【技术实现步骤摘要】
铁蛋白化学发光检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及体外诊断试剂的
,尤其涉及一种铁蛋白化学发光检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
铁蛋白由蛋白壳和铁核两部分组成,蛋白壳由24个高度对称的亚基形成一个球形空腔结构,内径通常为7-8nm,外径为12-13nm,厚度2-2.5nm;铁核由数千个氢氧化铁分子和数百个磷酸盐分子组成。每个铁蛋白亚基外形成空心的柱状(长约5nm,直径约2.5nm)且由一个两两成反向平行的4个α螺旋簇(A、B和C、D)、C末端第五个较短α螺旋(E)以及N末端的伸展肽端(EP)构成。B和C螺旋之间由一段含18个氨基酸的BC环连接,E螺旋位于4α螺旋簇的尾端并与之成60°夹角。每两个铁蛋白亚基反向平行形成一组,再由这十二组亚基对构成一个近似正八面体,成4-3-2重轴对称的球状分子。每个铁蛋白分子形成12个二重轴通道、8个三重轴通道、6个四重轴通道,这些通道被认为是铁蛋白内部与外部离子出入铁蛋白的必经之路,起着联系铁蛋白内部空腔与外部环境的作用。铁蛋白的分子量约为450kDa,沉降系数为17-18S。对于哺乳动物来说,铁蛋白通常由H和L两种类型的亚基组成。H亚基为重链,分子量约为21KD,L亚基为轻链,分子量约为19KD,两种亚基的氨基酸序列具有55%的相似度,而功能截然不同。H型亚基包含一个由His65、Glu27、Glu61、Glu107、Tyr34、Glu62和Gln141七个保守的氨基酸组成的亚铁氧化中心,主要负责亚铁离子的快速氧化,1个亚铁氧化中心可同时结合2个Fe2+离子;而L型亚基缺乏这个活性中心,但含有一个成核中心,负责 ...
【技术保护点】
1.铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,包括以下试剂:R1:含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体;R2:含有生物素标记的铁蛋白抗体的液体;R3:含有吖啶酯标记的铁蛋白抗体的液体;其中,R1中磁微粒与链霉亲和素的质量比为1:10‑1:20;链霉亲和素包被的磁微粒的浓度为10mg/ml;R2中铁蛋白抗体与生物素的摩尔比为1:5‑1:10;生物素标记的铁蛋白抗体的浓度为1mg/ml;R3中铁蛋白抗体与吖啶酯的摩尔比为1:5‑1:10;吖啶酯标记的铁蛋白抗体的浓度为1mg/ml。
【技术特征摘要】
1.铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,包括以下试剂:R1:含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体;R2:含有生物素标记的铁蛋白抗体的液体;R3:含有吖啶酯标记的铁蛋白抗体的液体;其中,R1中磁微粒与链霉亲和素的质量比为1:10-1:20;链霉亲和素包被的磁微粒的浓度为10mg/ml;R2中铁蛋白抗体与生物素的摩尔比为1:5-1:10;生物素标记的铁蛋白抗体的浓度为1mg/ml;R3中铁蛋白抗体与吖啶酯的摩尔比为1:5-1:10;吖啶酯标记的铁蛋白抗体的浓度为1mg/ml。2.根据权利要求1所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,还包括7个浓度的校准品,校准品中含有铁蛋白的浓度分别为0ng/ml,6.00~8.00ng/ml、40.00~45.00ng/ml、200.00~220.00ng/ml、430~450ng/ml、900.00~1100.00ng/ml及2000.00~2200.00ng/ml。3.根据权利要求1所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,还包括两个浓度的质控品,其中,高浓度质控品中含有铁蛋白的浓度为290.00~310.00ng/ml,低浓度质控品中含有铁蛋白的浓度为19.00~21.00ng/ml。4.根据权利要求2或3所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,校准品或质控品的缓冲液中含有0.1mol/L的PB、0.15mol/L的氯化钠、1%的牛血清白蛋白及0.05%的tween-20。5.根据权利要求1所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,R1的制备方法为:取磁微粒,用20mMPB缓冲液清洗3次,然后稀释至10mg/ml,按照磁微粒与链霉亲和素质量比1:10-1:20的比例添加链霉亲和素,37℃孵育18-24h后,置于磁分离架上分离磁珠,去上清,用20mMPB缓冲液清洗3次,加入封闭液,37℃孵育18-24h后,置于磁分离架上分离磁珠,去上清,用20mMPB缓冲液清洗3次,用20mMPB缓冲液稀释至10mg/ml,2-8℃保存备用,得到含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体试剂。6.根据权利要求1所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,R2的制备方法为:取铁蛋白抗体,首先用20mMPB缓冲液置换铁蛋白抗体保存液,用20mMPB缓冲液稀释至1mg/ml,将生物素按照抗体与生物素摩尔比1:5-1:10进行添加,37℃孵育2-4h进行标记,然后加入封闭液,37℃孵育2-4h,最后对蛋白进行纯化,得到含有生物素标记的铁蛋白抗体的液体试剂。7.根据权利要求1所述的铁蛋白化学发光检测试剂盒,其特征在于,R3的制备方法为:取铁蛋白抗体,首先用20mMPB缓冲液置换铁蛋白抗体保存液,用20mMPB缓冲液稀释至1mg/ml,将吖啶酯按照抗体与吖啶酯摩尔比1:5-1:10添加,37℃孵育2-4h进行标记,然后加入封闭液,37℃孵育2-4h,最后对蛋白进行纯化,得到含有吖啶酯标记的铁蛋白抗体的液体试剂。8...
【专利技术属性】
技术研发人员:韩美玉,王立英,高威,孙成艳,何浩会,
申请(专利权)人:迪瑞医疗科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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