【技术实现步骤摘要】
一种防治黄瓜花叶病毒的疫苗及其制备方法
[0001]本专利技术属于植物病害防治
,具体涉及一种防治黄瓜花叶病毒的疫苗及其制备方法。
技术介绍
[0002]由植物病毒引起的病害素有“植物癌症”之称,其造成的经济损失非常严重。黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是一种非常严重的病毒病害,病毒可以到达除生长点以外的任何部位。黄瓜花叶病毒是寄主范围最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一。黄瓜花叶病毒是三分体正义单链RNA病毒,RNA1含有1个ORF,编码1a复制酶蛋白;RNA2含有2个ORF,5'端编码2a复制酶蛋白,3'端编码2b蛋白。前人研究发现植物受黄瓜花叶病毒侵染后的症状表现是由1a和2a复制酶蛋白共同决定的,二者具有协同作用;RNA3也有2个ORF,5'端编码31kDa的胞间运动蛋白(MP),3'端编码一个24
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26kDa的外壳蛋白(CP)。
[0003]目前,在生产上防治黄瓜花叶病毒病通常以化学防治为主,但易造成药剂残留和环境污染等问题。培育抗病品种也是防治黄瓜花叶病的有效方式之一,但育种工作进展缓慢,而生物防治技术已经逐渐成为病害防治的新方法。
[0004]病毒诱导基因沉默(virus
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induced gene silence,VIGS)是一种对植物进行反向遗传操作的技术,是植物防御机制的表现。农杆菌介导的VIGS技术通过农杆菌将携带目的基因片段的病毒载体转移到植物细胞中,介导靶向同源基因的mRNA降解,引起目的 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1. 一种防治黄瓜花叶病毒的疫苗,其特征在于:包括pTRV1和至少一种重组表达载体pTRV2
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目标基因,所述目标基因为CMV
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1a、CMV
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2a、CMV
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MP或CMV
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CP,序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。2. 根据权利要求1所述的疫苗,其特征在于:所述疫苗包括pTRV1和四种重组表达载体pTRV2
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目标基因,所述目标基因分别为CMV
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1a、CMV
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2a、CMV
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MP和CMV
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CP,序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求1所述的疫苗,其特征在于:所述重组表达载体pTRV2
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目标基因由以下步骤构建:(1)提取感染了黄瓜花叶病毒的烟株叶片的总RNA,将其反转成cDNA;(2)再以所述cDNA为模板进行PCR 扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳检测,回收目的片段;(3)对pTRV2空载体质粒进行EcoRI/BamHI双酶切,回收酶切产物之后,获得线性化载体;(4)将步骤(2)所得扩增产物目的片段与步骤(3)所得线性化载体进行连接,随后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,扩繁并提取质粒。4. 根据权利要求1所述的疫苗,其特征在于:关于步骤(2)PCR 扩增中对应的引物:当目标基因为CMV
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1a时,引物对为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6;当目标基因为CMV
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2a时,引物对为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8;当目标基因为CMV
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MP时,引物对为SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10;当目标基因为CMV
技术研发人员:杨铁钊,周方,周健飞,何冰,武兆云,徐世晓,孙聚涛,李俊营,郭玉鸽,
申请(专利权)人:河南农业大学,
类型:发明
国别省市:
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