本发明专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌是（Bacillus subtilis）XWS‑8，该菌株已于2011年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5590。并提供了降解纤维素领域中的应用。试验表明，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XWS‑8 CGMCC No.5590产纤维素酶的活力明显高于其他细菌，其对纤维素降解能力强。
A Bacillus subtilis strain and its application
The invention provides a Bacillus subtilis XWS 8 strain, which has been stored in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Commission on December 14, 2011, and the storage number is CGMCC No. 5590. The application in the field of cellulose degradation is also provided. The results showed that the activity of cellulase produced by Bacillus subtilis XWS 8 CGMCC No. 5590 was significantly higher than that of other bacteria, and its cellulose degradation ability was strong.
【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及一株芽孢杆菌及其应用，尤其涉及一株枯草芽孢杆菌及其在降解纤维素领域中的应用。
技术介绍
秸秆是纤维组分含量很高的农作物残留物，利用纤维素分解菌将纤维素降解成短链糖，提供牲畜对秸秆饲料的消化吸收率，是当前饲料业的一个发展方向。目前研究较多的纤维素降解菌是霉菌，其中木霉、曲霉、根霉和青霉具有较强的酶活力，尤以绿色木霉、里氏木霉、康氏木霉为典型，是目前公认的较好的纤维素酶生产菌。但霉菌为好气性微生物，而饲料发酵是在少氧或缺氧环境中进行的，故产纤维素酶活高的厌氧及兼性厌氧细菌更具有应用上的现实意义。产芽孢的细菌因芽孢的形成，抗逆性强，能抵御不良环境，在耐酸、耐碱、耐高温等方面有明显的优势，更利于实际操作和工业生产，因此成为目前研究产纤维素酶微生物的一个重要方向。但是目前研究出的产纤维素酶且适用于秸秆发酵制备动物饲料的菌株并不多，且存在产酶成本高、酶活性差、适用的pH范围小等问题，因此急需寻找更多产酶活性高且稳定，作用范围更广泛微生物菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株能够降解纤维素的枯草芽孢杆菌。本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌是（Bacillussubtilis）XWS-8，该菌株已于2011年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.5590。枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590菌体菌体呈杆状，革兰氏染色呈阳性，菌体长约3.1μm，宽约0.9μm，芽孢呈椭圆形中生，不膨大，长约2.0μm，宽约0.9μm，生长温度30~37℃。生理生化特性如表1所示：表1枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590的生理生化性质注：“+”表示阳性，“–”表示阴性枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590的基因组DNA具有如下特异序列：AGGTGACCGTCGGGGTGCTGAAGAATATCGGAGATACAGGGTCTGACTTTGCATCACTGA60CAGATGACATAGAGGAAGTGACGCTGGATAAGGGCAGCCCCGGCAGTAAAATCGCCGTGC120TTGAAGTGGACGGCACGATTGAGGATAACGGCGGGTCCGCTGGCCTGCTCAGCTCAGGCG180GGTATGATCACAGATCATTTTTAAAACAGGTTGAGCGTGCGAAAGAAGACAAAAGCGTCA240。本专利技术的另一个目的是提供枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590在降解纤维素领域中的应用，尤其是将该菌株用于秸秆发酵中降解纤维素以制取动物饲料。枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590产纤维素酶的活力明显高于其他细菌，其对纤维素降解能力强。附图说明图1菌体形态照片；图2纤维素酶活力标准曲线图。具体实施方式实施例一：枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590的筛选与保藏1、培养基CMC-Na培养基（g/L）：CMC-Na5.0，蛋白胨5.0，酵母膏0.5，KH2PO41.5，MgSO40.2，NaCl5.0，琼脂15.0g，pH7.0，蒸馏水配制。刚果红纤维素钠培养基（g/L）：CMC-Na5.0，蛋白胨5.0，酵母膏0.5，KH2PO41.5，MgSO40.2，NaCl5.0，琼脂15.0g，刚果红0.2，pH7.0，蒸馏水配制。NA培养基（g/L）：牛肉膏5.0，蛋白胨10.0，NaCl5.0，pH7.2~7.4，琼脂20，蒸馏水配制，用于菌株的固体培养。NB培养基（g/L）：牛肉膏5.0，蛋白胨10.0，NaCl5.0，pH7.2-7.4，蒸馏水配制，用于菌株的固体培养。2、微生物菌群来源新鲜牛粪，取自河北农业大学牧场健康奶牛直肠或粪便。3、初筛1）取新鲜牛粪10.0g于试管中，在水浴锅内80℃水浴10分钟，杀死菌体。2）称取5.0g处理过的牛粪于150mLNB培养基中37℃170r/min培养48小时。将培养后的发酵液进行梯度稀释，依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。分别取稀释到10-4、10-5、10-6的发酵液20-30μL到刚果红纤维素钠平板中，三角刮涂布，37℃恒温箱中倒置培养48小时。3）观察平板，标记出圈的菌种、测量透明圈直径并记录试验结果。本试验筛选具有水解圈的菌株，经筛选得到既产纤维素酶又产芽孢的菌株17株。4、复筛对初筛菌株中水解圈直径较大的菌株进行液体发酵，测定发酵48小时后发酵上清液的酶活性，结果见表2(酶活力测定方法如实施例四所示)。表2复筛测定的酶活力结果由表2可见，菌株XWS-8酶活力最强。该菌株已于2011年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.5590。实施例二：枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590的种属鉴定根据菌株的菌落形态特征、菌体形态特征、革兰氏染色性状、芽孢染色性状，有关生理生化鉴别试验，参照《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》进行属和种的鉴定。1、菌落特征和菌体形态特征根据NA培养基上生长的菌株XWS-8的菌落形态，初步判断其为细菌菌落，培养24h的菌落为不透明的暗黄色，呈近圆形，边缘不整齐，表面有皱褶，中间有突起。菌株XWS-8经染色后置于光学显微镜下观察，菌体呈杆状，革兰氏染色呈阳性，菌体长约3.1μm，宽约0.9μm，芽孢呈椭圆形中生，不膨大，长约2.0μm，宽约0.9μm，如图1所示。2、生理生化性质鉴定糖、醇类发酵培养基：(NH4)2HPO41.0g，KCl0.2g，MgSO40.2g，酵母0.2g，琼脂5~6g，糖或醇类10g，蒸馏水1000mL，溴甲酚紫(0.04%)15mL，pH7.0~7.2。甲基红（M.R）试验培养基：蛋白胨5.0g，葡萄糖5.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0~7.2。V-P试验培养基：蛋白胨5.0g，葡萄糖5.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0~7.2。淀粉水解培养基：蛋白胨10.0g，牛肉膏5.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，可溶性淀粉2.0g，pH7.2~7.4。硝酸盐还原试验培养基：KNO31.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，牛肉膏3.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0~7.6。脲酶培养基：NaCl5.0g，KH2PO42.0g，蛋白胨1.0g，葡萄糖1.0g，酚红（0.2%酚红溶液）6.0mL，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL，pH6.8~6.9。吲哚试验培养基：1.0%胰胨水溶液，pH7.2~7.6。苯丙氨基酸脱氨酶培养基：NaCl5.0g，Na2HPO41.0g，DL-苯丙氨酸2.0g（或L-苯丙氨酸）1.0g，酵母膏3.0g，琼脂12.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0。明胶液化试验培养基：蛋白胨5.0g，明胶100~150g，蒸馏水1000mL，pH7.2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XWS‑8 CGMCC No.5590。
【技术特征摘要】
1.枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590。2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）XWS-8CGMCCNo.5590，其特征在于，所述菌株的基因组DNA具有如下特异序列：AGGTGACCGTCGGGGTGCTGAAGAATATCGGAGATACAGGGTCTGACTTTGCATCACTGA60CAGATGACATAGAGGAAGTGACGCTGGATAAGGGCAGCCCCGGCAGTAAAAT...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱宝成，李术娜，李红亚，王书香，王全，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北,13
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