用于治疗下肢外周动脉疾病的细胞悬液制造技术

本发明专利技术涉及自体或同种异体的，优选自体的骨髓衍生的成体白细胞的细胞悬液，所述骨髓衍生的成体白细胞优选来源自髂骨的嵴(或髂嵴)，所述细胞悬液富含单核细胞，意指细胞悬液中存在的多于25％的白细胞(WBC)是单核细胞，所述细胞悬液包含：A.选自包含或由以下组成的表单的单核细胞(MNC)：i.淋巴细胞群；ii.单核白细胞群；和iii.表达CD34的造血干细胞群；其中细胞悬液还包括：B.粒细胞；所述细胞悬液用于治疗或改善下肢外周动脉疾病。

Cell suspension for the treatment of peripheral arterial diseases of lower extremities

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗下肢外周动脉疾病的细胞悬液
本专利技术涉及成人骨髓源性细胞的细胞悬液，其可用于治疗或改善下肢外周动脉疾病，优选严重的肢体缺血。
技术介绍
下肢外周动脉疾病(PAD)包括由动脉粥样硬化、血栓栓塞和炎症过程引起的改变下肢动脉的结构和功能的各种血管疾病。然而，PAD的主要原因是动脉粥样硬化。症状性下肢PAD由血流不足导致供氧不足而引起。PAD与其他血管床的动脉粥样硬化血栓形成有关，包括心血管和脑血管系统。糖尿病(下称DM)的存在极大地增加了PAD的风险，加速了疾病的进程，使得糖尿病患者更容易发生缺血事件、血管功能受损、发病率和死亡率增加、以及生活质量受损(QoL)(Thiruvoipati等，2015)。实际上，PAD患者被认为是从无症状到间歇性跛行(IC)患者和CLI(严重肢体缺血)患者的异质性患者群。CLI是指动脉供血不足，使远端灌注压力降低到微循环和血液流向组织和营养受到严重干扰的程度的状态。轻微创伤、溃疡和感染可以共存，从而增加受影响组织的代谢需求，经常导致慢性不愈合性溃疡。它是一种以多级疾病、合并症负担高和寿命有限为特征的进行性疾病。虽然踝臂指数(ABI)用于诊断PAD并且是PAD严重程度的指标，但它与疾病的临床严重程度并不完全相关。因此，使用更广泛的临床症状通过临床实践中常规使用的两种分类系统Rutherford和Fontaine(HirschAT，2006)来对PAD的严重程度进行分类。PAD的临床严重程度范围从无症状到需要截肢的坏疽以及肢体缺血。PAD是一种病情的严重程度随着时间的推移而增加的进行性疾病。DM患者疾病进展更快。对PAD的症状以及对作为这些症状的原因的解剖学病变进行分级提供了一种客观测量，通过该测量在临床上追踪对象，并且重要的是，在临床研究中比较医学和介入治疗策略时提供一致性。Rutherford分类是用于描述PAD的常用临床分期系统，与Fontaine分类相似，但在血管医学领域的新出版物中更常引用。外周动脉闭塞性疾病通常以Fontaine分期(由RenéFontaine于1954年提出)分为从I期(无症状)到IV期(溃疡或或坏疽)。由Rutherford于1986年提出并于1997年修订的分类包括四个等级和七个类别，范围从0类(无症状)到6类(严重缺血性溃疡或坏疽)(表1)。表1：PAD的Fontaine和Rutherford分类*术语慢性临界性缺血涵盖II和III级以及第4、5和6类。在12％倾斜时以2英里/小时的速度行驶5分钟。AP＝踝压；PVR＝脉搏容积记录；TP＝趾压；TM＝经跖骨。CLI是一种以多级疾病、合并症负担高和寿命有限为特征的进行性疾病。泛大西洋介入协会(Trans-AtlanticInter-SocietyConsensus,TASC)2007年外周动脉疾病管理文件II(TASCII，2007)建议，术语CLI应该用于所有患有由客观证实的动脉闭塞性疾病而引起的慢性缺血性静息痛、溃疡或坏疽的患者。目前对CLI的定义包括患有继发于肢体血流严重受损的下肢静息痛、溃疡或坏疽持续超过两周的对象。它构成了Rutherford第4至6类(分别为缺血性静息痛、轻微组织缺失和主要组织缺失)或Fontaine第III级和IV级。CLI中潜在疾病的唯一治疗方法是血运重建。然而，由于缺乏活血管、先前手动血运重建手术失败、或合并症，相当一部分群体(估计在群体的50％至90％之间)不适合手动血运重建(手术旁路或血管内手术)。许多CLI患者具有多种可能会阻止他们进行手动血运重建的情况。最终，截肢通常是大部分这些患者剩余的唯一选择，其目的是控制难治性疼痛，预防坏疽进展或对抗感染。因此迫切需要新疗法。目前，对CLI患者的初始治疗通常包括评估受影响的(指数)肢体对通过手术旁路或使用血管内方法进行血运重建的适宜性。针对疾病的现有症状，特别是疼痛、溃疡和感染治疗所有患者。然而，疼痛管理通常是无效的，并且由于缺血性溃疡很少愈合，因此伤口处理通常集中在感染控制、预防恶化和肢体挽救上。CLI的整体治疗目标包括：·疼痛控制。·伤口愈合。·肢体挽救。·改善QoL，包括维持非卧床状态。·降低心脏病总体风险。本专利技术的细胞悬液特别用于CLI患者，特别是用于无法选择使用手术旁路或血管内方法进行血运重建的患有DM的CLI患者。对于这些患者，未满足的需求是最高的，因为没有治疗潜在疾病的治疗选择。用于这些患者的任何治疗都是症状性的：伤口护理、感染控制和疼痛控制。对于那些不适合手动血运重建的患者，随着疾病的进展，在对进行性坏疽、不受控制的感染或难治性疼痛的应答中，唯一的临床选择可能是截肢。在罹患CLI的PAD患者中，大约25％在一年内死亡(NICE，2012)。根据CLI的严重程度，一年原发截肢率为5％至40％，不适合血运重建、神经功能受损或卧床的患者中发生率最高。附图说明图1.制造本专利技术的细胞悬液的流程图。图2.在给药本专利技术的细胞悬液后第3、6、9和12个月，对照与治疗的对比(包括截肢和死亡)LOCF的Rutherford分类。图3.在本专利技术的细胞悬液给药后第3、6、9和12个月，三次递增剂量的效果(包括截肢和死亡)LOCF的Rutherford分类。图4.对于对照组和本专利技术的细胞悬液的三组(剂量)在第3、6、9和12个月Rutherford分类(对象的百分比)的改善。图5.按在第3、6、9和12个月患肢中的溃疡数分类的对象的比例(左图：对照组；右图：本专利技术的细胞悬液组)。图6.在图6中相对于基线呈现24个出现血管发生的病例中的三个的血管造影图像：动脉的纵向生长(图6A)、出现新血管(图6B)和靶向皮肤的侧支的横向生长(图6C)。图7.本专利技术的细胞悬液的产品制造过程的流程图。
技术实现思路
本专利技术所解决的问题是为患有下肢外周动脉疾病(PAD)的患者，优选CLI患者，更优选无法选择使用手术旁路或血管内方法进行血运重建的患有DM的CLI患者提供改进的替代治疗方案。本专利技术以如下文所述的方面和优选实施方式所定义的自体或同种异体成人骨髓源性细胞的细胞悬液的形式提供这种改进的替代治疗方案。因此，本专利技术的第一方面涉及自体或同种异体的，优选自体的成人骨髓源性白细胞的细胞悬液(下文中称为“本专利技术的细胞悬液”)，所述白细胞优选来源自富含单核细胞的髂骨的嵴(或髂嵴)，这意味着细胞悬液中存在的超过25％的白细胞(WBC)是单核细胞，所述细胞悬液包括：A.选自包含以下或由以下组成的表单中的单核细胞(MNC)：i.淋巴细胞群；ii.单核白细胞群；和iii.表达CD34的造血干细胞群；其中细胞悬液还包括：B.粒细胞；用于治疗或改善下肢外周动脉疾病。值得注意的是，一般而言，细胞群A)和B)又包含表达CXCR4的细胞群，CXCR4是迁移因子SDF1的受体，在该群体中，重要的是指出表达CD34和CXCR4的造血干细胞亚群的存在。此外，细胞群A)和B)又包含表达VEGFR2的另一细胞群，VEGFR2是参与血管生成和血管发生的血管生成因子VEGF的受体。最后，细胞群A.iii)又包含不表达CD38的细胞群，该细胞群是早期未定型造血干细胞。应注意，单核细胞(MNC)被认为是本专利技术细胞悬液的主要活性组分。特别地，本专利技术的细胞悬液的活性组分或成分是选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞悬液，其包含来源于人对象骨髓的4×10

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.26 EP 16382405.51.一种细胞悬液，其包含来源于人对象骨髓的4×108个至1.2×109个自体或同种异体白细胞，其中，在总数为4×108个至1.2×109个的白细胞中：i.20％至51％是淋巴细胞，并且3.9％至22.3％是单核白细胞；ii.1.4％至10％是表达CD34的造血干细胞；iii.白细胞总数的25.3％至83.3％是单核细胞；iv.16.7％至74.7％是粒细胞；v.白细胞总数的5.4％至38.8％表达CXCR4；vi.白细胞总数的0.07％至24.7％表达VEGFR2；vii.在表达CD34的造血干细胞总数中，7.7％至55.5％是不表达CD38的早期未定型造血干细胞，0.7％至10.3％是表达CD34和CXCR4的干细胞；和viii.红细胞与白血球细胞的最大比例为6.7，血小板与白血球细胞的最大比例为32，所述细胞悬液用于治疗或改善下肢外周动脉疾病。2.根据权利要求1所述的细胞悬液，其特征在于，所述白细胞总数中的32.3％至80.0％是选自由表达CD34细胞的淋巴细胞、单核细胞和造血干细胞组成的表单，并且20.0％至67.7％是粒细胞。3.根据权利要求1或2所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液包含5×108个至1.2×109个。4.根据权利要求1或2所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液包含8×108个至1.2×109个。5.根据权利要求1或2所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液包含9×108个至1.1×109个。6.根据权利要求1或2所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液包含9.5×108个至1.05×109个。7.根据权利要求1或2所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液包含9.8×108个至1.02×109个。8.根据权利要求1至7中任一项所述的细胞悬液，其特征在于，所述下肢外周动脉疾病是严重肢体缺血。9.根据权利要求1至8中任一项所述的细胞悬液，其特征在于，所述细胞悬液中的细胞悬浮在体积为5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔纳森·罗伯特·巴克利·杜佩雷，利斯贝特·德·乔，埃德温·J·瓦格纳，
申请(专利权)人：雷克斯吉尼罗生物科学公司，安达卢西亚健康服务部，安达卢西亚进步与健康公共基金会，
类型：发明
国别省市：西班牙,ES