、
及其受体
、
类似物
、
双特异物或片段
。10.
如权利要求1所述的方法,其中该目的基因是
HER2、CD
‑
70、PSMA、5T4、EGFR、TROP2、CD3、IL
‑
2、IL
‑
3、IL
‑
10、IL
‑
15、GPC3、DLL3、ROR1、
瘦素
、FGF
‑
21、FGF
‑
23、HGH、FcR、
胰岛素
、TNFR1、TRAIL、EPO、
及其类似物
、
双特异物或片段
。11.
如权利要求1所述的方法,其中该一个或多个靶向失活的位点或区域是
GS、Bcl
‑
2、IGFBP4、AQP1、Maf1、eRF1、FUT8、P53、
半胱天冬酶
3、UPF1、Smg1、Smac/DIABLO、Apaf
‑
1、
半胱天冬酶
‑
6、
半胱天冬酶
‑
7、
半胱天冬酶
‑
9、
半胱天冬酶
‑
10、PARP、
α
胞衬蛋白
、NuMA、AIF、CAD、Puma、Noxa、14
‑3‑
3、Aven、Myc
或
HtrA2/Omi。12.
如权利要求1所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域是非固有选择标记基因
。13.
如权利要求1所述的方法,其中该选择标记基因是博莱霉素
、
潮霉素或嘌呤霉素
。14.
如权利要求1所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域是
Bcl
‑2位点或区域
。15.
如权利要求1所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域是
Bax
或
Bak。16.
如权利要求1所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域被完全或部分失活
。17.
如权利要求1所述的方法,其中该选择密码子是无义密码子
、
稀有密码子或四碱基密码子
。18.
如权利要求
15
所述的方法,其中该选择密码子包含赭石密码子
、
乳白石密码子或琥珀密码子
。19.
如权利要求1所述的方法,该方法包括掺入非天然氨基酸的蛋白质或多肽
。20.
如权利要求1所述的方法,其中该非天然氨基酸是位点特异性掺入的
。21.
如权利要求1所述的方法,其中该细胞或细胞系是瞬时的
、
稳定的细胞群或稳定的克隆细胞系
。
22.
如权利要求1所述的方法,该方法用于降低或减少细胞或细胞系中的细胞凋亡
。23.
如权利要求1所述的方法,该方法用于改进掺入非天然氨基酸的蛋白质或多肽的产量
。24.
一种如权利要求1所述的方法的分离的细胞
。25.
如权利要求
22
所述的分离的细胞,该分离的细胞用于获得掺入非天然氨基酸的蛋白质
。26.
一种用于将非天然氨基酸掺入蛋白质的细胞或细胞系,该细胞表达含选择密码子的目的基因,其中该目的基因包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)
和正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)
;并且其中该细胞包含一个或多个靶向失活的位点或区域
。27.
一种用于将非天然氨基酸掺入蛋白质的细胞或细胞系,该细胞或细胞系包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)、
正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)
,并且其中该细胞包含一个或多个靶向失活的位点或区域
。28.
一种表达目的基因的细胞或细胞系,该目的基因包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)、
正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)
,其中该细胞包含一个或多个靶向失活的位点或区域
。29.
一种降低或减少包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)
和正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)
的细胞中的细胞凋亡的方法,该方法包括使在该细胞中的一个或多个促凋亡位点或区域靶向失活
。30.
一种产生用于将非天然氨基酸掺入蛋白质的细胞的方法,该方法包括:提供能够使细胞中的一个或多个靶向失活的位点或区域失活的核酸分子,该细胞表达含选择密码子的目的基因;以及将该核酸分子引入表达该含选择密码子的目的基因的细胞中,该目的基因包含正交氨酰基
tRNA
合成酶
(O
‑
RS)
和正交抑制型
tRNA(O
‑
tRNA)。31.
如权利要求
30
所述的方法,其中核酸分子选自
SEQ.ID NO.1
‑
42。32.
如权利要求
30
所述的方法,其中该核酸分子使一个或多个靶向失活的位点或区域失活
。33.
如权利要求
30
所述的方法,其中该一个或多个靶向失活的位点或区域是相同或不同的
。34.
如权利要求
30
所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域是
GS、Bcl
‑2家族
、IGFBP4、AQP1、Maf1、eRF1、FUT8、P53、
半胱天冬酶
3、UPF1、Smg1、
博莱霉素
、
潮霉素
、
嘌呤霉素
、Smac/DIABLO、Apaf
‑
1、
半胱天冬酶
‑
6、
半胱天冬酶
‑
7、
半胱天冬酶
‑
9、
半胱天冬酶
‑
10、PARP、
α
胞衬蛋白
、NuMA、AIF、CAD、Puma、Noxa、14
‑3‑
3、Aven、Myc
或
HtrA2/Omi。35.
如权利要求
30
所述的方法,其中该靶向失活的位点或区域是非固有选择标记基因
。36.
...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。