【技术实现步骤摘要】
检测转基因蛋白的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器及其制备方法
[0001]本专利技术属于食品安全免疫检测
,具体涉及一种检测转基因蛋白的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器及其制备方法。
技术介绍
[0002]随着基因工程技术的不断发展,转基因作物的种植面积逐年扩大,其安全性成为人们关注的焦点。尽管我国对转基因作物及产品已经实施了强制性的标识条例,但仍有许多非法种植,销售转基因作物的案例发生。因此,开发一种简单,快速,高灵敏的转基因作物鉴定方法,对转基因作物及其产品的监管具有重要意义。
[0003]对转基因作物的检测中,基于核酸水平的检测,灵敏度高,但依赖仪器并对操作人员有一定的技术要求;基于蛋白质水平的检测方法,操作简单,检测时间短,对样品的前处理要求低,最适于目标物的现场快速检测。其中,免疫传感器具有可定量,特异性强,易操作等优点,目前已成为快速检测方法的研究热点。
[0004]在PAT蛋白的检测中,快速检测方法多依赖于免疫学技术,而免疫学速测技术,如免疫层析试纸条等,只能提供半定量的检测结果。迫切需要一种快速、灵敏、定量检测方法用于田间、仓储等环节的农作物的痕量检测。
[0005]基于PCR技术的检测方法灵敏度较高,但实验过程繁琐复杂且耗时长。免疫层析试纸条(ICS)能快速地的检测目标物,但其灵敏度偏低,且不能定量。电化学免疫传感器(electrochemiluminescence,ECL)具有较高的灵敏度,但传统的ECL试剂 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测转基因蛋白的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器,其工作电极为玻碳电极,所述玻碳电极表面电沉积金纳米粒子AuNPs,硫堇Thi通过静电吸附作用稳定吸附在AuNPs表面形成AuNPs
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Thi膜;转基因蛋白
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mAb抗体共价结合于AuNPs
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Thi膜上,以3
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5%BSA为封闭剂。2.根据权利要求1所述的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器,其特征在于,所述金纳米粒子AuNPs的用量为:以1
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1.5%HAuCl4溶液沉积3
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4圈,电位范围为:0V~1.1V,50mV/s,所述硫堇Thi的用量为5
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10μg。3.根据权利要求1所述的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器,其特征在于,所述转基因蛋白
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mAb抗体的用量为2.5
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3μg,所述封闭剂BSA的用量为5
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10μL。4.根据权利要求1
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3任一项所述的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器,其特征在于,所述转基因蛋白为PAT蛋白,所述转基因蛋白
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mAb抗体为PAT
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mAb抗体。5.如权利要求1所述检测转基因蛋白的无标记型AuNPs
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Thi电化学免疫传感器的制备方法,包括以下步骤:1)将清洗后的玻碳电极浸泡在HAuCl4溶液中,通过CV法在电极表面电沉积金纳米粒子;2)随后采用滴涂法将5
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10μL Thi在室温下修饰于沉积有金纳米粒子的玻碳电极表面,Thi通过静电吸附作用稳定吸附在AuNPs表面形成AuNPs
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Thi膜,并用0.25
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0.5%戊二醛室温活化30
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45min;3)接着将转基因蛋白
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mAb抗体滴加至步骤2)活化后的电极表面进行修饰,...
【专利技术属性】
技术研发人员:曾海娟,王金斌,杨倩雯,
申请(专利权)人:上海瑞丰农业科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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