一种流产小鼠模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种流产小鼠模型的构建方法，所述方法包括通过特异性敲除小鼠子宫内膜细胞的

【技术实现步骤摘要】
一种流产小鼠模型的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种流产小鼠模型的构建方法及其应用
。

技术介绍

[0002]胚胎植入是囊胚期胚胎与母体子宫建立生理联系的第一个关键事件，其中涉及大量的分子调控及不同类型细胞间的信号交流
。
胚胎植入过程的成功与否决定了胚胎正常发育走向及最终妊娠结局
。
胚胎植入失败是早期妊娠失败的主要原因
。
胚胎种植失败可能是由于胚胎质量差
、
子宫内膜容受性不足或着床胚胎和子宫内膜无法同步相互作用
。
其中三分之二的胚胎种植失败是由于子宫内膜基质细胞增殖及蜕膜化紊乱造成的子宫内膜容受性不足导致的
。
[0003]复发性流产
(RSA)
是生殖医学中的重大挑战，病因复杂，涉及多种因素，包括遗传
、
解剖
、
内分泌
、
免疫和血栓形成因素
。RSA
被定义为在妊娠
20
周前连续流产两次或以上
。RSA
的病因复杂，可以归因于几个因素：遗传因素：染色体异常是复发性流产最常见的原因，占所有病例的
50
‑
60
％
。
这些异常可以是父母的
(
平衡易位
)
或胚胎的
(
非整倍体
)
；解剖因素：子宫畸形
、
子宫内粘连和子宫肌瘤可以干扰着床和胎盘发育，导致流产
。
内分泌因素：如多囊卵巢综合症
(PCOS)、
甲状腺疾病和糖尿病等疾病可以破坏维持妊娠所必需的激素平衡
。
免疫因素：某些自身免疫疾病和异质免疫反应可以导致
RSA。
例如，抗磷脂综合症
(APS)
是一种自身免疫疾病，会增加血栓和妊娠流产的风险
。
血栓形成因素：易栓症，一种增加血栓风险的病状，可以导致胎盘供血不足和
RSA。
[0004]由于人体实验的医学伦理学制约，动物模型成为研究流产发生发展及探索防治措施的重要工具，然而目前并没有能很好地反映复发性流产这种疾病严重程度的动物模型
。
造模成功后，可部分或全部出现人类复发性流产的关键表型
。
此流产动物模型为复发性流产的疾病特点
、
发病机制
、
疾病转归
、
研发和筛选复发性流产的干预策略和治疗新药等提供保障
。
[0005]专利申请
CN201010217681.9
涉及一种动物模型的构建方法，具体涉及一种用于自身免疫型复发性流产及抗磷脂抗体综合征的发病机制研究
、
诊断及治疗的动物实验研究模型
。
通过
BALB/c
小鼠子宫腔注射人
β
2GP
‑1诱导建立自身免疫型复发性流产小鼠模型
。
该专利技术动物模型的构建方法安全可靠
、
简便经济，减少了自身免疫型
RSA
小鼠模型的造模时间，提高了造模成功率和造模效率，具有良好的应用前景
。
但该建模方法在安全性和建模效率方面都不够理想
。
[0006]因此，本领域需要一种新的流产小鼠模型的构建方法及其应用
。

技术实现思路

[0007]本专利技术首先提供一种流产小鼠模型的构建方法，所述方法包括通过特异性敲除小鼠子宫内膜细胞的
Furin
基因，构建流产小鼠模型
。
[0008]在一种具体的实施方式中，将
loxP
序列插入小鼠
Furin
基因的两端而用于标记并
有效敲除
Furin
基因，得到的在
Furin
基因的两端插入有
loxP
序列的小鼠命名为
loxP
‑
flox
‑
Furin
小鼠，或称为
Furin
f/f
小鼠；之后，将
loxP
‑
flox
‑
Furin
小鼠与携带
Pgr
‑
Cre
酶的工具小鼠相交配并回交纯化，得到所述流产小鼠模型，即
Furin
f/f
/Pgr
‑
Cre
小鼠，或称为
Furin
d/d
小鼠
。
[0009]在一种具体的实施方式中，得到流产小鼠模型后，将模型小鼠
Furin
f/f
/Pgr
‑
Cre
小鼠的雌鼠与模型小鼠
Furin
f/f
/Pgr
‑
Cre
小鼠的雄鼠合笼，以繁育更多的模型小鼠和对照小鼠
。
[0010]在一种具体的实施方式中，雌雄合笼比例为
3∶1
或以上
。
[0011]在一种具体的实施方式中，最开始时选择雌性
Furin
f/f
小鼠携带
flox
序列，而雄性小鼠为携带
Pgr
‑
Cre
酶的工具小鼠
。
与最开始时选择雄性
Furin
f/f
小鼠携带
flox
序列，而雌性小鼠为携带
Pgr
‑
Cre
酶的工具小鼠相比，如此可使得小鼠的繁殖效率更高
。
[0012]在一种具体的实施方式中，所述小鼠为
SPF
级
C57BL/6
小鼠
。
[0013]本专利技术还提供一种流产小鼠模型的应用，即上述构建方法制备得到的流产小鼠模型用于治疗和
/
或预防动物和人类复发性流产或反复种植失败的药物开发
。
[0014]本专利技术还提供一种筛选用于治疗和
/
或预防动物和人类复发性流产或反复种植失败的药物的方法，所述方法包括如下步骤：
1)
将待测试药物施用于上述构建方法构建得到的小鼠模型中；
2)
分析待测试药物的治疗效果并进行评价，选择能够明显改善模型小鼠病理特征的测试药物
。
[0015]本专利技术至少具有以下有益效果：
[0016]1、
本专利技术采用小鼠模型模拟人体自然状态进行实验以研究发病机制和治疗，降低了在人体实施实验的必要性，避免了人体实验的伦理纠纷
。
[0017]2、
全身敲除
Furin
将导致小鼠在胚胎时期死亡，本专利技术通过特异性敲除子宫内膜细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种流产小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括通过特异性敲除小鼠子宫内膜细胞的
Furin
基因，构建流产小鼠模型
。2.
根据权利要求1所述的流产小鼠模型的构建方法，其特征在于，将
loxP
序列插入小鼠
Furin
基因的两端而用于标记并有效敲除
Furin
基因，得到的在
Furin
基因的两端插入有
loxP
序列的小鼠命名为
loxP
‑
flox
‑
Furin
小鼠，或称为
Furin
f/f
小鼠；之后，将
loxP
‑
flox
‑
Furin
小鼠与携带
Pgr
‑
Cre
酶的工具小鼠相交配并回交纯化，得到所述流产小鼠模型，即
Furin
f/f
/Pgr
‑
Cre
小鼠，或称为
Furin
d/d
小鼠
。3.
根据权利要求2所述的流产小鼠模型的构建方法，其特征在于，得到流产小鼠模型后，将模型小鼠
Furin
f/f
/Pgr
‑
Cre
小鼠的雌鼠与模型小鼠
Furi...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪鑫，郭德伟，肖舒，赵梦醒，姚若进，唐政山，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：