【技术实现步骤摘要】
一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法
[0001]本专利技术属于植物组织和细胞工程
,具体涉及一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法
。
技术介绍
[0002]橡胶树
(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)
属大戟科橡胶树属,是多年生的异花授粉乔木,其所产的天然橡胶是重要的工业原料和物资
。
而通过体细胞胚发生途径来获得再生植株是植物组培苗工厂化生产和遗传转化的重要方法
。
[0003]现有技术中,橡胶树经体细胞胚发生途径获得再生植株主要采用
1.
花药培养
、2.
内珠被培养和
3.
次生体胚循环增殖
。
[0004]1.
橡胶树花药培养技术是以处于单核期的橡胶树雄花为外植体,剥离雄蕊,接种于诱导愈伤培养基中诱导愈伤组织,再将愈伤组织接种于诱导体胚培养基诱导体胚发生,最后将成熟胚状体接种于植株再生培养基中诱导出完整小植株
。2.
橡胶树内珠被培养技术是以橡胶树授粉后
45
‑
75d
天的幼果中的内珠被为外植体,诱导愈伤组织,再经愈伤组织分化体胚,最后由成熟的胚状体分化成植株
。3.
次生体胚循环增殖是以花药或内珠被诱导的初生胚为外植体,将胚状体切成2‑
3mm
小块,诱导次生胚,此过程循环,直至获得足够量胚状体,最后诱导植株再生
。
[0005]以上所说 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)
胚体选择:挑选发育正常的
、
颜色为淡黄色
、
大小为1‑
1.5cm
的子叶平展的成熟胚体;
(2)
胚体预培养:将选取的成熟胚体放入浓度为
100mg/L
的
2,4
‑
D
溶液中,暗室培养,得到透光性增强且较为柔软状态的体胚;
(3)
愈伤组织诱导:取出预培养后的成熟胚体,切块
、
划破各胚块表皮,置于愈伤组织诱导培养基中,进行暗培养,得到黄色且结构较为疏松的颗粒状组织;
(4)
愈伤组织的继代:将步骤
(3)
得到的疏松的颗粒状组织接种于愈伤组织诱导培养基中,进行暗培养,得到淡黄色且结构较为致密的颗粒状组织;
(5)
次生体胚诱导:将步骤
(4)
得到的致密的颗粒状组织接种于胚状体诱导培养基中,进行暗培养,得到胚状体;
(6)
植株诱导:将得到的成熟胚状体接种于植株诱导培养基中,光照培养,即可得到橡胶树再生植株
。2.
如权利要求1所述的橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,所述步骤
(2)
中,所述成熟胚体和
2,4
‑
D
溶液的质量体积比为
1g
:
(20
‑
30)ml。3.
如权利要求1所述的橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,所述步骤
(2)
中,所述暗室培养条件为:在
23
‑
27℃
的暗室中,以
120
‑
160rpm
在摇床上浸摇2‑
4d。4.
如权利要求1所述的橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,步骤
(3)
中,所述切块后的尺寸为3‑
5mm
的胚块
。5.
如权利要求1所述的橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,所述步骤
(3)
和步骤
(4)
中,所述愈伤组织诱导培养基以
MS
培养基为基础培养基,附加萘乙酸
0.5
‑
1.5mg/L
,激动素1‑
2mg/L
,天冬酰胺
0.3g/L
,肌醇
0.1g/L
,蔗糖
50
‑
70g/L
,椰子水5%
(V/V),Phytagel 2.2g/L
;调培养基的
pH
至
5.8
‑
6.2。6.
如权利要求1所述的橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法,其特征在于,所述步骤
(3)
中,所述暗培养条件为:在
23
‑
27℃
下,暗培养
25
‑
35d<...
【专利技术属性】
技术研发人员:周权男,王梦澳,黄天带,吉辛,刘媛媛,李季,
申请(专利权)人:中国热带农业科学院橡胶研究所,
类型:发明
国别省市:
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