一类促胶原分泌超短肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一类促胶原分泌超短肽及其应用，属于生物医学技术领域。所述的两种促胶原蛋白分泌超短肽Magin‑FL和Purin‑WH3，具有促进胶原蛋白合成能力，并且具有极强的抗氧化、抗衰老活性、无细胞毒性、无溶血活性、制备方法简单等特点，因此其在用于制备治疗受损表皮的修复与再生，如治疗烧伤、烫伤、皮肤溃疡等药物，以及代替EGF用于皮肤修复、刺激皮肤胶原蛋白增生的抗衰老、抗氧化美容护肤品新原料等领域，并且它的作用可能还不止局限于此。超短肽Magin‑FL、Purin‑WH3分子量小、结构简单、采用化学合成方法的成本极低，相比每克售价近200万美元的EGF具有突出有益的特点。

A Class of Ultrashort Peptides Promoting Collagen Secretion and Its Application

The invention provides a kind of ultrashort peptide for promoting collagen secretion and its application, which belongs to the field of biomedical technology. The two kinds of ultrashort peptides Magin FL and Purin WH3, which promote collagen synthesis, have strong antioxidant, anti-aging, non-cytotoxicity, non-hemolytic activity and simple preparation method. Therefore, they are used to prepare drugs for repairing and regenerating damaged epidermis, such as treating burns, scalds, skin ulcers, and so on. Instead of EGF, it can be used in the fields of skin repair, anti-aging, anti-oxidant cosmetic products and new raw materials to stimulate collagen proliferation of skin, and its role may not be limited to this. Magin FL and Purin WH3 have small molecular weight, simple structure and low cost of chemical synthesis. Compared with EGF, which sells for nearly $2 million per gram, they have outstanding and beneficial characteristics.

【技术实现步骤摘要】
一类促胶原分泌超短肽及其应用
本专利技术涉及一类促胶原分泌超短肽及其应用，属于生物医学

技术介绍
衰老是任何生物生命过程的必然规律，随着世界范围内人口老龄化问题的日益突出，抗衰老领域已成为全球关注的热点。皮肤是机体衰老过程中最为明显的器官之一，随着年龄的增长，皮肤会发生退行性变化，例如弹性消退、含水量减少、萎缩、出现皱纹等。皮肤衰老是皮肤组织一系列复杂的生物学过程，是所有内源性生理因素和外源性环境因素共同作用的结果。衰老不仅会影响正常皮肤组织结构和生理功能，而且，也会直接影响皮肤外层的外观和容貌。皮肤是由表皮层、真皮层和皮下脂肪组成。其中，真皮层中的成纤维细胞分泌产生胶原蛋白，以维持皮肤的强度和弹性，与皮肤的老化问题直接相关。胶原蛋白是构成人体结缔组织的蛋白质,占人体总蛋白含量的三分之一还多,而皮肤中的胶原蛋白则高达75％以上，其中主要含有Ⅰ型胶原蛋白(CollagenI)。胶原蛋白的分子量为30万道尔顿，它是由三条肽链构成，其中Ⅰ型胶原蛋白是由2条α1和1条α2亚基结合而成的三螺旋结构，并互相盘绕成螺旋结构。胶原蛋白的存在与皮肤健康程度，保水及弹性等有着密切的关系。皮肤衰老的组织学改变主要是胶原蛋白的减少和流失。衰老皮肤中胶原蛋白流失主有两方面原因，一方面是皮肤细胞合成的胶原蛋白量减少，另一方面是被基质金属蛋白酶家族(MMPs)中的MMP-1不断降解。由于遗传因素等不可抗内因紫外线、辐射等外界刺激，皮肤会逐渐老化，进而影响到胶原蛋白的合成和降解过程。当胶原蛋白降解的速度大于其生成的速度时，皮肤便会出现松弛、产生皱纹等明显衰老特征近年来具备抗老化的功能制剂一直受到相关学科领域，特别是医疗保健、美容化妆品科学等领域的高度重视和普遍关注。目前已经研制出种类繁多、剂型多样、琳琅满目的皮肤美容抗衰老化妆品。但是，市面上存在的胶原蛋白相关产品，皆以直接补充胶原蛋白为主要功能，然而，胶原蛋白分子量大，涂抹方式几乎无法使其穿透皮肤角质层作用于真皮层的成纤维细胞；若为注射方式直接补充胶原蛋白，由于其在体内会被降解则需多次注射，过程繁复、成本高，同时注射胶原蛋白造成免疫排斥反应又是一大风险；若以食用，胶原蛋白会在肠道内被消化液分解成小分子多肽或单个氨基酸，因此实际补充胶原蛋白的效果有限。自从人们发现生物活性肽以来，特别是皮肤组织细胞相关的生长因子多肽、胶原多肽、谷胱甘肽、肌肽等天然活性肽、基因重组多肽分子和化学合成多肽等被开发并成功应用于皮肤美容抗衰老化妆品之后，人们发现部分活性肽可以直接激活皮肤细胞自身合成胶原蛋白，从而达到最为有效地促进补充胶原蛋白含量，从根本上提升皮肤自身的活力，激活皮肤细胞合成胶原蛋白，促进皮肤修复、抵抗皮肤衰老。生物活性肽就是指一类对生物机体的生命活动有益或是具有生理作用的肽类化合物,是一类相对分子质量小于6000Da，具有多种生物学功能的多肽。生物活性肽的生物学意义主要体现在其吸收机制优于氨基酸和具有氨基酸不可比拟的生理功能两个方面。尤其是一些小分子的超短肽，由于其具有超短的序列、小分子量，因此更是具备高安全性、易于合成、利于皮肤吸收等优势特征，并且兼具活性肽本身的高生物活性、调节细胞生理功能和代谢活动进而从本质上改变皮肤问题，同时也是大众认为最为安全高效的抗老化原料之一，因此超短肽在皮肤美容修复、医疗保健以及食品、药品添加剂等方面具有十分重要的应用价值和开发前景。
技术实现思路
本专利技术涉及一类促胶原分泌超短肽，包括两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3在制备抗衰老抗皱化妆品、医用改善、调理及/或修补皮肤剂、抗氧化药物、食品添加剂等领域的应用。本专利技术的技术方案：一类促胶原分泌超短肽，包括两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3；所述的超短肽Magin-FL：一种直链小肽，分子量为1205.42Da，等电点是9.02，含有10个氨基酸残基，全序列的一级结构为：Phe-Phe-Arg-Thr-Ser-Cys-Arg-Ser-Val-Cys；所述的超短肽Purin-WH3：一种直链小肽，分子量为672.88Da，等电点是9.31，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构：Val-Val-Lys-Cys-Pro-Lys。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3，具有促进胶原分泌活性、抗氧化及抗衰老活性，对DPPH自由基以及ABTS·+正离子自由基清除率均十分明显；并且通过双荧光素报告系统检测超短肽Magin-FL对于I型胶原蛋白有极强转录活性，浓度为5μg/ml时即可将其转录活性提高1.62倍；同时，通过WesternBlotting检测超短肽Purin-WH3提高I型胶原蛋白的表达水平。此外，两种超短肽具有分子量小、细胞毒性低、无溶血活性、结构简单、易于制备等特点，因此将其应用在促胶原分泌、抗氧化、抗衰老化妆品或医疗、保健品等领域的开发中。附图说明图1是两种超短肽对HFF-1细胞的毒性图。图2(a)是pGL3-COLIα2的质粒图谱图。图2(b)是phRL-TK的质粒图谱图。图3是HEK293细胞中超短肽Magin-FL对pGL3-COLIα2转录活性的影响图。图4是超短肽Purin-WH3对UVA照射成纤维细胞后Col1蛋白表达的影响图。图中：具体实施方式以下结合附图和技术方案，进一步说明本专利技术的具体实施方式。实施例1两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3的化学合成：(1)两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3的化学合成方法：根据超短肽氨基酸序列，用自动多肽合成仪(433A,AppliedBiosystems)合成其全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐。(2)分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)。(3)纯化的两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。超短肽Magin-FL：一种直链小肽，分子量为1205.42Da，等电点是9.02，含有10个氨基酸残基，全序列的一级结构为：Phe-Phe-Arg-Thr-Ser-Cys-Arg-Ser-Val-Cys；超短肽Purin-WH3：一种直链小肽，分子量为672.88Da，等电点是9.31，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构：Val-Val-Lys-Cys-Pro-Lys。实施例2溶血活性测定：将采集的健康人血与阿氏液混合抗凝，生理盐水洗涤2次并重悬成107-108cell/ml的悬浮液。上述稀释好的红细胞悬液分别与溶解于生理盐水的超短肽样品混合，37℃保温30min，再于1000rpm离心5min，上清液于540nm测吸收值。阴性对照使用生理盐水，阳性对照使用TritonX-100，溶血百分比按以下公式计算：溶血百分比H％＝(A样品-A阴性对照)/A阳性对照×100％。表1.两种超短肽溶血活性结果表明两种促胶原分泌超短肽Magin-FL、Purin-WH3浓度为160μg/ml时的溶血百分比为0.41％、1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类促胶原分泌超短肽，包括两种促胶原分泌超短肽：Magin‑FL和Purin‑WH3，其特征在于：所述的促胶原分泌超短肽Magin‑FL：一种直链小肽，分子量为1205.42Da，等电点是9.02，含有10个氨基酸残基，全序列的一级结构为Phe‑Phe‑Arg‑Thr‑Ser‑Cys‑Arg‑Ser‑Val‑Cys；所述的促胶原分泌超短肽Purin‑WH3：一种直链小肽，分子量为672.88Da，等电点是9.31，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构为Val‑Val‑Lys‑Cys‑Pro‑Lys。

【技术特征摘要】
1.一类促胶原分泌超短肽，包括两种促胶原分泌超短肽：Magin-FL和Purin-WH3，其特征在于：所述的促胶原分泌超短肽Magin-FL：一种直链小肽，分子量为1205.42Da，等电点是9.02，含有10个氨基酸残基，全序列的一级结构为Phe-Phe-Arg-Thr-Ser-Cys-Arg-Ser-Val-Cys；所述的促胶原分...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海宁，王慧，王义鹏，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21