一种跨膜蛋白制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种跨膜蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种跨膜蛋白41B(TMEM41B)基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型的构建方法以及通过该构件方法得到的跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型在血管内膜新生或冠状动脉狭窄疾病研究中的应用，还涉及一种跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
作为药物靶点在制备用于治疗血管内膜新生或冠状动脉狭窄的药物中的应用
。

技术介绍

[0002]心血管病是近十年来威胁人类健康的全球性疾病，心肌缺血导致的心力衰竭在心血管疾病中占有重要地位
。
冠状动脉狭窄是引起心肌缺血的主要原因，经皮冠状动脉介入治疗
(PCI)、
球囊血管成形术或冠状动脉搭桥术
(CABG)
是治疗狭窄性动脉粥样硬化病变最常见的血管重建治疗策略
。
冠状动脉狭窄患者及时送往医院手术治疗，实现血流再通，有着立竿见影的效果
。
但是，这些血管介入性手术
(
包括治疗血管狭窄和闭塞的经皮腔内血管成形术和血管支架植入术等
)
不可避免的会损伤血管内膜，引发血管内膜新生
。
内膜的异常新生是患者支架内再狭窄的重要原因，也是预后不良的关键因素
。
研究发现，接受
PCI
治疗的患者发生再狭窄的发生率最高可达
50
％，甚至部分患者需要在6个月内进一步接受血管重建手术
。
这无疑是对患者在精神
、
身体以及经济上再次打击
。
因此进一步探寻血管内膜新生机制并筛选干预靶点是一项具有积极意义的临床课题
。
[0003]血管内膜新生在支架术后再狭窄的发生中扮演重要角色，同时也是动脉粥样硬化
、
静脉移植
、
高血压等疾病的共同病理学基础
。
血管平滑肌细胞具有很强的可塑性，在病理刺激下会发生表型转化，即由原来的收缩型细胞转化为合成型细胞
(
以高增殖
、
迁移和蛋白合成能力为特征
)。
平滑肌细胞的表型转化是血管内膜新生必经病理学过程
。
既往研究发现，内膜新生的主要原因是平滑肌细胞会发生过度增殖与迁移
。
因此，阐明血管平滑肌细胞过度增殖的分子机制，并有效抑制血管内膜新生，对研发干预血管再狭窄的药物
、
优化治疗措施
、
提高患者术后生存质量至关重要
。
[0004]TMEM41B(
跨膜蛋白
41B
，也称为
Stasimon)
最初发现是由于脊柱运动神经元
(SMN)
蛋白丧失而引起的剪接功能障碍的靶点
。TMEM41B
同时也是是一种位于内质网
(ER)
的跨膜蛋白，其位于
ER
与线粒体的接触部位
。
近年研究发现，
TMEM41B
是自噬形成的新型调节分子，同时具有磷脂翻转酶的活性，参与调控脂质稳态
。
此外，
TMEM41B
也参了黄病毒和冠状病毒
(
包括
SARS
‑
CoV
‑
2)
感染宿主的过程
。
但是，迄今为止
TMEM41B
血管内膜新生的作用以及机制尚未报道
。
因此揭示
TMEM41B
在内膜新生过程中的作用以及机制，为治疗内膜新生提供新的思路和靶点
。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型的构建方法以及通过该构件方法得到的跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型
在血管内膜新生或冠状动脉狭窄疾病研究中的应用
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所采取的解决方案如下：
[0007]第一个方面，本专利技术提供一种跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型的构建方法，包括如下步骤：
[0008]步骤
(1)
，小鼠胚胎细胞中在
TMEM41B
基因的3号和5号外显子插入
floxp
位点，通过胚胎打靶技术构建
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠；
[0009]步骤
(2)
，根据
Cre
‑
flox
敲除鼠构建系统，运用
Sm22
α
‑
Cre
工具鼠与
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠进行杂交繁育，获得平滑肌细胞特异性组成性敲除
TMEM41B
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
SM22
α
‑
Cre)
；
[0010]步骤
(3)
，根据
Cre
‑
flox
敲除鼠构建系统，运用
Myh11
‑
ERTCre
工具鼠与
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠进行杂交繁育，获得平滑肌细胞特异性条件性敲除
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
Myh11
‑
ERT2Cre)。
[0011]优选地，步骤
(2)
获得的平滑肌细胞特异性组成性敲除
TMEM41B
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
SM22
α
‑
Cre)
饲养至6‑8周自发性发生血管内膜新生
。
[0012]优选地，步骤
(3)
获得的平滑肌细胞特异性条件性敲除
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
Myh11
‑
ERT2Cre)
饲养至6周，连续腹腔注射
Tamoxifen(60
‑
100mg/kg)5
天，饲养至
16
周，自发性发生血管内膜新生
。
[0013]第二个方面，本专利技术还提供一种通过如上所述的跨膜蛋白
41B(TMEM41B)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种跨膜蛋白
41B(TMEM41B)
基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤
(1)
，小鼠胚胎细胞中在
TMEM41B
基因的3号和5号外显子插入
floxp
位点，通过胚胎打靶技术构建
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠；步骤
(2)
，根据
Cre
‑
flox
敲除鼠构建系统，运用
Sm22
α
‑
Cre
工具鼠与
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠进行杂交繁育，获得平滑肌细胞特异性组成性敲除
TMEM41B
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
SM22
α
‑
Cre)
；步骤
(3)
，根据
Cre
‑
flox
敲除鼠构建系统，运用
Myh11
‑
ERTCre
工具鼠与
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠进行杂交繁育，获得平滑肌细胞特异性条件性敲除
TMEM41B
‑
floxp
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
Myh11
‑
ERT2Cre)。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(2)
获得的平滑肌细胞特异性组成性敲除
TMEM41B
转基因小鼠
(Tmem41b
f/f
，
SM22
α
‑
Cre)
饲养至6‑8周自发性发生血管内膜新生
。3.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(3)
获得的平滑肌细胞特异性条件性敲除
TME...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙爱军，洪文轩，葛均波，刘进，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：