体液AGEs自身抗体在制备糖尿病肾病早期诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了体液AGEs自身抗体在制备糖尿病肾病早期诊断试剂中的应用。体液中AGEs自身抗体作为生物标志物在制备糖尿病肾病病人早期诊断试剂中的应用。一种基于ELISA双抗体夹心法的糖尿病肾病的早期诊断试剂，包含AGEs抗原和过氧化物酶标记的抗人IgG抗体。本发明专利技术提供的用于双抗体夹心法测定体液AGEs自身抗体的糖尿病肾病的早期诊断试剂，可以在半自动或全自动的分光光度计等检测设备上使用，而且检测灵敏度高，特异性高，操作简便，可以得到切实的推广使用，将使及时诊断和跟踪糖尿病肾病的发生和进程成为可能，极大地改善目前无法对糖尿病到糖尿病肾病进行预判，早期诊断以及定时跟踪的窘境，具有重大的社会经济效益。

【技术实现步骤摘要】
体液AGEs自身抗体在制备糖尿病肾病早期诊断试剂中的应用
本专利技术属于生物医药检测
，涉及体液AGEs自身抗体在制备糖尿病肾病早期诊断试剂中的应用，具体涉及一种以体液AGEs自身抗体作为生物标志物在糖尿病肾病病人早期诊断中的应用。
技术介绍
糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病的主要微血管并发症，也是终末期肾病的最常见病因及心血管事件的独立危险因素之一。糖尿病患者并发DN的病死率是未并发DN者的30倍。糖尿病病人肾病的发生率与糖尿病的病程有关。1型糖尿病病人病程＜5年者DN发生率较低，但病程20～25年者发生率为40％～50％。2型糖尿病病人病程<5年，其DN患病率为7％～10％，病程20-25年，患病率20％～35％，病程>25年，患病率可达50％以上。在美国，由DN引起的终末期肾衰竭(ESRD)接近50％，DN已经成为ESRD的首要原因。而亚洲由DN造成的终末期肾衰竭也在逐年上升。中国的情况也不乐观，DN是引起ESRD的第二主因，仅次于肾炎，但该比例在逐年上升，主要原因是由于我国糖尿病患病率不断上升，而且导致糖尿病到糖尿病肾病的因素复杂，机制不清，同时缺乏可用于对其早期诊断和实时跟踪的特异生物标志物，知晓率较低。糖尿病患者一旦发生肾脏损害，出现持续性蛋白尿则病情常不可逆转，往往发展至终末期肾衰竭。因此，寻求早期诊断和有效的治疗是临床和基础研究共同关注的问题。根据DN的病程和病理生理演变过程，把DN可分为5个期。I期：肾小球高滤过和肾脏肥大期，肾小球滤过率(GFR)高于正常的25％～40％，肾脏体积增大约20％，此期与高血糖水平一致，没有病理组织学损伤，血糖控制后可以得到部分缓解。Ⅱ期：运动后微蛋白尿期，尿蛋白排泄率正常或运动后增高。可有基底膜增厚和系膜扩张。Ⅲ期：持续性微量白蛋白尿期，此期GFR仍能维持正常，病变仍为可逆性，若不积极干预，大多数患者病情逐渐进展。Ⅳ期：临床糖尿病肾病期或显性蛋白尿期，GFR多下降，有典型DN病理改变。Ⅴ期：肾功能衰竭期，病理为肾硬化症。由于糖尿病肾病早期可无症状，多数糖尿病肾病早期患者不去就诊，当出现症状时往往已发展到不可逆转的糖尿病肾病中晚期而失去治愈的可能。尿白蛋白的出现是临床上对DN的最早可检测阶段，一旦出现临床蛋白尿，肾功能将呈进行性下降。研究结果表明DN早期接受治疗的2型糖尿病患者从正常或微蛋白尿阶段过渡到蛋白尿阶段的比例大大降低，因此尽早发现微量白蛋白尿，进行有效的治疗，可以延缓或逆转病情，避免临床DN的发生发展。测定24h尿微量白蛋白是目前常用的诊断早期DN的方法，国内外大量研究证实24h尿微量白蛋白可以反映肾小球早期的轻微损害，是目前国内外公认的诊断早期DN的一项敏感可靠的指标。但是有研究发现，部分糖尿病患者尿白蛋白水平在正常范围时发生了肾功能的改变。因此尿蛋白作为标志物漏诊率较高。此外，近些年来发现，由于糖尿病患者在肾功能早期病变过程中，有一些尿中的特种蛋白，如尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)、转铁蛋白(TRF)等已往往呈显著增高，虽然这些蛋白质在尿中的绝对含量很低，而且绝大部分(尿清蛋白除外)即使到疾病的晚期也不能构成尿总蛋白的显著增高，故测定上述尿中特种蛋白，对早期糖尿病肾病的诊断会有一定帮助，但这些标志物对糖尿病肾病的预测灵敏度和特异性相对较差，临床认可度和使用率较低。因此，DN作为糖尿病患者最常见的一种慢性并发症，早期正确诊断及干预治疗尤为重要。虽然DN早期检测指标很多，但临川仍缺乏行之有效的、无创性的、简便易行的DN早期检查方法来帮助患者早期诊断，预防DN的发生发展，减少终末期肾病的发生。因此寻找DN早期诊断标志物不仅将会减轻患者的痛苦和社会的经济负担，还可为临床提供更多的理论依据。晚期糖基化终产物(glycationendproducts，AGEs)是一种典型异构性的物质，葡萄糖可以在非酶促条件下化学性地通过Schiff碱基反应，共价相连于蛋白质游离的氨基团上，然后经异构化形成稳定的酮胺键结合物，即Amodori产物。后者再经一系列的脱水、浓缩、裂解、氧化、环化反应，使蛋白质发生分子内和分子间的交联，形成一种复杂稳定的分子结构，即AGEs。AGEs呈高度异质性，其主要包括羧甲基赖氨酸(CML)、戊糖素(Pentosidine)、羟甲基赖氨酸(CEL)等。近年来随着针对AGEs、AGEs在糖尿病肾病发病进程中作用机制的研究进展，发现DN患者肾活检系膜区、肾血管壁、肾小管壁、肾间质AGEs染色明显，且DN病理损害越重，染色越深，表明AGEs在糖尿病肾病的发展进程中可能发挥着重要的作用。虽然现有的研究表明AGEs与糖尿病肾病相关，但是其分子机制尚未完全阐明。另外，在均存在高血糖的情况下，为何有的糖尿病患者进展为糖尿病肾病，而有的糖尿病患者终身不进展为糖尿病肾病的原因尚不清楚。鉴于上述原因，专利技术人首先从AGEs的致病机制出发，揭示AGEs在一定条件下可被抗原递呈细胞吞噬，处理并递呈抗原给T细胞和B细胞，最后产生针对AGEs的自身抗体。由于自身抗体可以介导补体系统和T细胞对表达抗原的分子和细胞进行攻击，针对AGEs的自身抗体识别肾脏足细胞、基底膜和系膜细胞表面的AGEs，从而引起肾损伤，导致糖尿病肾病。我们所揭示的AGEs致病机理如图1所示。在此基础上，本专利技术研表明糖尿病肾病患者和模型小鼠的血清中针对足细胞和基底膜的自身抗体不仅是糖尿病肾病发生发展的重要因素，同时也可作为早期诊断糖尿病发展到糖尿病肾病的生物标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种体液AGEs自身抗体在制备早期诊断糖尿病肾病试剂中的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：体液中AGEs自身抗体作为生物标志物在制备糖尿病肾病病人早期诊断试剂中的应用。体液AGEs自身抗体作为检测靶点在制备糖尿病肾病病人早期诊断试剂中的应用。所述的体液优选血清、血浆或全血。所述的诊断试剂优选基于ELISA双抗体夹心法的诊断试剂或基于免疫层析双抗体夹心法的诊断试剂。一种基于ELISA双抗体夹心法的糖尿病肾病的早期诊断试剂，其特征在于包含AGEs抗原和过氧化物酶标记的抗人IgG抗体。一种血清中AGEs自身抗体的糖尿病肾病早期诊断免疫层析试纸，其特征在于试纸检测带包被胶体金标记的体液AGEs自身抗体。有益效果：DN是糖尿病常见的重要并发症，是糖尿病致死、致残的主要原因。如诊治不及时，DN发展到肾病末期时，将只能采用透析甚至是肾移植。目前DN的发病机制仍不清楚，但越来越多的研究证据表明，AGEs在DN的发展进程中发挥着重要的作用。本专利技术研究首先表明在糖尿病肾病早期患者的肾小球足细胞、系膜和基底膜存在AGEs及其主要形式CML(图2)。体外实验证明肾小球足细胞具备AGEs加工和递呈功能(图3)。在此基础上，专利技术人发现在糖尿病肾病早期患者的血清中即存在针对AGEs的自身抗体(图4)。进一步地，专利技术人拿糖尿肾病早期患者血清标记肾组织，发现血清中存在特异性针对足细胞、系膜和基底膜的AGEs自身抗体(图5)。此外，本专利技术还进一步发现血清中的这类自身抗体可以作为生物标志物对糖尿病肾病进行早期诊断和定时跟踪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.体液AGEs自身抗体作为生物标志物在制备糖尿病肾病病人早期诊断试剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.体液AGEs自身抗体作为生物标志物在制备糖尿病肾病病人早期诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的体液为血清或血浆。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的诊断试剂为基于ELISA双抗体夹心法的诊断试剂或基于免疫层析双抗体夹...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾科，李丽民，
申请(专利权)人：连步生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32