【技术实现步骤摘要】
一种量子点
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抗体复合物微球及其制备方法、应用
[0001]本专利技术涉及抗原检测领域,特别涉及一种量子点
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抗体复合物微球及其制备方法、应用。
技术介绍
[0002]细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte
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associated antigen
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4,CTLA
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4)又名CD152,是一种白细胞分化抗原,是T细胞上的一种跨膜受体,与CD28共同享有B7分子配体,而CTLA
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4与B7分子结合后诱导T细胞无反应性,参与免疫反应的负调节。
[0003]目前,多种方法用于检测CTLA
‑4+ T细胞,其中荧光偶联单克隆抗体(单克隆抗体)是最常用的方法。由于CTLA
‑4+ T细胞亚群在外周血和肿瘤组织中的比例较低,且易受到肿瘤微环境的干扰,导致采用单克隆抗体检测时难度增加,且费用昂贵。因此,迫切需要一种更简单、更敏感的检测方法来监测CTLA
‑4+
T细胞亚群。纳米体(Nbs)是一种特殊类型的单结构域抗体,由不同区域的重链抗体组成,存在于骆驼的血液中。与传统抗体相比,Nbs具有高特异性、理化稳定性高、缺乏免疫原性、产量高、成本低等优点,适合于癌症的免疫靶向诊断和治疗。采用CTLA
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4特异性抗体,并与CTLA 4
+ T细胞有效结合,能够有效提高对CTLA4
+ T细胞检测的特异性和敏感性。
专利技术 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种量子点
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抗体复合物微球的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:S1配制量子点溶液:在磷酸盐缓冲液中加入量子点,振荡,静置,得量子点溶液;S2制备量子点
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抗体复合物:采用磷酸盐缓冲液溶液溶解纳米抗体Nb90,得纳米抗体Nb90溶液;取步骤S1的量子点溶液,加入EDC溶液,涡旋混匀,加入NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液,轻轻搅拌,培养;培养后离心,收集共轭量子点
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抗体复合物,加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬,得量子点
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抗体复合物溶液;在量子点
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抗体复合物溶液中加入水解乳清蛋白溶液,于36
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38℃反应后,加入乙醇胺,于36
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38℃终止反应,离心,收集沉淀物,加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬,得的修饰量子点
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抗体复合物溶液;S3制备量子点
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抗体复合物微球溶液:取DTAB加入水,边搅拌边加入步骤S2的修饰量子点
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抗体复合物溶液,超声,加入表面活性剂,搅拌反应后,加入乳清蛋白溶液,搅拌,得量子点
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抗体复合物微球溶液。2.根据权利要求1的一种量子点
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抗体复合物微球的制备方法,其特征在于,步骤S2中,所述纳米抗体Nb90溶液的质量浓度为0.8
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1.5mg/mL。3.根据权利要求1的一种量子点
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抗体复合物微球的制备方法,其特征在于,步骤S2中,所述量子点溶液、DEC溶液、NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液的体积比为4
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4.5:10
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12:10
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12:25
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27,EDC溶液的浓度为1
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1.4mM,NHS溶液的浓度为1
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1.4mM;所述培养1
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1.5h,所述离心的条件为:10000
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12000r/min离心20
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30min。4.根据权利要求1的一种量子点
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抗体复合...
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