一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的含量测定方法技术

本发明专利技术提供了一种天花粉或含天花粉为原料制备成药物的含量测定方法，它是采用HPLC指谱图谱检测，其操作步骤如下：a、供试品溶液的制备：取待检样品，加入稀乙醇，超声处理20min‑40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b、参照物溶液的制备：取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：以苯基‑己基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑水(4‑10:90‑96)为流动相；流速为：0.8‑1.2ml/min；柱温25‑35℃；检测波长为224nm；理论板数按色氨酸峰计应不低于3000。本发明专利技术检测天花粉中色氨酸的含量，操作性强、样品处理过程简单、流动相简单，重复性高，检测时间短。

A method for determination of trichosanthin or trichosanthin-containing drugs

The invention provides a method for determining the content of Trichosanthes or Trichosanthes containing Trichosanthes as raw materials, which is determined by fingerprint of high performance liquid chromatography. Its operation steps are as follows: A. preparation of sample solution: taking the sample to be tested, adding dilute ethanol, ultrasonic treatment for 20 minutes to 40 minutes, cooling, weighing, filling the lost weight with dilute ethanol, shaking, filtering and extracting the filtrate; (b) Preparation of reference solution: take appropriate amount of tryptophan reference solution, weigh it precisely and add dilute ethanol solution, then get it; C. Precise absorption of reference solution and injection of test solution into liquid chromatography, respectively, and elution with acetonitrile and water as mobile phase. The chromatographic conditions are as follows: phenyl-hexamethylsilane bonded silica gel as filler; acetonitrile-water (4_10:90 96) as flow. Phase; flow rate: 0.8 1.2 ml/min; column temperature: 25 35 C; detection wavelength: 224 nm; theoretical plate number according to tryptophan peak should not be less than 3000. The invention detects tryptophan content in trichosanthin, has strong operability, simple sample processing process, simple mobile phase, high repeatability and short detection time.

【技术实现步骤摘要】
一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的含量测定方法
本专利技术涉及一种天花粉或含天花粉为原料制备的药物的含量测定方法。
技术介绍
天花粉是历史悠久、使用广泛的中药，具有清热生津、排脓消肿的功效。天花粉蛋白具有引产、抗肿瘤的功效。2005年版《中华人民共和国药典(一部)》收载的天花粉为葫芦科植物栝楼Tri-chosantheskirilowiiMaxim.或双边栝楼TrichosanthesUnifloraHao的干燥根，主产于河南、山东、江苏、贵州、安徽等地。目前全国各地所用天花粉的原植物很多，不同植物来源的天花粉的疗效不完全一样，某些伪品还有一定的不良反应。目前报道的天花粉的检测方法较多，如鲁建江，天花粉多糖的提取及含量测定，天津药学，2001年4月第13卷第2期，从天花粉中提取多糖并测定其含量。方法:用水提醇沉法提取天花粉多糖,用酚-硫酸比色法测定多糖含量。该实验证明天花粉多糖含量不是很高,提取方法有待进一步改进。彭朝霞，HPLC测定天花粉中葫芦素B的含量，中国现代应用药学杂志2009年11月第26卷第11期，由于葫芦素B具有较大毒性，其毒性反应是与其剂量密切相关的。该文献公开了检测天花粉中葫芦素B的方法，有文献报道采用氨基酸作为天花粉中的检测指标，如：曹敏，等，薄层色谱法鉴别天花粉及其相似品的氨基酸，传统医药，正品天花粉在瓜氨酸和丙氨酸对照品色谱相应结果位置上显相同的紫红色斑点，大苞栝楼的根则在丙氨酸对照品色谱处无相应斑点。杨玉琴，等，不同产地天花粉药材中瓜氨酸的含量，时珍国医国药2009年第20卷第6期，对15个不同产地的天花粉药材进行瓜氨酸含量测定,在含量上有一定差异,但贵州天花粉中瓜氨酸含量较高,且生长周期越长瓜氨酸含量就越高。天花粉中含有较多的氨基酸成分，已有检测方法的有瓜氨酸、γ-氨基丁酸(刘文，天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸的含量测定)，采用柱前衍生反相高效色谱峰进行检测，样品处理过程较复杂。此外，色氨酸也是植物体内生长素生物合成重要前体物质，在高等植物中普遍存在，同时，色氨酸被广泛应用于饲料中(宋吉英，HPLC法测定玉米蛋白粉和乳猪教槽料中色氨酸的含量)采用0.0085mol/L乙酸钠：甲醇(95:5)。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了一种天花粉或含天花粉为原料制备成药物的含量测定方法。本专利技术提供一种天花粉或含天花粉为原料制备成药物的含量测定方法，它是采用HPLC指谱图谱检测，其操作步骤如下：a、供试品溶液的制备：取待检样品，加入稀乙醇，超声处理20min-40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b、参照物溶液的制备：取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：以苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(4-10:90-96)为流动相；流速为：0.8-1.2ml/min；柱温25-35℃；检测波长为224nm；理论板数按色氨酸峰计应不低于3000。进一步优选地，所述的药物包括天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒。进一步优选地，a步骤超声条件为：功率600W，频率40kHz；超声时间20min。其中，c步骤所述的苯基-己基硅烷键合硅胶填充剂柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。其中，所述的天花粉药材含量测定方法为：a、供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过即得；b、色谱条件与系统适用性试验以苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以乙腈-水(4:96)为流动相；检测波长为224nm。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000；c、对照品溶液的制备取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；d、测定法精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。其中，所述的天花粉标准汤剂含量测定方法为：a、供试品溶液的制备取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过即得；b、对照品溶液的制备取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；c、色谱条件与系统适用性试验以苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以乙腈-水(5:95)为流动相；检测波长为224nm。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000；d、测定法精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本专利技术首次确定天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒中有色氨酸成分；采用高效液相色谱的方法将天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒中色氨酸分开，进行测定；建立天花粉药材、汤剂、配方颗粒中色氨酸的检测方法。本专利技术选择苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，改变了惯用的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以色氨酸的分离情况为指标，苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱较十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱分离效果更好，色氨酸峰峰形更好，流动相组分的比例更简单。本专利技术检测天花粉中色氨酸的含量，操作性强、样品处理过程简单、流动相简单，重复性高，检测时间短。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1色氨酸紫外吸收光谱图图2流动相1：10％乙腈-90％水图3流动相2：8％乙腈-92％水图4流动相3：4％乙腈-96％水图5不同柱温考察结果图6不同流速考察结果图7提取溶剂考察结果图8提取方式考察结果图9提取时间考察结果图10进样量考察图11天花粉药材专属性考察图12色氨酸标准曲线图图13不同仪器考察图14色谱柱耐用性考察结果图15流动相1：10％乙腈-90％水图16流动相1：8％乙腈-92％水图17流动相1：5％乙腈-95％水图18色氨酸紫外吸收光谱图图19柱温考察结果图20流速考察结果图21提取溶剂考察结果图22提取方式考察结果图23提取时间考察结果图24溶剂加入量考察图25进样量考察图26天花粉标准汤剂专属性考察图27色氨酸标准曲线图图28不同仪器考察图29色谱柱耐用性考察结果具体实施方式实施例1本专利技术天花粉药材含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以乙腈-水(4:96)为流动相；检测波长为224nm。理论板数按色氨酸峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天花粉或含天花粉为原料制备成药物的含量测定方法，其特征在于：它是采用HPLC指谱图谱检测，其操作步骤如下：a、供试品溶液的制备：取待检样品，加入稀乙醇，超声处理20min‑40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b、参照物溶液的制备：取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：以苯基‑己基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑水(4‑10:90‑96)为流动相；流速为：0.8‑1.2ml/min；柱温25‑35℃；检测波长为224nm；理论板数按色氨酸峰计应不低于3000。

【技术特征摘要】
1.一种天花粉或含天花粉为原料制备成药物的含量测定方法，其特征在于：它是采用HPLC指谱图谱检测，其操作步骤如下：a、供试品溶液的制备：取待检样品，加入稀乙醇，超声处理20min-40min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b、参照物溶液的制备：取色氨酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液，即得；c、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以乙腈、水为流动相进行洗脱，其色谱条件为：以苯基-己基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(4-10:90-96)为流动相；流速为：0.8-1.2ml/min；柱温25-35℃；检测波长为224nm；理论板数按色氨酸峰计应不低于3000。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的药物包括天花粉药材、天花粉标准汤剂、天花粉配方颗粒。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：a步骤超声条件为：功率600W，频率40kHz；超声时间20min。4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：c步骤所述的苯基-己基硅烷键合硅胶填充剂柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。5.根据权利要求1-4任意一项所述的测定方法，其特征在于：所述的天花粉药材含量测定方法为：a、供试品溶液的制备取天花粉药材粉末，过三号筛，精密称定，置具...

【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，胡昌江，张玉婷，戴德蓉，李文兵，周维，冯健，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51