一种组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法技术

本发明专利技术公开了一种组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法，所述细胞固定试剂的有效成分为C16H28O4N3。组织细胞固定方法的步骤如下：（1）、在组织细胞培养基中加入适量PBS缓冲液；（2）、将配置好的如权利要求2所述的细胞固定试剂加入PBS缓冲液中，所述细胞固定试剂与PBS缓冲液的体积分数比为1%‑20%，固定0.5‑4小时，本发明专利技术的细胞固定试剂毒性低，无挥发性，对组织细胞的固定效果较好，PBS缓冲液中可维持6个月以上的固定效果。本发明专利技术提供的固定方法与其他细胞固定方法相比较，突出优点为离子液体不挥发，对人体没有危害，另外具有操作简单，成本低，固定后细胞可长期保存于PBS水溶液中，且细胞固定效果较好。

A Kind of Tissue Cell Fixation Reagent and Tissue Cell Fixation Method

【技术实现步骤摘要】
一种组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法
本专利技术涉及一种组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法，属于生物

技术介绍
组织细胞固定剂的种类较多，目前常用的细胞固定剂主要有：醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)、醇类(常用乙醇)、其它(丙酮)。醛类：甲醛(福尔马林)应用最广，原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液PH降低，影响染色；醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。戊二醛，穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。多聚甲醛(常用4％)，可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。醇类：最常用的醇类固定剂是乙醇。其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。优点：穿透性强、抗原性保存好。缺点：脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。其它固定剂：丙酮，对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。上述细胞固定液都是传统挥发性溶剂，对人体也有一定的危害。
技术实现思路
为了克服上述不足，本专利技术提供了一种新的组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法，采用离子液体来代替传统的细胞固定剂。离子液体，通常也称室温离子液体，是在室温或低温下℃呈液态的盐。它一般由体积相对较大、不对称的有机阳离子和体积相对较小的无机阴离子所组成，由于阴阳离子数目相等，因而整体上显电中性。离子液体具有优良的物理化学性质以及可修饰、调变的阴阳离子结构。以离子液体作为反应体系的溶剂或催化剂，由于无蒸气压、液态温度范围宽，分离易于进行,兼有均相催化效率高、多相催化易分离的优点，且可以循环使用，近年受到了各领域学者的广泛关注。本专利技术的技术方案如下：一种组织细胞固定试剂，所述细胞固定试剂是一种离子液体，其有效成分为C16H28O4N3，化学结构式为：所述细胞固定剂为C16H28O4N3与水的混合液。C16H28O4N3与水的混合液的体积分数比为1％-20％。优选体积分数比为10％。一种组织细胞固定方法，所述步骤如下：(1)、在组织细胞培养基中加入适量PBS缓冲液；(2)、将配置好的如权利要求2所述的细胞固定试剂加入PBS缓冲液中，所述细胞固定试剂与PBS缓冲液的体积分数比为1％-20％，优选10％；固定0.5-4小时，优选3小时。本专利技术所达到的有益效果：本专利技术提供的离子液体具有催化性能高、易与产物分离、易回收、可重复使用、使用方便等优点，是传统挥发性溶剂以及催化剂的理想替代品，己经成为一种绿色材料或介质，为材料化学家发展新的“软”功能材料提供了新的契机，同时也为化学家寻找一种绿色的介质提供了新的思路。而且，本专利技术的离子液体毒性低，无挥发性，对组织细胞的固定效果较好，PBS缓冲液中可维持6个月以上的固定效果。本专利技术提供的固定方法与其他细胞固定方法相比较，突出优点为离子液体不挥发，对人体没有危害，另外具有操作简单，成本低，固定后细胞可长期保存于PBS水溶液中，且细胞固定效果较好。附图说明图1是小鼠C2C12细胞初始固定C2C12细胞后AO-EB染色图；图2是小鼠C2C12细胞被固定6个月后AO-EB的染色图；图3是小鼠C2C12细胞被固定6个月后的明暗场图一；图4是小鼠C2C12细胞被固定6个月后的明暗场图二。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。一种组织细胞固定试剂，所述细胞固定试剂是一种离子液体，其有效成分为C16H28O4N3，化学结构式为：所述细胞固定剂为C16H28O4N3与水的混合液。C16H28O4N3与水的混合液的体积分数比为1％-20％。优选体积分数比为10％。一种组织细胞固定方法，所述步骤如下：(1)、在组织细胞培养基中加入适量PBS缓冲液；(2)、将配置好的如权利要求2所述的细胞固定试剂加入PBS缓冲液中，所述细胞固定试剂与PBS缓冲液的体积分数比为1％-20％；优选10％；固定0.5-4小时，优选3小时。实施例：选取小鼠细胞(C2C12)，吸出其中的培养基，添加适量的PBS缓冲液，加入本专利技术所述的离子液体，使PBS中离子液体的体积分数为10％，固定时间为3小时，AO-EB的染色图如图1所示。固定后，吸出含有离子液体的PBS缓冲液，再用PBS缓冲液浸泡固定后的细胞3-5分钟，至此，细胞固定完成，可继续下一步染色。如图2所示为C2C12细胞被固定6个月后AO-EB的染色图。如图3和如图4所示为C2C12细胞被固定6个月后的明暗场图。从图3和图4中，我们可以观察到，细胞被离子液体固定后，形态完整，饱满，并且未发现明显的细胞外形皱缩，和细胞外形的破坏。从图2中我们可以观察到，细胞核形态完整饱满，细胞质保留完整，且染色均匀。从实施中我们可以看到细胞固定效果比较好，并且细胞保存时间也较长。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组织细胞固定试剂，其特征在于，所述细胞固定试剂的有效成分为C16H28O4N3，化学结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种组织细胞固定试剂，其特征在于，所述细胞固定试剂的有效成分为C16H28O4N3，化学结构式为：2.如权利要求1所述的一种组织细胞固定试剂，其特征在于：所述细胞固定剂为C16H28O4N3与水的混合液。3.如权利要求2所述的一种组织细胞固定试剂，其特征在于：所述C16H28O4N3与水的混合液的体积比为1％-20％。4.如权利要求3所述的一种组织细胞固定试剂，其特征在于：所述C16H28O4N3与纯水的混合液的优选体积分数比为10％。5.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：王樱达，王郑，朱晓璐，王琳琳，刘倩，陈建树，
申请(专利权)人：王樱达，
类型：发明
国别省市：山东,37